एक प्रौढ़ चूहा दिल से उच्च गुणवत्ता वाले कार्डियोमायोसाइट्स, एंडोथेलियल सेल और फाइब्रोब्लस्ट्स के साथ-अलगाव
Summary
चूहे के दिल से विभिन्न हृदय कोशिका प्रकारों के अलगाव के लिए कई प्रोटोकॉल विकसित और वर्णित किए गए हैं। यहां एक अनुकूलित प्रोटोकॉल का वर्णन किया गया है जो प्रायोगिक लागतों को कम करने, एक ही तैयारी से उच्च-गुणवत्ता प्रमुख कार्डियक सेल प्रकार (कार्डियोयोमोसाइटोइट्स, एंडोथेलियल कोशिकाएं और फाइब्रोब्लैस्ट्स) के अलगाव की अनुमति देता है।
Abstract
चूहा एक महत्वपूर्ण जानवर मॉडल है जो हृदय संबंधी अनुसंधान में उपयोग किया जाता है, और कार्डियोवस्कुलर रोग की प्रगति जैसे कि हृदय संबंधी अतिवृद्धि, फाइब्रोसिस और एथेरोस्लेरोसिस के आणविक तंत्र के इन विट्रो विश्लेषण के लिए चूहे कार्डियक कोशिकाओं को नियमित रूप से उपयोग किया जाता है। यद्यपि इन सेलुलर तंत्रों को समझने के लिए कार्डियोवस्कुलर सिस्टम से अमर कोशिकाओं को विकसित करने के लिए चरणीय सफलता के कई प्रयास किए गए हैं, हालांकि प्राथमिक कोशिकाओं ने इस तरह के अध्ययनों के लिए विवो पर्यावरण में और अधिक प्राकृतिक और निकटता प्रदान की है। इसलिए, किसी विशेष सेल प्रकार पर काम करने वाले विभिन्न प्रयोगशालाओं ने हितों के व्यक्तिगत प्रकार के चूहा कार्डियक कोशिकाओं को अलग करने के लिए प्रोटोकॉल विकसित किए हैं। एक प्रोटोकॉल जो एक से अधिक सेल प्रकार के अलगाव की अनुमति देता है, हालांकि, अनुपलब्ध है। यहां एक अनुकूलित प्रोटोकॉल का वर्णन किया गया है जो एक ही तैयारी से उच्च-गुणवत्ता प्रमुख कार्डियक सेल प्रकार (कार्डियोयोमोसाइटोइट्स, एंडोथिलियल कोशिकाएं, और फाइब्रोब्लास्ट) के अलगाव की अनुमति देता है और सक्षम बनाता हैसेलुलर विश्लेषण के लिए उपयोग करें इससे उपलब्ध संसाधनों का सबसे कुशल उपयोग परमिट होता है, जो समय की बचत कर सकता है और अनुसंधान लागत को कम कर सकता है।
Introduction
स्वास्थ्य और रोग में कार्डियोवस्कुलर फिजियोलॉजी की हमारी समझ को व्यापक बनाने के लिए कृत्रिम मॉडेल्स का इस्तेमाल लंबे समय तक किया गया है। 1 हालांकि इन जानवरों के मॉडल हमें अंग के स्तर पर बीमारी के पैथोफिसियोलॉजी को समझने और कार्डियोवस्कुलर रोगों का इलाज करने के लिए प्रयुक्त विभिन्न औषधीय एजेंटों के फार्माकोकाइनेटिक्स और फार्माकोडायनामिक्स का विश्लेषण करने के लिए अनुमति देते हैं, हृदय रोग के विकास के आणविक तंत्र की समझ और विशेष रूप से योगदान सेल प्रकार इन विट्रो सेल संस्कृति मॉडल के उपयोग की आवश्यकता है। इस प्रयोजन के लिए कार्डियोवास्कुलर सिस्टम से अलग-अलग अमर सेल लाइनें विकसित की गई हैं; 2 , 3 हालांकि, नए सिरे से अलग-अलग प्राथमिक कोशिका भौतिक और शारीरिक रूप से जीवित ऊतकों और जीवों के लिए अधिक प्रासंगिक हैं।
हृदय एक बहुमुखी अंग है जिसमें हृदय संबंधी सभी प्रमुख प्रकार के कोशिकाएं होती हैंयकृत, और हृदय हृदय अभी भी हृदय संबंधी शरीर विज्ञान की समझ के लिए एक सामान्यतः इस्तेमाल किया मॉडल है। पिछले कुछ दशकों के दौरान, हृदय कोशिकाओं से अलग-अलग सेल प्रकारों के अलग-अलग तरीकों का वर्णन किया गया है; 4 , 5 , 6 , 7 हालांकि, ये पद्धति केवल एक विशिष्ट सेल प्रकार के अलगाव पर ध्यान केंद्रित करते हैं जिसके परिणामस्वरूप अन्य प्रकार के कोशिकाओं के नुकसान हो सकते हैं जो अब सेलुलर विश्लेषण के लिए उपयोग नहीं किए जा सकते हैं। यहां, एक अनुकूलित प्रोटोकॉल का वर्णन किया गया है जो प्रमुख सेल प्रकार के हृदय के ऊतकों, यानी कार्डियओमायोसाइट्स, एंडोथेलियल कोशिकाओं, और फाइब्रोब्लैस्ट्स के युगपत और उच्च गुणवत्ता अलगाव को सक्षम बनाता है। इन सभी प्रकार की कोशिकाओं का इस्तेमाल विभिन्न प्रायोगिक सेटअप 8 , 9 , 10 में किया जा सकता है और एक ही जानवर से सेल-सेल इंटरैक्शन के विश्लेषण के लिए किया जा सकता है।
Protocol
Representative Results
Discussion
इस लेख में, कार्डियक मायोकॉइट्स, एंडोथेलियल कोशिकाओं और फाइब्रोब्लैस्ट्स के अलगाव और संस्कृति के लिए एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य प्रोटोकॉल का वर्णन किया गया है। यह प्रोटोकॉल केवल एक कोशिका प्र…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
एल। रैनलडी, एस। स्कैफ़र, डी। रीट्स, एच। थॉमस और ए। वेबर की तकनीकी सहायता की सराहना की गई है। लेखक पांडुलिपि के व्यापक प्रमाण पढ़ने और भाषा संपादन के लिए डॉ। ई। मार्टिन्सन को भी धन्यवाद देना चाहते हैं। इस अध्ययन को एमएस असलम और डी। गुंडुज़ को जीससन एज़ेब्ब्सफिनानजीरंग अनुदान के लिए विश्वविद्यालय द्वारा समर्थित किया गया था।
Materials
| anti-vWF | Santa Cruz Biotech. | SC-14014 | |
| Calcium chloride | Merck | 102378 | |
| Carnitin | Sigma-Aldrich | C0283 | |
| Collagenase type II | Worthington | LS004176 | |
| Creatin | Sigma-Aldrich | C0780 | |
| D-Glucose | Merck | 108342 | |
| Dil-Ac-LDL | Thermo Scientific | L3484 | |
| EDTA Solution (0.2 M) | Biochrome AG | L2113 | |
| Embeding solution | Citiflour | AF1-25 | |
| Endothelial cell medium MV2 | PromoCell | C-22022 | |
| Foetal calf serum (FCS) | Biochrome AG | S0615 | |
| Gentamicin | Serva Chemicals | 47991 | |
| HEPES | Sigma-Aldrich | H0887 | |
| Isoflurane | Abbott | TU 061219 | |
| Laminin | Roche/Sigma | 11243217001 | |
| M199 medium | Thermo Scientific | 11150059 | |
| M199 medium (Powder) | Biochrome AG | T061 | |
| Magnesium sulphate | Sigma-Aldrich | 63138 | |
| Mouse anti-rat CD31 antibody (TLD-3A12) | Thermo Scientific | MA1-81051 | |
| NaCl solution (0.9%), Sterile | B. Braun | 30820080 | |
| Pan mouse IgG beads (Dynabeads) | Thermo Scientific | 11041 | |
| Paraformaldehyde (PFA) 4% Solution | Santa Cruz Biotech. | sc-281692 | |
| Penicillin-Streptomycin | Thermo Scientific | 15070-063 | |
| Phosphate buffer saline (PBS) 1x | PAN-Biotech | P04-36500 | |
| Plastic consumables | Greiner Bio-One | ||
| Potassium Chloride | Merck | 4933 | |
| Potassium dihydrogen phosphate | Merck | 7873 | |
| Sodium Chloride | Merck | 6404 | |
| Sodium Hydroxide Solution (2 N) | Merck | 109136 | |
| Sterile filtration system | Thermo Scientific | 5660020 | |
| Taurine | Sigma-Aldrich | T8691 | |
| TO-PRO | Thermo Scientific | T3605 | |
| Trypsin-EDTA Solution (10X) | Sigma-Aldrich | T4174 | |
| Water, Sterile | B. Braun |
Riferimenti
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