संभावित cytoplasm रिप्लेसमेंट थेरेपी के लिए अस्थि मज्जा Mesenchymal स्टेम कोशिकाओं से प्लाज्मा झिल्ली Vesicles की तैयारी
Summary
आयु संबंधी रोग कोशिका द्रव्य के घटकों में कई दोषों से जुड़े हैं। यहां, हम अस्थि मज्जा मेसेनचिमल स्टेम सेल से प्लाज्मा झिल्ली के vesicles तैयार करने के लिए प्रोटोकॉल पेश करते हैं। यह तकनीक संभावित रूप से आयु-संबंधित फेनोटॉप्स को सुधारने या रिवर्स करने के लिए साइटोप्लाज्म रिप्लेसमेंट थेरेपी के साधन के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है।
Abstract
हमने पहले स्तनधारी कोशिकाओं के मैकेनिकल एक्सट्रूज़न के जरिए प्लाज्मा झिल्ली के vesicles (पीएमवी) की पीढ़ी के बारे में बताया है। एमआईटीचोन्ड्रियल की कमी वाले Rho0 कोशिकाओं के साथ पीएमवी का संलयन सामान्य संस्कृति की स्थिति के तहत mitotic गतिविधि बहाल। एथ्रोस्क्लेरोसिस, टाइप 2 डायबिटीज, अल्जाइमर रोग, और कैंसर आयु से संबंधित बीमारियों है जो साइटोसोल में कई मैकेनिकल और कार्यात्मक दोषों और विभिन्न प्रकार के सेल प्रकार के अंगों से जुड़ा हुआ है। अस्थि मज्जा मेसेनचिमल स्टेम कोशिका (बीएमएससी) अस्थि मज्जा से एक अनूठी सेल आबादी का प्रतिनिधित्व करते हैं जो कि उनकी बहुतायत को बनाए रखते हुए स्वयं-नवीकरण क्षमता रखती हैं। पीएमवी के संलयन के माध्यम से ऑटोलॉगस बीएमएससी से युवा कोशिका कोशिकाओं के साथ सिनसेंस कोशिकाओं की पूर्ति से उम्र-संबंधित फेनोटाइप सुधारने या रिवर्स करने के लिए एक आशाजनक दृष्टिकोण भी प्रदान करता है। यह प्रोटोकॉल 3 के साथ पॉली कार्बोनेट झिल्ली के माध्यम से बीएमएससी से पीएमवी तैयार करने के तरीके का वर्णन करता है1; मी pores, मिटोकोंड्रिया के अस्तित्व का निर्धारण करते हैं और पीएमवी में एक confocal सूक्ष्मदर्शी का उपयोग करते हुए झिल्ली की क्षमता के रखरखाव की जांच, पीएमवी को केन्द्रित करके केंद्रित करता है, और पीवीवी के विवो इंजेक्शन में चूहों के गैस्ट्रोकैनिएशिया पेशी में काम करता है।
Introduction
जीन, एंजाइम, और सेल प्रतिस्थापन उपचार के लिए तरीकों को स्थापित करने के लिए एक जबरदस्त प्रयास किया गया है। यह महान सफलताओं और यहां तक कि नैदानिक आवेदन 1 , 2 , 3 में हुई है । हाल ही में, न्यूक्लियस ट्रांसफर तकनीक पर आधारित एक विवादास्पद मिटोकॉन्ड्रिया रिप्लेसमेंट थेरॉन्ग को बुढ़ापे की महिलाओं के लिए इन विट्रो निषेचन में लागू किया गया था या घातक मिटोचांड्रियल डीएनए उत्परिवर्तन 4 रखा गया था । आयु-संबंधी रोगों में पाया गया दोष, एथ्रोस्कोलेरोसिस, टाइप 2 डायबिटीज़, अल्जाइमर रोग और कैंसर, आमतौर पर बहुआयामी हैं। यह प्रलेखित किया गया है कि लिपिड बूंदों का संग्रह; Amyloid प्रोटीन के बयान; एंडोप्लाज्मिक रेटिकुलम में खुला प्रोटीन का प्रतिधारण; और इन बीमारियों के विकास या उत्तेजना में दोषपूर्ण proteasome, autophagosome, और mitochondria योगदान"Xref"> 5 , 6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 वर्तमान में, साइटोसोल और ऑर्गेनल्स में खराबी के प्रत्यक्ष उपाय करने के उद्देश्य से कोई उपलब्ध तंत्र नहीं है, जिसके कारण जननेंद्रिय और वृद्धावस्था के फ़िनोटाइप होते हैं।
हमने पहले स्तनधारी कोशिकाओं 12 के मैकेनिकल एक्सट्रूज़न के जरिए प्लाजमा झिल्ली vesicles (पीएमवी) की पीढ़ी पर सूचना दी है। नाभिक के अपवाद के साथ, प्रोटीन और आरएनए सहित झिल्ली या साइटोसोल के घटकों, साथ ही साथ ऑक्सीन, जैसे कि मिटोचंद्रिया, पीएमवी में पाए गए थे। मूलतः, एक पीएमवी को लघु इंबेक्लेक्टेड सेल के रूप में माना जा सकता है। इससे भी महत्वपूर्ण बात, एमआईटीचोन्द्रिया की कमी वाली पीएचवी की कोशिकाओं की संलयन सामान्य संस्कृति परिस्थितियों में मित्सुशीय क्रियाकलाप को बहाल कर रहा है। यह स्थापित होने पर पहली रिपोर्ट हैCytoplasm रिसेप्शन थेरेपी के लिए एक संभावित रूप से कुशल तरीके से शिंग
अस्थि मज्जा मेसेनचिमल स्टेम सेल (बीएमएससी) बहुसंकेतक पूर्वज कोशिकाएं हैं जो नियमित रूप से अस्थि मज्जा से उत्पन्न होती हैं और संस्कृति में आसानी से विस्तारित होती हैं। एमएससीएस 13 में कम स्तर पर भ्रूण स्टेम सेल मार्करों Oct4, Nanog, और SOX2 का पता चला है। टेलोमेरेस गतिविधि भी औसत दर्जे का है। इसके अलावा, सह-उत्तेजक अणुओं और मानव लियोकाइट एंटीजन (एचएलए) कक्षा II के अणुओं के अभाव, साथ ही साथ एमएससी पर एचएलए क्लास I की कम अभिव्यक्ति, उन्हें एलोजेनिक के लिए आदर्श कोशिकाओं या "ऑफ-द-शेल्फ" का उपयोग करते हैं दोनों पुनर्योजी दवाओं और immunomodulatory अनुप्रयोगों 14
यहां, हम यह बताते हैं कि 3 बीएमसीसी पॉइरो के साथ पॉलीकार्बोनेट झिल्ली के माध्यम से एमओएम बीएमएससी से पीएमवी तैयार करने के तरीके, एमटोचोन्द्रिया के अस्तित्व का निर्धारण करते हैं और पीएमवी में एफएमओ में ट्रांसकॉन्मेंट का इस्तेमाल करते हैं।अल माइक्रोस्कोपी, केन्द्रित किया जाता है लेकिन केंद्रित पीएमवी को केन्द्रित करने के लिए तैयार नहीं है, और पीआईवी के विवो इंजेक्शन में चूहों के गैस्ट्रोकैनेमियस मांसपेशी में काम करता है।
Protocol
Representative Results
Discussion
Cytoplasm replacement therapy as proposed in this manuscript has unique advantages over other reported approaches such as gene, molecular, and cell therapy. PMVs generated from BMSCs encapsulate not only the products of stemness genes but also intact cellular organelles, which are essential to remedy the ageing phenotypes associated with senescence. When young cytoplasm is delivered to senescent cells, the malfunctioning mechanisms may gain a brief relief; at the same time, the epigenome could be reprogrammed and invigor…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस शोध को ली का शिंग फाउंडेशन, गुआंग्डोंग हाई-लेवल यूनिवर्सिटी प्रोजेक्ट "ग्रीन टेक्नोलॉजीज फॉर मरीन इंडस्ट्रीज," चीन के प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (http://www.nsfc.gov.cn/ ग्रांट नंबर 30 9 71665, 81172894, 81370 9 25), और ग्वांगडोंग शिक्षा विभाग (http://www.gdhed.edu.cn/ ग्रांट नं। सीसीजेड 1123)।
Materials
| IsoporeTM membranes | Millipore | TSTP04700 | 3 mm pore |
| Disposable filter unit | Xinya, Shanghai, China | 25 mm | Medical grade polypropylene |
| Insulin syringe | BD | 328446 | 1 ml |
| pN1-EGFP | Clontech | 6085-1 | |
| MitoTracker | Molecular Probes | M7514 | Green FM, 1 μM |
| JC-1 | Beyotime, Haimen, China | C2006 | 10 mg/ml |
| CM-DiI | Beyotime, Haimen, China | C1036 | 10 mM |
| PEI | Sigma | P3143 | Mn = 75000 |
| Fluorescence Microscope | Nikon | Eclipse TE 2000 | With CCD camera |
| Confocol Microscope | Carl Zeiss | LSM 510 Meta | |
| PolyJet | SigaGen | SL100688 | For cell transfection |
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