Questo protocollo descrive il processo di valutazione della guarigione tendini in ratti che sono stati iniettati con plasma ricco di piastrine allogeniche (PRP) o soluzione salina dopo la rimozione di parte del tendine di Achille. L'andamento del tendine che guarisce è valutato a diversi intervalli di tempo utilizzando diversi tipi di analisi.
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Articolo metodologico
Gli effetti del trapianto Allogeneic Plasma ricco di piastrine (PRP) sul processo di guarigione dei tendini di Achilles sezionato dei ratti: una descrizione metodologica
In questo articolo
Sommario
Abstract
Questo articolo descrive le procedure sperimentali utilizzate per osservare se PRP può influenzare positivamente la guarigione del tendine. Ci sono 4 principali passi da seguire: indurre una lesione nel tendine di Achille; PRP di preparare ed iniettare (o soluzione salina); rimuovere il tendine; ed eseguire valutazioni biomeccaniche, molecolari ed istologiche. Ad ogni passo, tutte le procedure e i metodi sono descritti in dettaglio, quindi possono essere riprodotti facilmente.
Tendini di Achilles sono stati chirurgicamente sezionata (rimozione di una sezione di lunghezza di 5 mm). In seguito, PRP o soluzione salina è stata iniettata per studiare se PRP ha un effetto positivo sulla guarigione del tendine. Tre gruppi di 40 animali (un totale di 120 ratti sono stati utilizzati in questo studio) sono stati suddivisi in 2 sottogruppi: gruppo di controllo di gruppo di iniezione di PRP e un'iniezione salina. Ratti sono stati sacrificati ad aumentare i punti temporali (gruppo a: 5 giorni; Gruppo b: 15 giorni; Gruppo c: 30 giorni) e tendini sono stati rimossi. 90 tendini hanno subito la prova biomeccanica prima di eseguire analisi trascrittomica e 30 restanti tendini sono stati sottoposti ad analisi istologica.
Introduzione
Coagulazione, processi infiammatori e i ruoli di modulazione di immunità delle piastrine sono ben noti1. Più recentemente, è stato dimostrato che hanno anche proprietà lenitive2,3. Infatti, diversi fattori di crescita e citochine (VEGF, PDGF, TGF-B, IGF-I e HGF) vengono rilasciati dalle piastrine durante la degranulazione. Questi fattori di crescita promuovono l'angiogenesi, rimodellamento tissutale e ferita guarigione (ossa, pelle, muscolo, tendine)2. Centrifugazione del sangue autologo produce plasma ricco di piastrine (PRP) che contiene concentrazioni piastrin....
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Protocollo
Cura e manipolazione degli animali sono state eseguite in conformità con la guida per la cura e uso di animali da laboratorio a cura dell'Accademia nazionale delle scienze e pubblicato da istituti nazionali di salute (USA). Legislazione europea e nazionale sono stati seguiti attentamente.
1. animale preparazione
- Utilizzare 132 2 - mesi-vecchio maschi ratti Sprague-Dawley 320-450 grammi (120 ratti per la sperimentazione) e 12 ratti per il prelievo di sangue, Figura 1. Basato su Dell13, 15 ratti per ogni gruppo è stato sufficiente per una potenza pari a 0,8 (80% di possibilità di....
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Risultati
I risultati sono espressi come media ± deviazione standard di media e sono stati confrontati con analisi della varianza (ANOVA). Un ANOVA a due vie e post hoc test de Scheffe, che è un test parametrico, sono stati utilizzati.
La resistenza ultima a trazione (UTS) necessaria per provocare una rottura dei tendini d'Achille non-ferito di ratti era 42.0 ± 5,7 N (n = 10). La resistenza alla trazione è aumentato significativa.......
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Discussione
Le piastrine sono essenziali per la fase infiammatoria iniziale del tendine del processo di guarigione. Quando queste piastrine sono esposti all'associazione di tessuto o fattori che inducono la coagulazione, rilasciano fattori di crescita che sono immagazzinati nei granuli α. A causa di questa interazione, macromolecole della matrice extracellulare sono sintetizzati e cellule mesenchimali proliferano. Le piastrine hanno anche un'attività chemiotattica su cellule progenitrici nella circolazione sanguigna, migliorando l'a.......
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Dichiarazioni
Conflitti di interesse non dichiarati.
Ringraziamenti
Questo studio è stato sostenuto da Standard de Liège e Lejeune - Lechien concede dei fondi Frédéricq Leon.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Xilazina (Xyl-M) | VMD | nessuno | anestetico |
| Ketamin (Jé tamine 1000 CEVA) | CEVA Santé Animale | non | anestetico |
| Buprenorfina (Vetergé sic Multidosis) | ALSTOE | none | Antidolorifico |
| iso-Betadine | MEDA-Pharma | none | Desinfectant |
| filato riassorbibile Vicryl 6/0 | Johnson & | ||
| Nembutal | CEVA Santé Animale | none | Anestetico |
| Paraformaldeide | Sigma-Aldrich | P6148 | Preserva la struttura del tessuto |
| Isopropanolo 100% | VWR | 20,922,364 | |
| Etanolo 95% | VWR | 20,823,362 | |
| Xilene | VWR | 28973.363 | |
| Paraffina | VWR | LEIC3950.1006 | |
| Ematossilina | Millipore | 1.15938.0025 | Colorante |
| eosina | Millipore | 1.15935.0100 | Colorante |
| Eukitt | Sigma-Aldrich | 3989 | Mezzo di montaggio |
| CaCl2 |
Riferimenti
- Kaux, J., Degrave, N., Crielaard, J. Platelet rich plasma traitement des tendinopathies chroniques? Revue de la littérature. Platelet rich plasma treatment of chronic tendinopathies? Review of literature. J. Traumatol. du Sport. 24, 99-102 (2007).
- Anitua, E., et al.
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Ristampe e permessi
