शूल विश्लेषण पद्धति का उपयोग करते हुए चूहा स्तन ग्रंथक पूरे माउंट में शाखाओं की घनत्व को बढ़ाते हुए
Summary
कृन्तक में स्तन ग्रंथि का विकास आम तौर पर वर्णनात्मक मूल्यांकनों का उपयोग करके या बुनियादी भौतिक विशेषताओं को मापने के द्वारा मूल्यांकन किया गया है। शाखा घनत्व स्तन विकास के एक संकेतक है जो निष्पक्ष रूप से मापने के लिए मुश्किल है। यह प्रोटोकॉल स्तन ग्रंथि शाखाओं की विशेषताओं के मात्रात्मक आकलन के लिए एक विश्वसनीय पद्धति का वर्णन करता है।
Abstract
एक रासायनिक विस्तार की विकासशील विषाक्तता का आकलन करने के लिए एक बढ़ती हुई संख्या में कृत्रिम स्तन ग्रंथि का समापन बिंदु के रूप में उपयोग किया जा रहा है। स्तन के ग्रंथि विकास पर इन एक्सपोज़र्स के प्रभावों को आम तौर पर बुनियादी आयामी मापन या रूपात्मक विशेषताओं को स्कोरिंग करके मूल्यांकन किया जाता है। हालांकि, विकासात्मक परिवर्तनों की व्याख्या के लिए व्यापक तरीकों से प्रयोगशालाओं में असंगत अनुवाद हो सकते हैं। आकलन की एक सामान्य विधि की जरूरत है ताकि अध्ययनों में तुलना किए जा रहे आंकड़ों से उचित व्याख्याएं बनाई जा सकें। वर्तमान अध्ययन स्तन ग्रंथि शाखाओं की विशेषताओं को मापने के लिए शोल विश्लेषण विधि के आवेदन का वर्णन करता है। शोल पद्धति मूल रूप से न्यूरोनल वृक्ष के समान पैटर्न को मापने में उपयोग के लिए विकसित की गई थी। ImageJ, एक खुला स्रोत छवि विश्लेषण सॉफ्टवेयर पैकेज का उपयोग करके, और इस विश्लेषण के लिए विकसित एक प्लगइन, स्तन ग्रंथि शाखाओं घनत्व और की जटिलता हूँएक पेरिपुबर्टल मादा चूची से एमीरी ग्रंथि निर्धारित की गई थी। यहाँ वर्णित विधियां स्तन ग्रंथि विकास के एक महत्वपूर्ण लक्षण को मापने के लिए प्रभावी उपकरण के रूप में शोल विश्लेषण का उपयोग करने में सक्षम होगी।
Introduction
स्तन ग्रंथि शाखाएं एक विशेषता है जिसे सामान्यतः ग्रंथि के विकास के एक संकेतक के रूप में मूल्यांकन किया जाता है, लेकिन निष्पक्ष मात्रा में मापना मुश्किल है। 1 9 53 में, शोल 1 ने बिल्ली के दृश्य और मोटर कॉरटेस में न्यूरोनल वृक्ष के समान आकृति को मापने के लिए एक विधि का वर्णन किया और इस तकनीक का एक प्लगरी फेरिएरा एट अल 2 द्वारा विकसित किया गया था। क्योंकि दोनों न्यूरॉन्स और स्तन ग्रंथियां एक समान वृक्ष की तरह की संरचना को प्रदर्शित करते हैं, प्लगइन पेरीपाउबरल चूहे स्तन ग्रंथि के 2 डी छवियों में स्तन उपकला शाखाओं में घनत्व को मापने के लिए नियोजित किया गया था। पेरिप्यूबरल अवस्था का विश्लेषण करने के लिए चुना गया था क्योंकि दूध पिलाने का एक जीवन स्तर है जिसे अक्सर अकादमिक प्रयोगशालाओं में मूल्यांकन किया जाता है और परीक्षण दिशानिर्देशों का अध्ययन किया जाता है। शोल विश्लेषण फ़ेजी के साथ वितरित एक प्लगइन है, जो ओपन-सोर्स इमेज प्रोसेसिंग पैकेज इमेजजे है, जिसमें अतिरिक्त प्लगइन्स शामिल हैं। प्लग-इन एक प्रीफेफ के घेरे में घूमने वाले घने रिंगों की एक श्रृंखला बनाता हैIned केंद्र (आमतौर पर एक न्यूरॉन के सोम या एक स्तन ग्रंथि की प्राथमिक नलिका की उत्पत्ति) और ऑब्जेक्ट के बाहरी हिस्से (विस्तारित त्रिज्या) तक फैली हुई है। यह तब चौराहों की संख्या (एन) की गणना करता है जो प्रत्येक अंगूठी पर होते हैं। प्लगइन एक शोल प्रतिगमन गुणांक ( के ) भी देता है, जो उपकला शाखाओं के क्षय की दर का माप है।
ImageJ का उपयोग करते हुए, एक स्तन ग्रंथि पूर्ण-माउंट की एक कंकाल वाली छवि बनाई जाती है और स्तन उपकला क्षेत्र (MEA) मापा जाता है। शोल विश्लेषण प्लगइन का उपयोग करके छवि का विश्लेषण किया गया है, और एन और कश्मीर के मूल्यों, यहां उपयोग किए जाने वाले अन्य मूल्यों के साथ, लौटाए गए हैं। स्तन उपकला शाखाओं का घनत्व एन / एमईए की गणना के द्वारा निर्धारित किया जाता है। ग्रंथियों के उपकला के बाहरी क्षेत्रों में जो शाखाएं जारी रहती हैं वह शाखाएं शाखाओं की जटिलता है और वर्दी के बाहर का उपकला वृद्धि का एक संकेत है। के रूप में कश्मीर epith में बाहर की कमी का एक उपाय हैएली ब्रांचिंग, यह शाखाओं की जटिलता का एक प्रभावी उपाय है और स्तन विकास के एक विश्वसनीय संकेतक है।
इस प्रोटोकॉल में स्तन ग्रंथि पूरे माउंट के कंकालयुक्त चित्र बनाने और पेरिपुबर्टल नर और मादा की चूहों में स्तन शाखाओं की विशेषताओं का मात्रात्मक मूल्यांकन करने के लिए कंप्यूटर-सहायता पद्धति का वर्णन किया गया है। यह विधि अपेक्षाकृत तेजी से है और विशेष माइक्रोस्कोपी उपकरणों के उपयोग की आवश्यकता नहीं है। स्टैंको एट अल में इस विधि का विकास और सत्यापन किया गया है (2015) 3 यह रिपोर्ट भी चूहा स्तन ग्रंथि की तैयारी = पूरे mounts एसेसिस एट अल में इसी तरह के स्तन-समरूप माउंट प्रक्रियाओं का वर्णन किया गया है । (2010) 4 और प्लान्ट एट अल (2011) 5
Protocol
Representative Results
Discussion
जन्म से यौवन तक, स्तन ग्रंथि वृद्धि सभीोमेट्रिक है यौवन के बाद, स्तन ग्रंथि व्यापक नलिकात्मक शाखाओं और बढ़ाव के माध्यम से विकसित होती है, जब तक कि स्तन उपकला पूरी वसा वाले पैड पर नहीं रह जाती। शाखाओं की ?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस पद्धति और डॉ। टियागो फेरेरा (मैकगिल विश्वविद्यालय, मॉन्ट्रियल, क्यूबेक, कनाडा) की मान्यता के साथ अपनी सहायता के लिए लेखक डॉ। माइकल ईस्टरलिंग (सोशल एंड साइंटिफिक सिस्टम, इंक। डरहम, एनसी) को स्वीकार करना चाहते हैं। शोल आवेदन के साथ सहायता
Materials
| Dissecting board | NA | NA | A piece of styrofoam roughly 10"x12" is suitable. |
| Dissecting T-Pins | Daigger | EF7419A | |
| Spray bottle with ethanol | NA | NA | 70% ethanol is suitable. |
| Curved dissecting scissors | Fine Science Tools | 14569-09 | |
| Straight dissecing scissors | Fine Science Tools | 14568-09 | |
| Curved forceps | Fine Science Tools | 11003-12 | |
| Superfrost Plus 24x75x1 mm microscope slides | ThermoFisher Scientific | 4951PLUS-001 | Thermo Scientific Superfrost Plus & Colorfrost Plus slides hold tissue sections on permanently without the need for expensive coatings in IHC and Anatomical Pathology applications. This treatment reduces tissue loss during staining as well as hours of slide preparation. Slides electro-statically attract frozen tissue sections and cytology preparations and feature a chemistry similar to silane, although optimized to improve application performance. https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/4951PLUS4. |
| Fisherfinest Premium Cover Glass 24x60x1 mm | Fisher scientific | 12-548-5P | |
| Bemis Parafilm M Laboratory Wrapping Film | Fisher scientific | 13-374-12 | |
| Chloroform | Sigma-Aldrich | C2432 | |
| Glacial acetic acid | Sigma-Aldrich | A9967 | |
| Ethanol absolute, ≥99.8% (GC) | Sigma-Aldrich | 24102 | |
| Xylene | Sigma-Aldrich | 214736 | |
| Carmine alum | Sigma-Aldrich | C1022 | |
| Aluminum potassium sulfate | Sigma-Aldrich | A6435 | |
| Permount mounting media | Fisher Scientific | SP15 | |
| Macroscope | Leica | Z16 APO | This is the image capturing hardware and software used in this laboratory. As there are many different options, the methods and applications may vary between laboratories. |
| Digital camera | Leica | DFC295 | |
| Camera software | Leica | Leica Application Suite v3.1 | |
| ImageJ software | Open source | http://imagej.net/Welcome | |
| Sholl analysis | Open source | http://imagej.net/Sholl_Analysis |
Riferimenti
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