Lo sviluppo della ghiandola mammaria nel roditore è stato tipicamente valutato utilizzando valutazioni descrittive o misurando gli attributi fisici di base. La densità di derivazione è un indicatore dello sviluppo mammario che è difficile da quantificare in modo oggettivo. Questo protocollo descrive un metodo affidabile per la valutazione quantitativa delle caratteristiche di ramificazione delle ghiandole mammarie.
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Articolo metodologico
Quantificazione della densità di raggruppamento nelle ghiandole del mammella di ratto intere con il metodo di analisi di Sholl
In questo articolo
Sommario
Abstract
Un numero crescente di studi stanno utilizzando la ghiandola mammaria di roditore come un endpoint per valutare la tossicità dello sviluppo di un'esposizione chimica. Gli effetti che queste esposizioni hanno sullo sviluppo delle ghiandole mammarie sono tipicamente valutate utilizzando misure di dimensione basale o rilevando caratteristiche morfologiche. Tuttavia, l'ampia gamma di metodi per interpretare i cambiamenti nello sviluppo può portare a traduzioni incoerenti tra i laboratori. È necessario un metodo comune di valutazione in modo che possano essere formate delle correttive interpretazioni dai dati che vengono confrontati negli studi. Il presente studio descrive l'applicazione del metodo di analisi di Sholl per quantificare le caratteristiche di ramificazione delle ghiandole mammarie. Il metodo Sholl è stato originariamente sviluppato per l'uso nella quantificazione dei modelli neuronali dendritici. Utilizzando ImageJ, un pacchetto software di analisi di immagini open source e un plugin sviluppato per questa analisi, la densità di ramificazione della ghiandola mammaria e la complessità diLa ghiandola ammia da un ratto femminile peripubertale è stata determinata. I metodi qui descritti consentiranno l'utilizzo dell'analisi di Sholl come uno strumento efficace per quantificare una caratteristica importante dello sviluppo della ghiandola mammaria.
Introduzione
La ramificazione delle ghiandole mammarie è una caratteristica che comunemente viene valutata come indicatore dello sviluppo delle ghiandole, ma è difficile quantificare oggettivamente. Nel 1953, Sholl 1 descritto un metodo per misurare neuronale arborization dendritiche nella corteccia motorie e visive del gatto, e un plugin per questa tecnica è stata sviluppata da Ferriera et al 2. Poiché entrambi i neuroni e le ghiandole mammarie presentano una struttura simile ad albero, il plugin è stato impiegato per quantificare la densità di ramificazione epiteliale mammaria in immagini 2D della ghiandola mammaria del r....
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Protocollo
Tutti gli usi animali e le procedure per questo studio sono state approvate dal comitato di cura e uso degli animali di laboratorio NIEHS e condotte in un'Associazione per la valutazione e l'accreditamento della struttura accreditata per la cura degli animali da laboratorio.
1. Ghiandole mammarie di accisa
- Pre-etichettare tutte le diapositive utilizzando un metodo a prova di xilene (la matita funziona meglio). Coprire con una soluzione di montaggio alla fine per conservare l'etichetta.
- Eutanizzare l'animale da un metodo approvato dal Comitato istituzionale per la cura degli animali.
- Dopo l....
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Risultati
I valori per il raggio racchiuso misurato, MEA, N, k e la densità di ramificazione calcolata per la ghiandola mammaria analizzati in questo protocollo sono riportati nella tabella 1 . L'analisi di Sholl genera diagrammi lineari e semi-log del numero di intersezioni ad ogni raggio ( Figura 9 ) e, se selezionato, una mappa termica delle intersezioni ( Figura 10 ). Le ghiandole meno sviluppate presenta.......
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Discussione
Dalla nascita fino alla pubertà, la crescita delle ghiandole mammarie è allometrico. Dopo la pubertà, la ghiandola mammaria si sviluppa attraverso un'estesa ramificazione e allungamento dei dotti, che continuano fino a quando l'epitelio mammario occupa l'intero grasso di grasso. Le caratteristiche di ramificazione sono un aspetto importante dello sviluppo della ghiandola mammaria e la capacità di quantificare oggettivamente queste caratteristiche può essere estremamente utile per valutare lo sviluppo normale.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Gli autori vorrebbero riconoscere il dottor Michael Easterling (Social and Scientific Systems, Inc., Durham, NC) per la sua assistenza con la convalida di questo metodo e il dottor Tiago Ferreira (McGill University, Montreal, Quebec, Canada) per la sua continua Assistenza con l'applicazione Sholl.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Tavola da dissezione | NA | NA | Un pezzo di polistirolo di circa 10 "x12" è adatto. |
| T-Pins | Daigger | EF7419A | |
| etanolo | NA | NA | 70% etanolo. |
| Forbici da dissezione curve | Fine Science Tools | 14569-09 | |
| Forbici da dissezione diritte | Fine Science Tools | 14568-09 | |
| Pinze curve | Fine Science Tools | 11003-12 | |
| Superfrost Plus 24 x 75 x 1 mm vetrini per microscopio | ThermoFisher Scientific | 4951PLUS-001 | Thermo Scientific Superfrost Plus & I vetrini Colorfrost Plus trattengono le sezioni di tessuto in modo permanente senza la necessità di costosi rivestimenti nelle applicazioni IHC e di Anatomia Patologica. Questo trattamento riduce la perdita di tessuto durante la colorazione e le ore di preparazione del vetrino. I vetrini attraggono elettrostaticamente sezioni di tessuto congelato e preparazioni citologiche e presentano una chimica simile al silano, sebbene ottimizzati per migliorare le prestazioni dell'applicazione. https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/4951PLUS4. |
| Fisherfinest Premium Cover Glass 24 x 60 x 1 mm | Fisher scientific | 12-548-5P | |
| Bemis Parafilm M Pellicola da imballaggio da laboratorio | Fisher scientific | 13-374-12 | |
| Cloroformio | Sigma-Aldrich | C2432 | |
| Acido acetico glaciale | Sigma-Aldrich | A9967 | |
| Etanolo assoluto, ≥ 99,8% (GC) | Sigma-Aldrich | 24102 | |
| Xilene | Sigma-Aldrich | 214736 | |
| allume carminio | Sigma-Aldrich | C1022 | |
| Solfato di alluminio e potassio | Sigma-Aldrich | A6435 | |
| Supporti di montaggio | Permount Fisher Scientific | SP15 | |
| Macroscopio | Leica | Z16 APO | Questo è l'hardware e il software per l'acquisizione delle immagini utilizzati in questo laboratorio. Poiché esistono molte opzioni diverse, i metodi e le applicazioni possono variare da un laboratorio all'altro. |
| Fotocamera digitale | Leica | DFC295 | |
| Software della fotocamera | Leica | Leica Application Suite v3.1 | |
| Software ImageJ | delle http://imagej.net/Welcome | Sholl open source | |
| http://imagej.net/Sholl_Analysis | open source |
Riferimenti
- Sholl, D. A. Dendritic organization of the neurons in the visual and motor cortices of the cat. J Anat. 87 (4), 387-406 (1953).
- Ferreira, T. A., Iacono, L. L., Gross, C. T. Serotonin receptor 1A modulates actin dynamics and restricts dendri....
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Ristampe e permessi
