Questo protocollo descrive un metodo per raccogliere il liquido interstiziale cardiaco dal cuore isolato del ratto perfuso. Per separare fisicamente il transudato interstiziale dal perfusato effluente venoso coronarico, il cuore perfuso di Langendorff viene invertito e il liquido intradito (transversato) formato sulla superficie cardiaca viene raccolto usando un tappo morbido in lattice.
È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo metodologico
Il modello invertito del cuore per la raccolta di transudati interstiziali dal cuore isolato del ratto
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il presente protocollo descrive un approccio unico che consente la raccolta del transudato cardiaco (CT) dal cuore isolato del ratto perfuso-salino. Dopo l'isolamento e la perfusione retrograda del cuore secondo la tecnica Langendorff, il cuore viene invertito in posizione verticale e stabilizzato meccanicamente da un catetere a palloncino inserito nel ventricolo sinistro. Quindi, un cappuccio di lattice sottile - precedentemente gettato per abbinare la dimensione media del cuore del topo - è posto sopra la superficie epicardica. L'uscita del tappo in lattice è collegata al tubo di silicone, con l'apertura distale 10 cm sotto il livello base del cuore, creando una leggera aspirazione. Il CT prodotto continuamente sulla superficie epicardica è raccolto in flaconi raffreddati al ghiaccio per ulteriori analisi. Il tasso di formazione di CT variava da 17 a 147 μL / min (n = 14) nei cuori di controllo e infarto, che rappresenta lo 0,1-1% del perfusato venoso effusivo coronarico. Analisi proteomica e alto perfoLa cromatografia liquida rmance (HPLC) ha rivelato che la CT raccolta contiene un ampio spettro di proteine e metaboliti purinergici.
Introduzione
L'insufficienza cardiaca (HF) è la principale causa di morte negli esseri umani in tutto il mondo 1 . L'HF si verifica spesso a causa della miocardite, insulti ischemici al miocardio e rimodellamento ventricolare sinistro, che porta al progressivo deterioramento della funzione contrattile cardiaca e alla qualità della vita dei pazienti. Sebbene i progressi nella cardiologia e nella chirurgia cardiaca abbiano notevolmente ridotto la mortalità della HF, essi servono semplicemente come "ritardatori" transitori di un processo di malattia inevitabilmente progressivo che ha una grave morbosità. Pertanto, l'attuale mancanza di trattamento....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Protocollo
Tutti gli esperimenti sono stati approvati dall'agenzia locale di regolamentazione ( LANUV di Nordrhein-Westfalen, Germania) e sono state eseguite secondo le linee guida dell'uso animale. Gli animali sono stati nutriti con una dieta standard di chow e hanno ricevuto acqua di rubinetto ad libitum . Tutte le apparecchiature e le sostanze chimiche necessarie per ogni fase dell'esperimento sono disponibili nella Tabella dei Materiali .
1. Preparazione del tappo in lattice e del palloncino intraventricolare
- Fai uno stampo in alluminio usando una fresatrice che corrisponda alla dimension....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Risultati
Il modello a forma di cuore inversa permette di raccogliere il transudato interstiziale cardiaco in un cuore ratto isolato e retro-perfuso ( Figura 1A- C ). Quando si perfusione ad una pressione costante di 100 cmH2O, la velocità di formazione di fluidi interstiziali variava tra 17 e 147 μL / min, pari allo 0,1-1% dell'effluente venoso coronarico nel cuore isolato.
Il co.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Discussione
Il modello di cuore invertito si basa sulla ben nota tecnica di perfusione del cuore Langendorff 12 e viene eseguita semplicemente invertendo il cuore in una posizione capovolta e tenendo questa posizione utilizzando un rigido catetere a palloncino intra-ventricolare. In tal modo, il transudato interstiziale cardiaco può essere fisicamente separato dal perfusato effluente venoso coronarico, gocciolando per gravità dalla base del cuore 9 . La CT può essere raccolta in conti.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Dichiarazioni
Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti.
Ringraziamenti
Questo studio è stato finanziato da NSFC 81570244, FoKo 23/2013 e SFB 1116 / B01 e dall'Istituto di Ricerca Cardiovascolare Düsseldorf (CARID).
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Soluzione in lattice | ProChemie | Z-Latex LA-TZ | http://kautschukgesellschaft.de/%E2%80%A8z-latex-la-tz |
| Stampo in alluminio | Fatto in | casa-Modello | a cuore inverso |
| Forni universali | Memmert | UNB 400 | Modello a cuore inverso |
| Palloncino in lattice | Hugo Sachs | Taglia 4 | Modello a cuore inverso |
| Fresatrice | Proxxon | MF70 | Modello a cuore inverso |
| Cloruro di sodio | Sigma | SZBD0810V | Prodotti chimici |
| Carbonato acido di sodio | Roth | 68852 | Prodotti chimici |
| Cloruro di potassio | Merck | 49361 | Prodotti chimici |
| Solfato di magnesio eptaidrato | Merck | 58861 | Prodotti chimici |
| Diidrogeno fosfato di potassio | Merck | 48731 | Prodotti chimici |
| D(+)-glucosio anidro | Merck | 83371 | Prodotti chimici |
| Cloruro di calcio diidrato | Fluka | 21097 | Prodotti chimici |
| Bilancia VWR | SE 1202 | Prodotti chimici per la pesatura | |
| Acqua distillata doppia | dissoluzione dei | pori | |
| Trasduttore di pressione medico | Gold-Langendorff | apparecchio | |
| Sonda di flusso medica | Transonic | 3PXN | Apparecchio Langendorff |
| Riscaldamento Bagno di circolazione | Haake | B3 ; DC1 | Apparecchio Langendorff |
| Laboratorio e Vaccum Tubing | Tygon | R-3603 | Apparecchio Langendorff |
| Flussimetri per sperimentazione animale | Apparecchio Transonic | T206 | Langendorff |
| Dispositivo di acquisizione dati PowerLab | Strumenti AD | Grafico 7.1 | Apparecchio Langendorff |
| Software di acquisizione dati LabChart | Strumenti AD | Grafico 7.1 | Apparecchio Langendorff |
| Pompa peristaltica | Glison | MINIPULS 3 | Apparecchio Langendorff |
| Colonna d'acqua | in vetro fatto in | casa-Apparecchio | Langendorff |
| Bagno d'acqua Agente protettivo | VWR | 462-7000 | Apparecchio Langendorff |
| Filtri monouso sterili (0,2 &5; m) | Thermo Scientific | 595-4520 | Apparecchio Langendorff |
| Analizzatori di gas ematici | Radiometro | ABL90 FLEX PLUS | Analizzatore di gas |
| 70% etanolo | VWR | UN1170 | Pulizia dei tubi |
| 100% etanolo | Merck | 64-17-5 | Pulizia dei tubi |
| Wistar Rats | Janvier-Animals | ||
| Forbici in acciaio inox | AESCULAP | BC702R | Strumenti chirurgici |
| Forbici in acciaio inox | AESCULAP | BC257R | chirurgici |
| Big Forceps | AESCULAP-Surgical | Instruments | |
| 8m/m Forcipe in acciaio inox | F.S.T | 11052-10 | Strumenti chirurgici |
| superfine (10/0) carta smeriglio | 3M | 051111-11694 | Modello a cuore inverso |
Riferimenti
- Henkel, D. M., Redfield, M. M., Weston, S. A., Gerber, Y., Roger, V. L. Death in heart failure: a community perspective. Circ Heart Fail. 1 (2), 91-97 (2008).
- Limana, F., et al. Myocardial infarction induces embryonic reprogrammi....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Ristampe e permessi
