Questo manoscritto presenta metodi per l'analisi morfometrica e cambiamenti cellulari all'interno del condilo mandibolare di roditori.
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Articolo metodologico
Un metodo di analisi cellulare per condilo mandibolare murino e morfometrica
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il giunto temporomandibular (TMJ) ha la capacità di adattarsi agli stimoli esterni, e cambiamenti di carico possa influenzare la posizione dei condili, così come i componenti strutturali e cellulari della cartilagine del condilo mandibola (MCC). Questo manoscritto descrive metodi per l'analisi di questi cambiamenti e un metodo per alterare il caricamento dell'ATM in topi (cioè, alla compressione statica TMJ caricamento). La valutazione strutturale qui illustrata è un approccio semplice morfometriche che utilizza il software Digimizer e viene eseguito nelle radiografie di piccole ossa. Inoltre, l'analisi del cellulare cambia leader alle alterazioni nell'espressione del collagene, rimodellamento osseo, divisione cellulare, e distribuzione di proteoglycan in MCC è descritto. La quantificazione di questi cambiamenti nelle sezioni istologiche - contando i pixel fluorescenti positivi utilizzando software e il mapping di distanza di misurazione di immagine e zona macchiata con Digimizer - è dimostrato anche. I metodi qui illustrati non sono limitati a TMJ murino, ma ha potuto essere usati su altre ossa di piccoli animali da esperimento e in altre regioni di ossificazione endochondral.
Introduzione
TMJ è un unico giunto portante che si trova nella regione craniofacial ed è costituito di fibrocartilagine. Il MCC del TMJ è essenziale per la funzione articolare, compreso movimento della mascella senza ostacoli mentre parlando e masticare, ma esso è influenzato dalle malattie degeneranti, compreso l'osteoartrite1. L'ATM ha la capacità di adattarsi a stimoli esterni e le alterazioni di carico, portando a cambiamenti strutturali e cellulari ai componenti del MCC2,3,4,5. Le proprietà portanti di MCC possono essere spie....
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Protocollo
Il Comitato istituzionale cura degli animali del University of Connecticut Health Center ha approvato tutte le procedure di animale.
1. carico compressione statica TMJ: Bocca forzata
Nota: A topi transgenici che harboring reporter fluorescenti per il collagene (Col2a1XCol10a1), gentilmente fornito da Dr. David Rowe (Università del Connecticut), quattro-settimana-vecchi sono stati utilizzati per gli esperimenti descritti in questo manoscritto (n = 8; 4 maschi e 4 femmine). Transgene Col2a1 ciano (blu) è espresso in cellule nella zona prehypertrophic di MCC, mentre il Col10a1 ciliegie (rosse) cellule sono presenti ne....
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Risultati
Statistiche descrittive sono state effettuate per esaminare la distribuzione delle misure morfometriche (lunghezza mandibular, condylar lunghezza, larghezza condylar) e le analisi istologiche. I risultati sono stati confrontati fra il gruppo caricato (cioè, i topi sottoposti a carico di compressione con la molla in titanio beta) e il gruppo di controllo (cioè, i topi di controllo che non hanno ricevuto alcuna procedura di corrispondenza). Differenze statisticamente signi.......
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Discussione
Questo manoscritto descritto metodi per la misurazione di morfometrica e analisi cellulare del murini condili mandibolari e mandibole. Le misure morfometriche radiografica è utilizzabile anche per analizzare altre ossa da piccoli animali da esperimento. Inoltre, l'analisi cellulare (cellule quantificazione e mappatura di distanza di cartilagine) non sono limitati al condilo mandibola roditore, ma può essere utilizzato per quantificare le sezioni istologiche di numerosi tessuti.
Modelli di topi.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nessun concorrenti interessi finanziari.
Ringraziamenti
Gli autori vorrei ringraziare il Dr. David Rowe per gentilmente fornire i topi transgenici e Li Chen per l'assistenza istologico.
La ricerca riportata in questa pubblicazione è stata sostenuta dal National Institute of Dental & Craniofacial Research del National Institutes of Health, sotto Premio numero K08DE025914 e dalla associazione americana di Fondazione ortodontico per Sumit Yadav.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Sistema di radiografia MX20 | Faxitron X-Ray LLC | ||
| Software di immagine Digimizer | MedCalc Software | ||
| Shandon Cryomatrix resina per inclusione | Thermo Scientific | 6769006 | |
| Microscopio manuale Axio Imager Z1 | Carl Zeiss | 208562 | |
| filtro proteico fluorescente giallo - EYFP | Chroma Technology Corp | 49003 | |
| filtro proteico fluorescente ciano - ECFP | Chroma Technology Corp | 49001 | |
| filtro proteico fluorescente rosso - Cy5 | Chroma Technology Corp | 49009 | |
| acetato di sodio anidro | Sigma-Aldrich | S2889 | |
| sodio L-tartrato bibasico diidrato | Sigma-Aldrich | 228729 | |
| nitrito di sodio | Substrato Sigma-Aldrich | 237213 | |
| ELF97 | Thermo Fisher Scientific | E6600 | |
| ClickiT EdU Alexa Fluor 594 HCS kit | Life Technologies | C10339 | include EdU (5-etinil-2'-deossiuridina) |
| DAPI (4',6-Diamidino-2-Fenilindolo, Dicloridrato) | Thermo Scientific | D1306 | |
| Sodio fosfato bibasico | Sigma-Aldrich | S3264 | |
| Sodio fosfato monobasico | Sigma-Aldrich | 71505 | |
| Blu di toluidina O | Sigma-Aldrich | T3260 | |
| Adobe Photoshop | Adobe Systems Incorporated | ||
| Compresse saline tamponate con fosfato (PBS) | Research Products International | P32080-100T | |
| CNA Beta III Archwire Ortho | Organizers, Inc. | ||
| GraphPad Prism | Software GraphPad, Inc. |
Riferimenti
- LeResche, L. Epidemiology of Temporomandibular Disorders: Implications for the Investigation of Etiologic Factors. Crit Rev Oral Biol Med. 8 (3), 291-305 (1997).
- Chen, J., et al.
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Ristampe e permessi
