Vi har beskrevet en protokoll for å utføre delvis hepatectomy (PHx) og cellen transplantasjon via milt i NIKK. SCID (NIKKER. CB17-Prkdcscid/j) mus. Denne protokollen, er et snitt gjort å avdekke og resect den venstre flik av leveren etterfulgt av en annen snitt for intrasplenic transplantasjon av celler.
Delvis hepatectomy er en allsidig og reproduserbar metode lever foryngelse og effekten av cellen basert legemiddelselskap i ulike patologiske forhold. Delvis hepatectomy forenkler også økt engraftment og spredning av transplantert celler ved akselererende neovascularization og celle migrasjon mot leveren. Her beskriver vi en enkel protokoll for utføre 30% hepatectomy og transplantasjon av celler i milten av en ikke-obese diabetiker/alvorlig kombinert immunodeficient hilsen. SCID (NIKKER. CB17-Prkdcscid/j) musen.
I denne prosedyren er to små snitt gjort. Den første snittet er å avsløre og resect den venstre flik av leveren, og en annen liten snitt lages for å avsløre milten for intrasplenic transplantasjon av celler. Denne prosedyren krever ikke noen spesialisert kirurgiske ferdigheter, og det kan være ferdig i 5-7 minutter med mindre stress og smerte, raskere restitusjon og bedre overlevelse. Vi har vist transplantasjon av hepatocytter isolert fra en grønn fluorescerende protein (GFP) uttrykker mus (transgene C57BL/6-vs (UBC-GFP) 30Scha/J), samt hepatocyte som celler av menneskets opprinnelse (NeoHep) i delvis hepatectomized hilsen. SCID mus.
Foreløpig er hepatocyte transplantasjon foreslått som et alternativ til hele organtransplantasjon for behandling av pasienter med alvorlig lever lidelser. Det antas at det kan bygge bro pasienter til hele organ transplantasjon1. I tillegg til allogenic hepatocytter2, blir xenogenic hepatocytter3 og hepatocytter avledet fra stamceller4 også undersøkt i dyremodeller. I denne sammenheng, homing og engraftment er potensialet transplantert cellene i mottakeren et viktig kriterium for cellen basert terapi i akutt hepatic fiasko (AHF).
For å undersøke transplantasjon av hepatocytter eller hepatocyte-lignende celler5, opprettes AHF i en dyremodell kirurgisk6 eller farmakologiske7 prosedyrer, etterfulgt av transplanting celler. Å lage en AHF dyr modell av farmakologiske reagenser, mange hepatotoxins som d-galactosamine8, Paracetamol9, carbon tetrachloride10, thioacetamide11, Concanavalin A12, lipopolysakkarid13 , osv., har blitt brukt. Hver reagens genererer et unikt sett med funksjoner for AHF fra denne listen, men dessverre ikke enkelt reagens etterligner den menneskelige AHF. Videre AHF indusert av hepatotoxins tar lang tid, som setter dyr kronisk stress, og reproduserbar resultatene er vanskelig å få.
På den annen side, kirurgiske prosedyren for delvis hepatectomy (PHx) er ferdighet avhengige, og reproduserbar resultatene er lett å få etter å utvikle nødvendige ferdigheter. For å indusere AHF av kirurgiske inngrep alene, er fjerning av mer enn 70% av leveren påkrevd. men transplantert mindre enn en 70% hepatectomy kan fortsatt brukes til å studere engraftment og spredning av celler i leveren for å analysere deres terapeutiske kapasitet under leverskader14. Transplantasjon av hepatocytter har vært utført innlegg hepatectomy gjennom peritoneum15, hale blodåre16, hepatic blodåre17eller milt18. Foreløpig er hepatic blodåre-infusjon og intrasplenic transplantasjon av hepatocytter den foretrukne prosedyrer, fordi de er lettere å reprodusere.
I dette papiret, har vi beskrevet en prosedyre for en 30% delvis hepatectomy i NIKK. SCID (NIKKER. CB17-Prkdcscid/J) mus som den venstre flik av leveren er forbrukeravgift. Det er etterfulgt av transplantasjon 0,2 millioner GFP uttrykke mus (C57BL/6-vs (UBC-GFP) 30Scha/J) hepatocytter samt menneskelige opprinnelse NeoHep19 i milten. Denne fremgangsmåten fører til engraftment av transplantert cellene i leveren. Denne fremgangsmåten er de minst invasive og en minimal smertefulle teknikk.
Delvis hepatectomy er en etablert teknikk for undersøke leveren gjenfødelse, og overdreven hepatectomy rapporteres å etterligne AHF modellen. Blant dyr modeller av AHF er gnagere, spesielt mus, mest undersøkte modellen. For å få en leverskade modell i mus, til en 70% hepatectomy har blitt rapportert med en god survival rate25,26. Men i naken og andre immunodeficient mus, en 70% hepatectomy ble rapportert som fatale og dyr døde innen 24 timer<sup class="xre…
The authors have nothing to disclose.
Dette arbeidet ble støttet av kjernen bevilgning mottatt fra Department of bioteknologi, Indias regjering til de nasjonale Institutt for immunologi, New Delhi. Dr. Bhattacharjees nåværende adresse er delingen av gastroenterologi, Hepatology og ernæring, Children’s Hospital i Los Angeles.
Gas Anesthesia System | Ugo Basile; Italy | 211000 | |
Weighing machine | Goldtech ; India | Local Procurement | |
Biological safety cabinet ( Class I) | Kartos international; India | Local Procurement | |
Hair Trimmer | Panasonic ; Japan | ER-GY10 | |
Straight operating scissor with sharp /sharp blades | Major Surgicals; India | Local Procurement | |
Forceps with Serrations | Major Surgicals; India | Local Procurement | |
Micro needle holders straight & curved | Mercian ; England | BS-13-8 | |
1 ml insulin syringe with 30G *5/16 needles | Dispo Van; India | ||
1 ml syringe with 26 G * 1/2 needle | BD ; US | REF 303060 | |
Nylon Threads | Mighty ; India | (1-0) Local Procurement | |
MERSUTURES 4-0 Sterilised Surgical Needled Suture | Ethicon, Johnson & Johnson, India | NW 5047 | |
TRUGUT 76 cm 4-0 absorbable surgical suture | Sutures India Pvt. Ltd; India | SN 5048 | Sterilised Surgical Needled Suture Catgut Chromic |
Cotton Buds | Pure Swabs Pvt Ltd ; India | Local Procurement | |
Surgical Tape | 3M India ; India | 1530-1 | Micropore Surgical Tape |
Microtome | Histo-Line Laboratories, Italy | MRS3500 | |
Shandon Cryotome E Cryostat | Thermo Electron Corporation ; US | ||
Confocal laser scanning microscope | Carl Zeiss ; Germany | LSM 510 META | |
Bright Field Microscope | Olympus, Japan | LX51 | |
Automated analyser | Tulip, Alto Santracruz, India | Screen Maaster 3000 | Biochemical analyser for liver functional test |
Flow Cytometer | BD ; US | BD FACSverse | Assesment of presence of cells post transplantation |
Veet hair removal cream | Reckitt Benckiser , India | ||
FORANE | Abbott ; US | isoflurane USP 99.9% | |
Taxim | AlKem ; India | cefotaxime sodium injection | |
Povidone-Iodine solution | Win-Medicare; India | Betadine | |
Paraformaldehyde | Himedia; India | GRM 3660 | |
Iscove's Modified Dulbecco's Medium (IMDM) | Life technologies, Thermo Fisher scientific ; US | 12200-036 | |
Sucrose | Sigma ; US | S0389 | |
Tissue-Tek | Sakura; US | 25608-930 | O.C.T compound |
DAPI | Himedia; India | MB 097 | |
anti-Albumin goat Polyclonal | Thermo Scientific,Pierce, US | PA126081 | |
anti-connexin 32/GJB1 Polyclonal | abcam, UK | ab64609-500 | |
antiGFP rabbit polyclonal | Santa Cruz biotechnology; US | SC 8334 | |
Alexa Fluor 594 donkey anti-goat | Molecular Probes , Thermo Fisher Scientific ; US | A11058 | |
Alexa Fluor 488 donkey anti-sheep | Molecular Probes , Thermo Fisher Scientific ; US | A11015 | |
Alexa Fluor 594 chicken anti rabbit | Molecular Probes , Thermo Fisher Scientific ; US | A21442 | |
Goat anti rabbit IgG HRP | Invitrogen, Thermo Fisher Scientific; US | 65-6120 | |
anti-Ki67 antibody | abcam, UK | ab15580 | |
Antigen Unmasking Solution, Citric acid base | Vector laboratories, US | H-3300 | |
ProLong Diamond antifade mountant | Life technologies, Thermo Fisher scientific ; US | P36966 | |
SGOT (ASAT) KIT | Coral Clinical System, India | ||
SGPT (ALAT) KIT | Coral Clinical System, India | ||
Alkaline Phosphatase Kit (DEA) | Coral Clinical System, India | ||
Hematoxylin Solution, Mayer's | Sigma ; US | MHS16 | |
Eosin Y solution, alcoholic | Sigma ; US | HT110132 | |
DPX Mountant | Sigma ; US | 6522 | |
Melonex (Pain Killer) | Intas Pharmaceuticals Ltd; India | Meloxicam injection | |
DAB enhanced liquid substrate system tetrahydrochloride | Sigma ; US | D3939 |