Summary
جراحة كهرضغطية أدى إلى تحسينات في جراحة الوجه والفكين والأسنان البشرية. وقد وضعنا بروتوكولا لتحسين عملية جراحية كهرضغطية لجراحة الجمجمة نافذة في الفئران.
Abstract
مولتيفوتون المجهري تم تكييف على نطاق واسع لتصوير الخلايا العصبية في الجسم الحي. تصوير المتكررة يتطلب غرس نافذة الجمجمة أو رقيق المتكررة للجمجمة. عادة ما يتم إجراء جراحة الجمجمة نافذة مع حفر روتاري عالية سرعة، وتجد العديد من المحققين تحديا لمنع الحفر من إتلاف دوراً الدقيقة والأوعية الدموية. تدريب مكثف والممارسة المطلوب لإزالة العظام دون الأضرار بالانسجة الكامنة وهكذا جراحة الجمجمة نافذة يمكن أن تكون صعبة وتستغرق وقتاً طويلاً، وتنتج تلف الأنسجة. جراحة كهرضغطية، الذي يستخدم على نطاق واسع لجراحة الوجه والفكين والأسنان، يستخدم الاهتزازات بالموجات فوق الصوتية لإزالة العظام دون إلحاق الضرر بالانسجة الرخوة. قمنا بتطوير أسلوب تطبيق جراحة كهرضغطية لتحسين جراحة الجمجمة نافذة في الفئران في التحضير لتصوير مولتيفوتون. مقارنات داخل مختبر لدينا تجد أن الأسلوب يتطلب وقت الجراحة أقل ومعدل متوسط أقل من مضاعفات بسبب نزيف دورال من جراحة الجمجمة النافذة مع حفر دوارة.
Introduction
جراحة الجمجمة نافذة إعداد القوارض للتصوير في فيفو مولتيفوتون أصبح أسلوباً هاما في علم الأعصاب. الإزالة أو ترقق العظام ضروري لإعداد الماوس للتصوير الضوئي مع مجهر مولتيفوتون. يتم إجراء هذه الجراحة تماما إزالة منطقة عظم لفضح دوراً الأساسية1، أو رقيق منطقة العظام دون إزالة كامل من بلده دوراً2. النهج الجمجمة رقيقة قد ينتج التهاب وتفعيل microglia3 أقل ولكن يوفر ضحالة عمق التصوير، وحجم أصغر لنافذة تصوير (200 ميكرومتر) وفترة زمنية محدودة خلالها الإطار يمكن تصويرها بسبب نمو العظام2 . إضافة نافذة الزجاج المصقول وعززت (المنافذ) يمكن أن تزيد من حجم التصوير وفترة التصوير، لكن من الصعب على أداء4.
كل العمليات الجراحية الحالية استخدام حفر روتاري عالية سرعة رقيقة أو إزالة العظام من الجمجمة. كما يستخدم تقنية الجمجمة رقيقة مشرط بعد التدريبات لزيادة رقيقة العظام2. تقنية منافذ يتطلب خطوة إضافية عالية السرعة التلميع مع حصى4. في سرعة عالية يسبب الحفر الدوارة أو توربينات الهواء بالطاقة أو المحرك الكهربائي مثقاب لتدور سرعة عالية. حسب الفرع التدريبات دوار العظام والأنسجة اللينة، هناك خطر الأضرار بلده دوراً والكامنة وراء الأوعية الدموية. ويعتمد نجاح الجراحة على مهارة الجراح. بالإضافة إلى هذه الإطارات على استعداد مع الطرق الجراحية الميكانيكية، كانت طريقة كيميائية بصريا مسح الجمجمة مع مختلف الحلول المتقدمة5،6. ومع ذلك، منذ الجراحة كهرضغطية طريقة ميكانيكية للجراحة، ستقتصر مقارنات لدينا هنا للأساليب الميكانيكية الأخرى.
الأجهزة الجراحية كهرضغطية الاستفادة من الاهتزازات بالموجات فوق الصوتية لكسر العظام غضاريف دون الأضرار الكامنة وراء الأنسجة اللينة، ومما يوفر نهجاً لسرعة رقيقة مساحة كبيرة من العظام. في الجهاز جراحية كهرضغطية، يتم استبدال التوربينات بكومة من الأقراص السيراميك وعندما يتم تطبيق الحالي، الأقراص يهتز في ترددات الموجات فوق الصوتية. يتم نقل الاهتزازات من خلال الجهاز الماس المغلفة نصائح لقطع طريق العظام دون الأنسجة الرخوة مدمرة، ميزة على التدريبات الدوارة التي لا تميز بين أنواع الأنسجة. جراحة كهرضغطية وضعت أصلاً للاستخدام في الإنسان قبل توماسو فيرسيلوتي وأدت إلى تحسينات في طب الأسنان والجمجمة-maxilofacial جراحة7،،من89،10،11 .
قد تم استخدامه لإنشاء العظم في ويستار كهرضغطية جراحة والعثور على بواسطة التصوير بالرنين المغناطيسي (التصوير بالرنين المغناطيسي) وعلم الأنسجة لإنتاج أقل بكثير من الضرر من حفر أسنان تقليدية12. استنتج المؤلفون أن الجراحة كهرضغطية كانت آمنة لإزالة العظام القرب من أنسجة المخ الناعمة. الفئران، بيد أنه يتعين بلده دوراً أرق معطوبة بسهولة أكبر، وأن الدراسة لم يعد windows للتصوير الضوئي المزمن. تصوير المزمن يتطلب أن الأوعية الدموية لم تكن معطوبة وأن تجلط الدم لا تشكل إطار النافذة. الأضرار التي لحقت بلده دوراً يؤدي إلى الالتهاب الذي يسبب الإطار إلى سحابة، وينشط microglia وانتشار astrocytes رد الفعل. هنا نحن الأمثل الجراحة كهرضغطية للفئران لإنشاء رقيقة الجمجمة والعظام كامل windows إزالة الجمجمة مناسبة لتصوير المزمنة. قارنا هذا الأسلوب الجراحي لجراحات الجمجمة الإطار أعد مع حفر روتاري عالية سرعة.
Protocol
إجراءات جميع الحيوانات التي أجريت وفقا للمعايير تحددها "كولومبيا جامعة مركز المؤسسية الحيوان الرعاية الطبية" واستخدام اللجنة (إياكوك). القتل الرحيم أنجز عن طريق خلع عنق الرحم تحت التخدير مع الكيتامين 100 مغ/كغ و xylazine 10 مغ/كغ حقن إينترابيريتونيلي. وأجريت جميع العمليات الجراحية بطريقة معقمة (الجراح كانت ترتدي غطاء الرأس وقناع الوجه وقفازات معقمة ومعطف مختبر نظيفة المتاح) ويعقم بين كل استعمال الأدوات الجراحية.
1-الخطوات بريسورجيكال
- اﻷوتوكﻻف جميع الأدوات الجراحية التأكد من العقم.
- تخدير الفئران C57bl6 مع إيسوفلوراني (4% لتحريض و 1.5-2% للجراحة). قرصه تو هند كل 10 دقيقة لضمان العمق الصحيح للتخدير. زيادة التخدير إذا كان ينظر إلى تراجع حناجرهم أو أطرافهم هند.
- تطبيق مواد التشحيم العين البيطرية إلى العيون لمنع التجفيف.
- إزالة الشعر على فروة الرأس مع تطبيق 3 دقيقة لجل إزالة الشعر أو الحلاقة بالشفرة الكهربائية.
- ضع الماوس في إطار ستيريوتاكسيك على لوحة تدفئة أو بطانية تدوير المياه معايرة تعيين إلى 38 درجة مئوية.
- إدارة البوبرينورفين (0.1 مغ/كغ) تحت الجلد لتوفير التسكين بريسورجيكال.
- تطهير فروة الرأس مع ثلاثة طلبات التناوب الكلورهيكسيدين أو تدين والايثانول 70% استخدام القطن يميل قضيب.
- حقن 100 مل bupivacaine المخفف 50% في المحلول الملحي تحت فروة الرأس لتوفير التخدير الموضعي.
2. جراحة كهرضغطية نافذة الجمجمة
- باستخدام الأدوات الجراحية المعقمة يعقم، إزالة دائرة 1 سم من فروة الرأس عبر الجمجمة بقطع بالمقص الجراحي في نمط دائري. رفع فروة الرأس قبالة تعريض الأنسجة السمحاق على مدى العظم الجمجمة.
- استخدام تلميح الملقط كشط العظام مكشوفة واضحة من أي أنسجة سمحاق المتبقية. هذا أمر مهم لضمان أن الأسمنت الأسنان لا يسقط في وقت لاحق.
- تعيين وحدة جراحة كهرضغطية ليهتز في وضع أدنى. لاحظ أن إعدادات أعلى قد كسر الأوعية الدموية بسبب الاهتزازات الشديدة.
- إصلاح الحافة دائرية عقيمة للجهاز.
ملاحظة: نصيحة دائرية 4 مم أيضا مناسبة للعمليات الجراحية. حجم تلميح كبير يسهم في سرعة عملية جراحية كما يمكن أن تكون ضعفت الإطار بأكمله في وقت واحد. - ملء حقنه 10 مل مع الجليد الباردة الاصطناعي السائل الدماغي النخاعي (قام) والاحتفاظ بها في اليد لا يحمل الجهاز كهرضغطية.
- ري الجمجمة التي تتساقط قام من المحاقن على الجمجمة بمعدل 1 مل/دقيقة بدلاً من ذلك، استخدام مضخة تمعجية المتمركزة على الجمجمة في حرية استخدام اليد الأخرى.
ملاحظة: الري بالبرد قام مهم لمنع ارتفاع درجة الحرارة بسبب الاحتكاك من اهتزازات عالية التردد. - تطبيق نصيحة الجراحية تهتز بلطف للجمجمة بحركة دائرية خفيفة (3 دوائر الواحدة 1 s) ورقيقة العظام للعمق المطلوب للقيام إعداد جمجمة رقيقة (5 إلى 10 دقائق).
ملاحظة: هنا، windows 4 مم وقدمت أن كانت ضعفت إلى 20 ميكرومتر. ومع ذلك، سوف تختلف حجم الإطار مع حجم تلميح الجراحية. يمكن ضبط سمك العظام إلى العمق المطلوب استناداً إلى طول الوقت الذي يقضيه تطبيق التلميح للجمجمة. - بلطف ضبط الزاوية من الجهاز وتغيير زاوية الطرف أثناء تطبيق الضغط في الجمجمة رقيقة الجمجمة شكل موحد.
- لإجراء إزالة العظام كاملة دون ترك أي العظام رقيقة خلف، رقيقة العظام حتى الشقوق مرئية حول منطقة النافذة. إزالة رقائق المتبقية من العظام رقيقة مع الملقط دون إلحاق الضرر ببلدة دوراً الكامنة.
- ينقع قطعة 1 مم من الرغوة الكولاجين مرقئ في قام الباردة. عقد الرغوة الرطب مع الملقط ووضعه في الجمجمة رقيقة. السماح له بالجلوس في الجمجمة رقيقة لحوالي 30 s لإيقاف أي الصغير ينزف من البلدان النامية.
- استخدام الملقط لوضع ساترة زجاجية 4 مم أفقياً عبر النافذة التي قد قد ضعفت في العظام.
- استخدام الجزء الخلفي من القطن الصغيرة البلاستيك أو الخشب يميل قضيب لتطبيق ما يقرب من 100 ميليلتر من اﻷكريليك الأسنان في الجمجمة عقد النافذة في مكانها.
3-بعد العمليات الجراحية الرعاية
- إزالة الماوس من الأجهزة الجراحية ووضعه في قفص ساخنة للانتعاش. مراقبته باستمرار حتى أنه قد استعاد وعيه الكامل (تقييم التنقل العادي ومشية، والسلوك).
- تقييم الحيوانات مرتين في يوم لمدة ثلاثة أيام لمظاهر الألم بعد الجراحة بما في ذلك انخفاض النشاط، الاستمالة، الغذاء، واستهلاك المياه، الذين يحرسون السلوك (مثل يعرج أو موقف متحدب) أو زيادة العدوان. عدم عودة الحيوان إلى شركة الحيوانات الأخرى إلا أنه تعافي تماما.
- إدارة البوبرينورفين (0.05 – 0.1 مغ/كغ) تحت الجلد ح 8 – 12 مسكن بعد الجراحة لمدة 3 أيام. رصد مجال الإطار تتابع عن كثب جراحة dehiscence وعلامات الإصابة بالتهاب. في حال عدم عودة هذا الحيوان على خط تغذية والاستمالة السلوكيات، استشارة طبيب بيطري فيما يتعلق بالتدخلات الممكنة أو القتل الرحيم.
Representative Results
قبل الشروع في عملية جراحية كهرضغطية، إزالة أي سمحاق المتبقية من الجمجمة. بمجرد الجمجمة معتمة والسلس (الشكل 1a)، قد تبدأ الجراح جراحة كهرضغطية. عند إزالة العظام مع تلميح بيزو تهتز، من الأهمية بمكان لري الجمجمة مع الجليد قام الباردة. ويتحقق الري السليم عندما يتم غمر الجزء السفلي 1 مم الحافة في قام (الشكل 1b). دون الري السليم، سوف أسخن العظام وتلف الدماغ. بعد قد تم ضعفت الجمجمة إلى العمق المطلوب اختاره الجراح، قد يكون هناك بعض نزيف المتبقية من الأوعية الدموية الموجودة في العظام. من أجل سرعة وقف نزيف جميع، تطبيق قطعة صغيرة 1 مم من الرغوة الكولاجين غارقة في قام إلى المنطقة النافذة. اسمحوا الكولاجين الجلوس في الجمجمة لحوالي 30 ثانية (الشكل 1 ج). بعد إزالة الرغوة الكولاجين، سوف تظهر النافذة شفافة، مما يتيح رؤية واضحة للأوعية الدموية في دوراً. دوراً ستكون سليمة دون كدمات كبيرة. (الشكل 1 د). إذا ظهر دوراً حمراء وملتهبة، فمن المحتمل بسبب كسر الأوعية الدموية من الكثير من الضغوط التي تطبق على التلميح أثناء الجراحة. حماية الإطار الجديد وتحضيره لتصوير المزمن، يجب أن توضع ساترة زجاج فوق المنطقة. ساترة زجاجية المطبقة بشكل صحيح سيجلس برفق أعلى النافذة ولن يسبب أي ضرر للمنطقة. ويجب أن تشمل ساترة زجاج الإطار بأكمله. إذا تم تطبيق ساترة زجاجية بشكل صحيح في الجمجمة، ستظل النافذة شفافة تحت الزجاج. وسيكون جميع الأوعية الدموية في دوراً لا تزال مرئية (الشكل 1e). ويجب تطبيق اﻷكريليك الأسنان حول ساترة الزجاج على التمسك بشكل دائم على سطح الجمجمة. كما يجب أن تغطي حواف ساترة زجاجية في اﻷكريليك الأسنان (الشكل 1f).
وجدنا أن الجراحة كهرضغطية عادة أسرع بكثير من نافذة الجمجمة تقليدية، مع أخذ حوالي 10-12 دقيقة للجراحة (الشكل 2A). كما وجدنا أنه كانت هناك تعقيدات أقل بسبب دوراً وكدمات ونزيف كما لاحظ العين (الشكل 2). سوف تسمح نافذة معدّة بشكل صحيح تصوير مولتيفوتون مؤشرات الفلورسنت في الخلايا العصبية القشرية في فيفو. لقد اخترنا صورة مؤشر أحمر الكالسيوم JRGECO1a في الهيئات الخلية من الخلايا العصبية القشرية طبقة 4 (الشكل 3 ألف-3B). ويمكن أن نلاحظ العابرين الكالسيوم في هذه الهيئات الخلية من خلال نافذة إعداد باستخدام مطوار.
رقم 1: جراحة كهرضغطية. () الجمجمة بعد وقد تم إعداده بشكل صحيح مطوار. تم إزالة جميع الأنسجة بيريوستيل، تاركة سطح ناعمة ونظيفة. (ب) صورة تمثيلية مطوار في التقدم. أسفل 1 مم من الاهتزاز نصيحة الجراحية هي غارقة في الجليد قام الباردة. يتم تطبيق السائل في الجمجمة بمعدل 1 مل/دقيقة. يتم تطبيق حركة دائرية خفيفة في الجمجمة والعظام هي ضعفت عن طريق اهتزازات الموجات فوق الصوتية. (ج) بعد قد تم ضعفت الجمجمة، قطعة دائرية 1 مم من الرغوة الكولاجين غارقة في البرد قام مسموح للراحة على النافذة لوقف أي تجاوز الهوامش الصغيرة من العظم. (د) نافذة ناجحة مع دوراً شفافة تعرض جميع الأوعية الدموية سليمة. هناك أي ضرر مرئية أو كدمات على سطح الدماغ. (ﻫ) ساترة زجاجية يوضع عبر النافذة لحماية سطح الدماغ. يتم تطبيق اﻷكريليك الأسنان (f) في الجمجمة لإصلاح ساترة زجاجية بشكل دائم عبر النافذة. مقياس بار 1 مم في جميع الصور.
رقم 2. مقارنة بين معدل النجاح في التدريب مطوار أو طب الأسنان حفر جراحة. (أ) متوسط الوقت لعملية جراحية كان أقل مطوار من العمليات الجراحية حفر الأسنان (ف < 0.05، اختبار t الذيل اثنين) n = 30 عملية جراحية كل مجموعة ومتوسط 10 جراحات كل الجراح. (ب) النسبة المئوية لعملية جراحية ناجحة (ويعرف أي أضرار النزيف أو مرئية لدورا كما لاحظ العين الجراح من خلال الهدف المحدد إلى 350 X التكبير) كانت أعلى مطوار من العمليات الجراحية حفر الأسنان (n = 30 عملية جراحية لكل مجموعة، واحدة اختبار z الذيل). أشرطة الخطأ تظهر التنمية المستدامة.
الشكل 3. مولتيفوتون التصوير في فيفو من خلال نافذة الجمجمة ضعفت مع مطوار. العابرين ولاحظ مؤشر أحمر الكالسيوم JRGECO1a تم تصويرها في طبقة 4 الخلايا العصبية الهرمية في قشرة موتور مورين فيفو فيالكالسيوم (A). شريط المقياس = 100 ميكرومتر. (ب) نفس الإطار ولكن منطقة مختلفة من طبقة 4 موتور اللحاء. هيدفيكسيد الماوس مع الإطار 3 مم على استعداد مع مطوار. شريط المقياس = 30 ميكرومتر. إيماجيد مع مجهر مولتيفوتون، 40 س الهدف، الطول الموجي الإثارة 1040 نانومتر.
Discussion
يمكن تعديل الجراحة عن طريق تغيير تلميح الجراحية. وهناك العديد من أحجام مختلفة من الحافة التي يمكن تطبيقها الجهاز. سيؤدي إلى تغيير حجم أو شكل من الطرف إطارات مختلفة الحجم. بالإضافة إلى نصيحة 4 ملم، كما حاولنا تلميح 3 مم ووجدت أنها عملت بشكل جيد أيضا. وحتى مع الري مع الجليد قام الباردة، ونحن لم تكن قادرة على الحصول على نتائج جيدة مع النصائح التي كانت ضيقة جداً (حوالي 0.25 مم) بسبب الاهتزازات مركزة تسبب الكثير من الحرارة وحرق العظام تؤدي إلى تلف دوراً الكامنة. ونحن لم يحاكم العديد النصائح الأخرى التي تتوفر، ونحن نتوقع أن مختبرات أخرى قد تجد تطبيقات جديدة لهذه النصائح المختلفة. في حين الجراحة بسيط نسبيا، وجدنا أن هناك العديد من الخطوات التي قد تحتاج إلى استكشاف الأخطاء وإصلاحها. الأول هو أن تلميح تهتز تنتج الكثير من الاضطراب في قام، مما يقلل من وضوح الرؤية وتنتج صعوبة في التحقق من عمق العظام خلال عظم رقيق خطوة من عملية جراحية. نحن نوصي بأن إذا كان من الصعب جداً أن نرى كيف رقيقة العظام، وأخذ قسط من راحة لتجف بالجمجمة ونافذة بتطبيق مسحه القطن عقيمة إلى جانب العظام. لا تنطبق مسحه القطن مباشرة إلى النافذة، حيث سطح خشن يضر بالعظام رقيقة. بعد التحقق من العمق، قام بإعادة تطبيق ومتابعة عملية جراحية. كما وجدنا أنه إذا كان هناك تلف بلده دوراً، أنها عادة ما تكون نتيجة للجراح وضع الكثير من الضغط على الطرف. الضغط الجهاز أكثر بلطف وتطبيق أقل قوة سوف يرجح أن إصلاح هذه المشكلة. إذا كان الجراح قسراً إلغاء نصيحة في العظام، وسوف يسبب كسر في عظم رقيقة والضرر الجمجمة. وأخيراً، إذا بعد ترقق العظام، دوراً الكامنة وراء ظهور رضوض، فمن المحتمل بسبب الحرارة الزائدة من الاهتزازات. زيادة معدل تدفق قام سيتم إصلاح هذه المشكلة.
القيد الرئيسي من مطوار هو أن الجهاز يمكن رقيقة العظام، ولكن لا يمكن إزالة جميع العظام أكثر بلده دوراً. تلميح الماس المغلفة بالمطبات الخام الصغيرة. سوف كشط دوراً في فرك حاجة رقيقة الجمجمة ويسبب نزيفا إذا استخدمت لإزالة جميع العظام. ومن ثم، مطلوب استخدام الملقط لإزالة طبقة رقيقة المتبقية. بينما هناك النقاش الدائر حول ما إذا كان التصوير من خلال جمجمة رقيقة ينتج التهاب أقل وأقل انتشار microglia ورد الفعل أستروسيتيس، وفي بعض الحالات نافذة مع لا العظام المتبقية المفضل، مثلاً، لتوفير مزيد من عمق للتصوير3 .
ونحن قد الأمثل إعداد إطار الجمجمة لتصوير مولتيفوتون في الفئران. هو PHASOR، على حد علمنا، أول تطبيق تقنية كهرضغطية لجراحة نافذة الجمجمة القوارض للتصوير الضوئي. نجد أن استخدام الجراحة كهرضغطية في الفئران تتشاطر مزايا زيادة السرعة وانخفض الأحداث الضائرة كما ذكرت في البشر7،،من89،10. استخدام الجهاز كهرضغطية أسفرت العمليات الجراحية أسرع (الشكل 2A) وحفر الأحداث الضائرة أقل من النزيف إذا ما قورنت نادي روتاري عالية السرعة (الشكل 2). كما وجدنا، داخل مختبر لدينا، أن مطوار كان أسهل لجراحي جديد لمعرفة من النهج التقليدية لجراحة الجمجمة النافذة. مزايا السرعة وسهولة الاستخدام، ومن المحتمل أن تختلف بين الجراحين. عادة ما تتطلب استعدادات الجمجمة رقيقة 30-45 دقيقة رقيقة العظام مع الحفر ومشرط2، بينما يتطلب نهج مطوار عادة أقل من 10 دقيقة.
وجدنا أنه في windows أعد مع مطوار أننا يمكن أن صورة العابرين الكالسيوم في طبقة 4 الخلايا العصبية الهرمية في قشرة الحركية التي قد تم transfected مع الفيروس الغدد المرتبطة ترميز مؤشر الكالسيوم JRGECO1a (AAV9. Syn.NES-jRGECO1a.WPRE.SV40). كما وجدنا أنه، بالمقارنة مع نافذة الجمجمة جمجمة رقيقة أعدت بالحفر الدوارة ومشرط، ومنطقة التصوير كانت أكبر، بينما جمجمة رقيقة أعد مع حفر دوارة ومشرط نافذة بتصوير من 20 ميكرومتر القطر2 . مع مطوار، كنا قادرين على رقيقة بسرعة مساحة 3-4 مم. هذا مماثل لنافذة التصوير ذكرت مع منافذ4. ويحتفظ هذا الإطار أكبر الاستفادة التصوير السريع ذكرت ويندوز الجمجمة رقيقة أعدت بحفر الأسنان ومشرط. وعلاوة على ذلك، يمكن تصويرها الإطار أعد مع مطوار فورا، بدلاً من إزالة العظام التقليدية تصويرها windows التي قد تحتاج إلى أسابيع للشفاء قبل أن يمكن أن يكون الإطار الأمثل3.
يمكن تطبيق هذه التقنية لدراسة التغيرات في تدفق الدم في الأوعية الدموية تحت بلده دوراً. دراسة مستقبل هامة تتمثل في مقارنة إيمونوريكتيفيتي مطوار مع أساليب أخرى لنافذة الجمجمة. وهذا سيكون مهما لتحديد إذا كان ينتج مطوار التهاب أقل بالمقارنة مع الأساليب القائمة. نأمل أن تسمح تقنية جراحية كهرضغطية موثق هنا مختبرات أكثر لأداء windows الجمجمة واستخدام التصوير فيفو فيمولتيفوتون بنجاح.
تأكد من أن الجهاز تم تعيينه إلى يهتز على أقل إعداد وأن يجري تروي قام معدل ثابت. البرد الثلج قام يجب أن تطبق باستمرار أو أنها سوف تصل الحرارة والأضرار في بلده دوراً. ووجدنا أن قام يجب أن يطبق بمعدل على الأقل 1 مل/دقيقة أما استخدام المحاقن المعقود في اليد، أو استخدام مضخة تمعجية، بدلاً من الري المدمج في الجهاز. نظام الري في الجهاز إخراج قام أيضا قوة وتنتج الكثير من الاضطراب، مما سيضعف إلى حد كبير الرؤية.
Disclosures
هناك لا عمليات الكشف.
Acknowledgments
تمارا زريك للمساعدة في الحصول على الصورة مولتيفوتون في هذه الورقة. يدعمها المخ & السلوك والرعاش وأسس جبب، R01 MH108186 و R01 DA07418. F31 زمالة 1F31MH109293-01A1 S c.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Piezosurgery Touch | Mectron | 5120062 | Piezosurgery GP model has the same settings |
| Circular 4mm flat piezosurgery tip (# OT11) | Mectron | 3370019 | This tip was ideal for our windows but there are many other tips of different sizes availible. |
| Stereotax frame | Kopf | 963 | |
| Mouse adaptor | Stoelting | 51625 | |
| Peristaltic pump for irrigation. | Cole-Parmer | WU-77120-42 | Makes it easier to irrigate and frees up the other hand to provide stability. Irrigation can be performed by hand with a syringe if necessary. |
| Avitene Ultrafoam | Bard-Davol | 1050020 | Important to stop any minor bleeding instantly. |
| C&B Metabond | Parkell | S380 | Much stronger than regular dental acrylic. |
| Artificial cerebro spinal fluid (ACSF) | Tocris | 3525 | |
| Puralube opthalmic ointment | Dechra | 17033-211-38 | |
| Mice | JAX | 664 | |
| Prairie Ultima multiphoton microscope | Bruker | ||
| JRGECO1a (AAV9.Syn.NES-jRGECO1a.WPRE.SV40) | UPENN Vector Core |
References
- Holtmaat, A., et al. Long-term, high-resolution imaging in the mouse neocortex through a chronic cranial window. Nat Protoc. 4, 1128-1144 (2009).
- Yang, G., Pan, F., Parkhurst, C. N., Grutzendler, J., Gan, W. Thinned-skull cranial window technique for long term imaging of the cortex in live mice. Nat protoc. 12, 213-220 (2010).
- Dorand, D. R., Barkauskas, D. S., Evans, T. A., Petrosiute, A., Huang, A. Y. Comparison of intravital thinned skull and cranial window approaches to study CNS immunobiology in the mouse cortex. Intravital. 3, e29728-1-e29728-8 (2014).
- Drew, P. J., et al. Chronic optical access through a polished and reinforced thinned skull. Nat Methods. 7, 981-984 (2010).
- Wang, J., Zhang, Y., Xu, T. H., Luo, Q. M., Zhu, D. An innovative transparent cranial window based on skull optical clearing. Laser Physics Letters. 9, (2012).
- Yang, X., et al. Skull Optical Clearing Solution for Enhancing Ultrasonic and Photoacoustic Imaging. IEEE Trans Med Imaging. 35, (2016).
- Vercellotti, T. Piezoelectric surgery in implantology: a case report--a new piezoelectric ridge expansion technique. Int J Periodontics Restorative Dent. 4, 358-365 (2000).
- Vercellotti, T., De Paoli, S., Nevins, M. The piezoelectric bony window osteotomy and sinus membrane elevation: introduction of a new technique for simplification of the sinus augmentation procedure. Int J Periodontics Restorative Dent. 6, 561-567 (2001).
- Vercellotti, T., Podesta, A. Orthodontic microsurgery: a new surgically guided technique for dental movement. Int J Periodontics Restorative Dent. 4, 325-331 (2007).
- Stubinger, S., Stricker, A., Berg, B. I. Piezoelectric surgery in implant dentistry. Clin Cosmet Investig Dent. 7, 115-124 (2015).
- Basheer, S. A., Govind, R. J., Daniel, A., Sam, G., Adarsh, V. J., Rao, A. Comparative Study of Piezoelectric and Rotary Osteotomy Technique for Third Molar Impaction. J Contemp Dent Pract. 18, 60-64 (2017).
- Pavlikova, G., et al. Piezoelectric surgery prevents brain tissue damage: an experimental study on a new rat model. Int J Oral Maxillofac Surg. 40, 840-844 (2011).
