Chirurgie piézoélectrique a permis d’améliorer en chirurgie maxillo-faciale et dentaire humaine. Nous avons développé un protocole visant à optimiser la chirurgie piézoélectrique pour la chirurgie de fenêtre crânienne chez les souris.
La microscopie multiphoton a été largement adaptée imagerie neurones in vivo. L’imagerie répété nécessite l’implantation d’une fenêtre crânienne ou amincissement répétées du crâne. Chirurgie fenêtre crânienne est généralement effectuée avec une foreuse rotative haute vitesse, et de nombreux chercheurs trouvent difficile d’éviter que la perceuse endommagent la dure-mère délicat et les vaisseaux sanguins. Pratique et une formation approfondie est nécessaire pour enlever l’OS sans endommager les tissus sous-jacents et donc chirurgie fenêtre crânienne peut être difficile, chronophage et produire des lésions tissulaires. Chirurgie piézoélectrique, ce qui est largement utilisée pour la chirurgie maxillo-faciale et dentaire, utilise des vibrations ultrasoniques pour enlever les os sans endommager les tissus mous. Nous avons développé une méthode application chirurgie piézoélectrique pour améliorer la chirurgie fenêtre crânienne chez les souris en préparation pour l’imagerie multiphoton. Comparaisons au sein de notre laboratoire de trouvent que la méthode nécessite moins de temps à la chirurgie et a un baisse du taux moyen de complications dues à une hémorragie dural que la chirurgie crânienne fenêtre avec une foreuse rotative.
Chirurgie de fenêtre crânienne pour préparer les rongeurs multiphoton imagerie in vivo est devenu une technique importante en neurosciences. Le déplacement ou l’amincissement des os est nécessaire pour préparer la souris optique d’imagerie avec un microscope multiphoton. Cette intervention est effectuée en supprimant complètement une zone osseuse pour exposer le sous-jacent dura1ou par une région d’OS sans suppression totale de la dura2une éclaircie. L’approche de crâne mince peut produire moins d’inflammation et activation des microglies3 mais offre une profondeur de l’image, une taille plus petite de la fenêtre d’imagerie (200 µm) et une période de temps limitée au cours de laquelle la fenêtre peut être photographiée en raison de la repousse osseuse2 . L’ajout d’une fenêtre en verre poli et renforcée (PoRTS) peut augmenter la taille d’imagerie et la période d’imagerie mais est difficile à réaliser4.
Les deux chirurgies actuels permet un forage rotatif haute vitesse mince ou enlever l’os du crâne. La technique de crâne mince utilise également un scalpel après la perceuse pour fluidifier davantage l’ OS2. La technique de PoRTS nécessite une étape supplémentaire de polissage à grain4à grande vitesse. Dans une grande vitesse perceuse rotative, une turbine à air propulsé ou moteur électrique entraîne le foret de tourner à une vitesse élevée. Foreuses rotatives section OS et des tissus mous, il y a un risque d’endommager la dure-mère et qui sous-tendent les vaisseaux sanguins. Le succès de la chirurgie dépend de l’habileté du chirurgien. En plus de ces fenêtres, préparés avec des méthodes chirurgicales mécaniques, une méthode chimique d’optiquement le crâne avec différentes solutions de compensation a été développé5,6. Toutefois, étant donné que la chirurgie piézoélectrique est une méthode mécanique de la chirurgie, nos comparaisons ici sera limités à d’autres méthodes mécaniques.
Appareils chirurgicaux piézoélectriques utilisent des vibrations ultrasoniques pour briser les os minéralisés sans endommager les tissus mous sous-jacent et offrent ainsi une approche pour mince rapidement une grande surface de l’OS. Dans une pièce à main chirurgie piézoélectrique, la turbine est remplacée par une pile de disques en céramique et lorsque le courant est appliqué, les disques vibrent à des fréquences ultrasoniques. Les vibrations sont transférées par le biais de la pièce à main à diamant conseils enduits pour couper à travers l’OS sans endommager les tissus mous, un avantage sur les perceuses rotatives qui ne soient pas discriminatoires entre les types de tissus. Chirurgie piézoélectrique a été initialement développée pour une utilisation chez l’homme de Tomaso Vercellotti et a conduit à des améliorations en dentaire et cranio-maxilofacial chirurgie7,8,9,10,11 .
La chirurgie piézoélectrique a été utilisée pour créer une ostéotomie chez des rats Wistar et a été trouvée par l’imagerie par résonance magnétique (IRM) et l’histologie à produire beaucoup moins de dégâts qu’une fraise dentaire traditionnel12. Les auteurs ont conclu que chirurgie piézoélectrique était assurée pour enlever l’OS près de tissu cérébral doux. Souris, cependant, ont un dura plus mince qui est endommagé plus facilement, et cette étude n’a pas préparé de windows pour l’imagerie optique chronique. L’imagerie chronique exige que les vaisseaux sanguins ne sont pas endommagés et que les caillots sanguins ne font pas sous la fenêtre. Dommages à la dure-mère mène à l’inflammation que provoque la fenêtre nuage, et active les cellules microgliales et la multiplication des astrocytes réactifs. Ici, nous avons optimisé la chirurgie piézoélectrique pour la souris créer des crâne mince et OS complet windows crânienne enlèvement adapté pour l’imagerie chronique. Nous avons comparé cette technique chirurgicale aux chirurgies de fenêtre crânienne préparé avec une foreuse rotative haute vitesse.
La chirurgie peut être modifiée en changeant la pointe chirurgicale. Il y a beaucoup de différentes tailles de pointe qui peuvent être appliqués à la pièce à main. Changer la taille ou la forme de la pointe se traduira par des fenêtres de tailles différentes. En plus de l’extrémité de 4 mm, nous avons aussi essayé une mèche de 3 mm et trouvé que cela a fonctionné aussi bien. Même avec l’irrigation avec de la glace froide ACSF, nous n’étions pas en mesure d’obtenir de bons résultats avec des conseils qui ont été trop étroit (environ 0,25 mm) en raison des vibrations concentrées causant trop de chaleur et la gravure conduisant aux dommages causés à la dure-mère sous-jacente. Nous n’avons pas essayé la multitude d’autres conseils qui sont disponibles, et nous prévoyons que d’autres laboratoires peuvent trouver de nouvelles applications pour ces différents conseils. Alors que la chirurgie est relativement simple, nous avons constaté qu’il y a plusieurs étapes nécessitant un dépannage. La première est que la pointe vibrante produit beaucoup de turbulence dans l’ACSF, qui diminue la visibilité et produit des difficultés pour déterminer la profondeur de l’OS pendant l’OS amincissement étape de la chirurgie. Nous recommandons que si il est trop difficile de voir comment l’os sont, faites une pause pour sécher le crâne et la fenêtre en appliquant un coton-tige stériles sur le côté de l’OS. Ne pas appliquer le coton tige directement à la fenêtre, car la surface rugueuse est préjudiciable aux os minces. Après avoir vérifié la profondeur, réappliquez FSCA et continuer avec la chirurgie. Nous avons également constaté que s’il y a des dommages à la dure-mère, il découle habituellement le chirurgien met trop de pression sur la pointe. Tenant la pièce à main plus doucement et demande moins de force seront normalement résoudre ce problème. Si le chirurgien est grattée par la force la pointe sur l’OS, elle va provoquer une rupture dans l’OS minces et endommager le crâne. Enfin, si après une éclaircie de l’OS, la dure-mère sous-jacente apparaît meurtrie, il est probable en raison de l’excès de chaleur les vibrations. Augmente la vitesse d’écoulement de l’ACSF corrigera ce problème.
La principale limitation de phaseur est que la pièce à main peut mince de l’OS, mais qu’il ne peut pas enlever tous les os sur la dure-mère. L’extrémité enduite de diamant a des petites bosses rugueuses. Le frottement nécessaire pour fluidifier le crâne s’abraser la dure-mère et provoquer des saignements si elle était utilisée pour supprimer tous les os. Ainsi, l’utilisation de forceps est nécessaire pour enlever la couche mince restante. Bien qu’il y a débat en cours sur si l’imagerie grâce à un crâne mince produit moins d’inflammation et moins la prolifération des cellules microgliales et astrocytes réactifs, dans certains cas une fenêtre avec aucun os restant est préférée, par exemple, pour fournir une plus grande profondeur de l’imagerie3 .
Nous avons optimisé la préparation fenêtre crânienne pour l’imagerie multiphoton chez la souris. PHASEUR est, à notre connaissance, la première application de technique piézoélectrique pour chirurgie de rongeurs fenêtre crânienne pour l’imagerie optique. Nous constatons que l’utilisation de la chirurgie piézoélectrique chez les souris partage les avantages d’une vitesse accrue et diminue les effets indésirables signalés également dans les humains7,8,9,10. Utilisation du dispositif piézoélectrique a donné lieu à des chirurgies plus rapides (Figure 2 a) et effets indésirables moins de saignement par rapport à un rotatif à grande vitesse de forage (Figure 2 b). Nous avons également constaté, au sein de notre laboratoire, que phaseur était plus facile pour les chirurgiens nouvelles d’apprendre que les approches traditionnelles de la chirurgie de fenêtre crânienne. Avantages de la vitesse et la facilité d’utilisation sont susceptibles de différer entre les chirurgiens. Préparations de crâne mince nécessitent des 30-45 min pour fluidifier l’OS avec une perceuse et scalpel2, tandis que l’approche phaseur requiert généralement moins de 10 min.
Nous avons constaté que dans windows préparés avec phaseur nous pourrions image transitoires de calcium dans les neurones pyramidaux couche 4 dans le cortex de moteur qui ont été transfectées avec adeno associé virus codant l’indicateur de calcium JRGECO1a (AAV9. Syn.NES-jRGECO1a.WPRE.SV40). nous avons également constaté que, par rapport à une fenêtre crânienne crâne minces préparée avec une perceuse rotative et le bistouri, la région d’imagerie a été plus grande, tout en un crâne mince préparé avec une foreuse rotative et bistouri a une fenêtre d’imagerie de 20 µm de diamètre2 . Avec phaseur, nous avons pu rapidement mince a une superficie de 3-4 mm. Ceci est similaire à la fenêtre d’imagerie rapportée avec PoRTS4. Cette plus grande fenêtre conserve le bénéfice de l’imagerie rapide pour windows de crâne minces préparées avec une fraise dentaire et bistouri. En outre, la fenêtre préparée avec phaseur peut être photographiée immédiatement, par opposition au retrait traditionnel os windows qui peuvent exiger des semaines pour guérir avant que la fenêtre peut être optimale imagé3.
Cette technique peut être appliquée à l’étude des modifications du débit sanguin dans les vaisseaux sous la dure-mère. Une importante étude future consiste à comparer l’immunoréactivité de phaseur avec d’autres méthodes de fenêtre crânienne. Ce serait important pour déterminer si le phaseur produit moins l’inflammation en comparaison avec les méthodes existantes. Nous espérons que la technique chirurgicale piézoélectrique documentée ici permettront plus labs pour exécuter windows crâniennes et utilisent avec succès multiphoton imagerie in vivo.
Assurez-vous que la pièce à main est mis à vibrer sur le réglage le plus bas et que le FSCA est être irriguée à un rythme constant. Le froid glace QU’ACSF s’impose sans cesse ou il va chauffer et endommager la dure-mère. Nous avons trouvé que le FSCA doit être appliqué à un taux d’au moins 1 mL/min soit utiliser une seringue qui s’est tenue dans la main, ou utiliser une pompe péristaltique, plutôt que l’irrigation intégrée dans la pièce à main. Le système d’irrigation dans la pièce à main éjecte FSCA avec trop de force et produit trop grande turbulence, ce qui gênerait considérablement la visibilité.
The authors have nothing to disclose.
Tamara Zeric pour avoir aidé à obtenir l’image multiphotonique dans cet article. Pris en charge par le cerveau & comportement, maladie de Parkinson et fondations JPB, R01 MH108186 et R01 DA07418. F31 bourse 1F31MH109293-01 a 1 S c.
Piezosurgery Touch | Mectron | 5120062 | Piezosurgery GP model has the same settings |
Circular 4mm flat piezosurgery tip (# OT11) | Mectron | 3370019 | This tip was ideal for our windows but there are many other tips of different sizes availible. |
Stereotax frame | Kopf | 963 | |
Mouse adaptor | Stoelting | 51625 | |
Peristaltic pump for irrigation. | Cole-Parmer | WU-77120-42 | Makes it easier to irrigate and frees up the other hand to provide stability. Irrigation can be performed by hand with a syringe if necessary. |
Avitene Ultrafoam | Bard-Davol | 1050020 | Important to stop any minor bleeding instantly. |
C&B Metabond | Parkell | S380 | Much stronger than regular dental acrylic. |
Artificial cerebro spinal fluid (ACSF) | Tocris | 3525 | |
Puralube opthalmic ointment | Dechra | 17033-211-38 | |
Mice | JAX | 664 | |
Prairie Ultima multiphoton microscope | Olympus | ||
JRGECO1a (AAV9.Syn.NES-jRGECO1a.WPRE.SV40) | UPENN Vector Core |