L’obiettivo di questo protocollo è di descrivere passo passo la tecnica di costrizione aortico trasversale mininvasiva (TAC) in topi. Dall’eliminazione di intubazione e la ventilazione che sono obbligatori per la procedura standard comunemente utilizzata, TAC mininvasiva semplifica la procedura operativa e riduce lo sforzo messo sull’animale.
Restringimento aortico trasversa (TAC) in topi è una delle tecniche chirurgiche più comunemente usate per prove sperimentali di pressione indotta da sovraccarico lasciato l’ipertrofia ventricolare (LVH) e della sua evoluzione verso lo scompenso cardiaco. Nella maggior parte delle indagini segnalate, questa procedura viene eseguita con intubazione e ventilazione dell’animale che rende impegnativo e che richiede tempo e aggiunge al carico chirurgico per l’animale. L’obiettivo di questo protocollo è di descrivere una tecnica semplificata di mininvasiva TAC senza intubazione e ventilazione dei topi. Al fine di raggiungere la mortalità bassa ed alta efficienza nell’induzione LVH sono dati risalto a fasi critiche della tecnica.
Topi maschii C57BL/6 (10-settimana-vecchio, 25-30 g, n = 60) sono stati anestetizzati con una singola iniezione intraperitoneale di una miscela di ketamina e xilazina. In una respirazione spontanea animale seguendo una sternotomia parziale superiore 3-4 mm, un segmento di sutura seta 6/0 threaded attraverso l’occhio di un aiuto di legatura era passato sotto l’arco aortico e legato sopra un ago calibro 27 smussato. Falsità-azionati gli animali hanno subito la stessa preparazione chirurgica ma senza costrizione aortica. L’efficacia della procedura nell’induzione LVH è attestata da un significativo aumento del rapporto peso cuore/corpo. Questo rapporto è ottenuto a giorni 3, 7, 14 e 28 dopo la chirurgia (n = 6-10 in ogni gruppo e ogni punto di tempo). Utilizzando la nostra tecnica, LVH è osservata in TAC rispetto agli animali di sham dal giorno 7 attraverso il giorno 28. Operativa e tardo (oltre 28 giorni) mortalità sono entrambi molto bassa all’1,7%.
In conclusione, la nostra tecnica economica di TAC mininvasiva in topi trasporta bassissima mortalità operativa e post-operatorio ed è altamente efficace nell’indurre LVH. Semplifica la procedura attiva e riduce lo sforzo messo sull’animale. Può essere facilmente eseguita seguendo i passaggi critici descritti nel presente protocollo.
Negli ultimi anni, lo studio dell’insufficienza cardiaca è stato condotto in modelli animali vitali1. Rispetto ai grandi modelli animali di infarto, piccoli modelli animali presentano numerosi vantaggi potenziali. Al lato di minori costi di custodia e manutenzione, piccoli modelli animali sono accessibili ai ricercatori più dovuto il meno complesso di strutture necessarie2.
Modelli murini di insufficienza cardiaca offrono molti degli stessi vantaggi come i modelli di ratto. Inoltre alloggiamento a ridotto Costa3, modelli murini beneficino dalla disponibilità di rilevanti transgenici e knockout (KO) ceppi. La possibilità di cella KO di tipo-specific, inducibile o transgeniche strategie rendono il mouse un prezioso strumento per studiare la patogenesi dell’insufficienza cardiaca e per tentare di identificare nuovi regimi terapeutici3.
Fra il mouse attualmente4sono utilizzati modelli di insufficienza cardiaca, restringimento aortico trasversa (TAC) che in primo luogo è stato descritto da Rockman5 è il modello preferito per generare pressione indotta da sovraccarico ipertrofia ventricolare sinistra (LVH)1 , 3. il grande vantaggio di questo modello è la capacità di consentire la stratificazione di LVH2, sebbene ventricolare sinistra rimodellamento in risposta alla TAC è variabile tra diversi ceppi di topi diversi. In particolare, i topi C57BL/6 sviluppano rapida dilatazione di LV dopo la TAC che non può verificarsi con altri ceppi4,6,7.
L’improvvisa comparsa di ipertensione raggiunto con TAC cause un circa 50% aumento di LV massa entro 2 settimane, permettendo di esaminare rapidamente l’attività degli interventi farmacologici o molecolari allo scopo di modulare lo sviluppo di LVH4. L’induzione acuta di ipertensione severa di TAC non esattamente riprodurre l’ipertrofia ventricolare di sinistra progressiva e rimodellamento osservato nella regolazione clinica di stenosi aortica o ipertensione arteriosa. Tuttavia, questo modello viene utilizzato da molti ricercatori per identificare e modificare i nuovi bersagli terapeutici nell’insufficienza cardiaca4.
Esecuzione di TAC nei topi richiede una maggiore esperienza chirurgica di quella richiesta per altre tecniche utilizzate per indurre LVH e conseguente insufficienza cardiaca2. Maggior parte degli autori per eseguire questa procedura intubating e ventilazione l’animale2,8, che rende questa procedura più esigente e che richiede tempo e aggiunge al carico chirurgico per l’animale. Solo pochi ricercatori hanno utilizzato mininvasiva TAC nel loro studio con breve accenno alla procedura chirurgica9,10,11.
L’obiettivo di questo protocollo è di descrivere passo passo una tecnica semplificata e facile da usare di mininvasiva costrizione trasversale aortica nei topi, evidenziando le fasi critiche della procedura. Seguendo questi passaggi chiavi, uno può facilmente eseguire questa tecnica.
L’obiettivo di questo protocollo è di presentare un’illustrazione passo passo della tecnica chirurgica per mininvasiva trasversale aortica costrizione in topi. Descrizione tecnica dettagliata di costrizione trasversale aortica nei topi è stato segnalato da altri autori2,8. Tuttavia, questi ricercatori eseguono un intervento chirurgico dopo l’intubazione e la ventilazione degli animali. L’uso di un ulteriore passaggio di intubazione-ventilazione aumenta la compl…
The authors have nothing to disclose.
Questo lavoro è stato supportato da un grant (N ° 32016) della Fondazione Svizzera cardiovascolare a RT.
Surgical microscope | Olympus | SZX2-TR30 | |
Razor | Rowenta | Nomad TN3650FO | |
Sutures: | |||
Polypropylene 7/0 | Ethicon | BV-1X | |
Polypropylene 6/0 | BBraun | C0862061 | |
Silk 6/0 ligature | FST | 18020-60 | |
Polypropylene 4/0 | Ethicon | 8683 | |
Polypropylene 5/0 | Ethicon | Z303 | |
Drugs: | |||
Ketamin | Merial | Imalgène 1000, LBM154AD | |
Xylazine | Bayer | Rompun 2%, KP09PPC | |
Buprenorphine | Ceva | Vetergesic, 072013 | |
Instruments: | |||
Bone nippers | Fine Surgical Tools | 16101-10 | |
Ligation aid | Fine Surgical Tools | 18062-12 | |
Tying forceps | Fine Surgical Tools | 18026-10 | |
Needle holder Crile-Wood | Fine Surgical Tools | 12003-15 | |
Microsurgery forceps | Fine Surgical Tools | 11003-12 | |
Microsurgery forceps | Fine Surgical Tools | 11002-12 | |
Tissue forceps | Fine Surgical Tools | 11021-12 | |
Microsurgery needle holder | Fine Surgical Tools | 12076-12 | |
Microsurgery scissors | Fine Surgical Tools | 91501-09 | |
Mayo scissors | Fine Surgical Tools | 14511-15 | |
11-blade knife | Fine Surgical Tools | 10011-00 | |
RNA extraction and qPCR: | |||
TriReagent | Euromedex | TR-118-200 | |
Rneasy Mini kit | Qiagen | 74704 | |
Qubit Fluorimetric RNA assay | Fisher Scientific | 10034622 | |
RNA 6000 Nano kit | Agilent | 5067-1511 | |
High Capacity cDNA kit | Fisher Scientific | 10400745 | |
Taqman Master Mix | Fisher Scientific | 10157154 | |
Taqman BNP primers | Fisher Scientific | Mm01255770_g1 | |
Taqman ANP primers | Fisher Scientific | Mm01255747_g1 | |
Taqman ACE primers | Fisher Scientific | Mm00802048_m1 | |
Taqman Col1a1 primers | Fisher Scientific | Mm00801666_g1 | |
Taqman TGFb primers | Fisher Scientific | Mm01178820_m1 | |
Taqman Gapdh primers | Fisher Scientific | Mm99999915_g1 | |
ABIPrism Thermocycler | Applied Biosystems | 7000 | |
Software: | |||
GraphPad Prism | GraphPad | Prism 7 | |
Animal food | |||
Complete diet for adult rats/mice | Safe | UB220610R |