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Articolo metodologico

Tecnica di costrizione aortico trasversale mininvasiva in topi per induzione dell'ipertrofia ventricolare sinistra

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DOI:

10.3791/56231

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25 settembre 2017

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In questo articolo

Sommario

L'obiettivo di questo protocollo è di descrivere passo passo la tecnica di costrizione aortico trasversale mininvasiva (TAC) in topi. Dall'eliminazione di intubazione e la ventilazione che sono obbligatori per la procedura standard comunemente utilizzata, TAC mininvasiva semplifica la procedura operativa e riduce lo sforzo messo sull'animale.

Abstract

Restringimento aortico trasversa (TAC) in topi è una delle tecniche chirurgiche più comunemente usate per prove sperimentali di pressione indotta da sovraccarico lasciato l'ipertrofia ventricolare (LVH) e della sua evoluzione verso lo scompenso cardiaco. Nella maggior parte delle indagini segnalate, questa procedura viene eseguita con intubazione e ventilazione dell'animale che rende impegnativo e che richiede tempo e aggiunge al carico chirurgico per l'animale. L'obiettivo di questo protocollo è di descrivere una tecnica semplificata di mininvasiva TAC senza intubazione e ventilazione dei topi. Al fine di raggiungere la mortalità bassa ed alta efficienza nell'induzione LVH sono dati risalto a fasi critiche della tecnica.

Topi maschii C57BL/6 (10-settimana-vecchio, 25-30 g, n = 60) sono stati anestetizzati con una singola iniezione intraperitoneale di una miscela di ketamina e xilazina. In una respirazione spontanea animale seguendo una sternotomia parziale superiore 3-4 mm, un segmento di sutura seta 6/0 threaded attraverso l'occhio di un aiuto di legatura era passato sotto l'arco aortico e legato sopra un ago calibro 27 smussato. Falsità-azionati gli animali hanno subito la stessa preparazione chirurgica ma senza costrizione aortica. L'efficacia della procedura nell'induzione LVH è attestata da un significativo aumento del rapporto peso cuore/corpo. Questo rapporto è ottenuto a giorni 3, 7, 14 e 28 dopo la chirurgia (n = 6-10 in ogni gruppo e ogni punto di tempo). Utilizzando la nostra tecnica, LVH è osservata in TAC rispetto agli animali di sham dal giorno 7 attraverso il giorno 28. Operativa e tardo (oltre 28 giorni) mortalità sono entrambi molto bassa all'1,7%.

In conclusione, la nostra tecnica economica di TAC mininvasiva in topi trasporta bassissima mortalità operativa e post-operatorio ed è altamente efficace nell'indurre LVH. Semplifica la procedura attiva e riduce lo sforzo messo sull'animale. Può essere facilmente eseguita seguendo i passaggi critici descritti nel presente protocollo.

Introduzione

Negli ultimi anni, lo studio dell'insufficienza cardiaca è stato condotto in modelli animali vitali1. Rispetto ai grandi modelli animali di infarto, piccoli modelli animali presentano numerosi vantaggi potenziali. Al lato di minori costi di custodia e manutenzione, piccoli modelli animali sono accessibili ai ricercatori più dovuto il meno complesso di strutture necessarie2.

Modelli murini di insufficienza cardiaca offrono molti degli stessi vantaggi come i modelli di ratto. Inoltre alloggiamento a ridotto Costa3, modelli murini beneficino dalla disponibilità di rilevant....

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Protocollo

topi maschii C57BL/6J (10 settimane, 25-30g, n = 60) sono utilizzati nel presente protocollo. Gli animali ricevono un'assistenza umana in conformità con gli orientamenti formulati dal Ministero francese dell'agricoltura e dell'istruzione superiore e della ricerca, e tutte le procedure sono eseguite in conformità con la direttiva comunitaria del Consiglio, del 24 novembre 1986 ( 86/609/CEE) e le leggi francesi. Il protocollo è stato approvato dalla " regionale Comitato etico per CREMEAS di sperimentazione animale " (#2016092816207606).

1. preparazione per la chirurgia

  1. mantenere i topi per una settimana dopo l'arrivo nella....

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Risultati

Operativa e tardiva sopravvivenza
La sopravvivenza operativa era molto alta, 98,3% (59 su 60) per l'intera serie (TAC e animali falsità-azionati). La morte solo attiva era a causa di una complicazione di spurgo in un mouse piallato per operazione finta. Sopravvivenza post-operatorio durante il periodo di osservazione di 28 giorni era anche eccellente, da 98,3% (58/59). La morte postoperatoria soltanto in ritardo si è verificato in un mouse TAC giorno (D) 16, possibilme.......

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Discussione

L'obiettivo di questo protocollo è di presentare un'illustrazione passo passo della tecnica chirurgica per mininvasiva trasversale aortica costrizione in topi. Descrizione tecnica dettagliata di costrizione trasversale aortica nei topi è stato segnalato da altri autori2,8. Tuttavia, questi ricercatori eseguono un intervento chirurgico dopo l'intubazione e la ventilazione degli animali. L'uso di un ulteriore passaggio di intubazione-ventilazione aumenta la comples.......

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno alcun conflitto di interessi di divulgare.

Ringraziamenti

Questo lavoro è stato supportato da un grant (N ° 32016) della Fondazione Svizzera cardiovascolare a RT.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Microscopio operatorioOlympusSZX2-TR30
RasoioRowentaNomad TN3650FO
Suture:
Polipropilene 7/0EthiconBV-1X
Polipropilene 6/0BBraunC0862061
Seta 6/0 legatura FST18020-60
Polipropilene 4/0Ethicon8683
Polipropilene 5/0EthiconZ303
Farmaci:
KetaminaMerialImalg... ne 1000, LBM154AD
XilazinaBayerRompun 2%, KP09PPC
BuprenorfinaCevaVetergesic, 072013
Instruments: 
Tronchesi osseiStrumenti chirurgici fini16101-10
Ausilio per la legaturaStrumenti chirurgici fini18062-12
Pinze per legaturaStrumenti chirurgici fini18026-10
Porta aghi Strumenti chirurgici fini in legno Crile12003-15
Pinze per microchirurgia Strumenti chirurgici di precisione11003-12
Pinze per microchirurgia Strumenti chirurgici di precisione11002-12
Pinze per tessutiStrumenti chirurgici di precisione11021-12
Porta aghi per microchirurgiaStrumenti chirurgici di precisione12076-12
Forbici per microchirurgiaStrumenti chirurgici di precisione91501-09
Forbici MayoStrumenti chirurgici di precisione14511-15
Coltello a 11 lameChirurgia fine Strumenti10011-00
Estrazione dell'RNA e qPCR:
TriReagentEuromedexTR-118-200
Rneasy Mini kitQiagen74704
Qubit Saggio fluorimetrico dell'RNAFisher Scientific10034622
kit RNA 6000 NanoAgilent5067-1511
Kit cDNA ad alta capacitàFisherScientific 10400745
Taqman Master MixFisher Scientific10157154
Taqman Primer BNPFisher ScientificMm01255770_g1
Taqman ANP primerFisher ScientificMm01255747_g1 
Primer Taqman ACE FisherScientificMm00802048_m1
Primer Taqman Col1a1 Fisher ScientificMm00801666_g1
Taqman TGFb primerFisher ScientificMm01178820_m1
Taqman Gapdh primerFisher ScientificMm99999915_g1
ABIPrism  ThermocyclerApplied Biosystems7000
Software:
GraphPad Prism GraphPadPrism 7
Cibo per animali
Dieta completa per ratti/topi adultiSafe UB220610R

Riferimenti

  1. Molinari, F., Malara, N., Mollace, V., Rosano, G., Ferraro, E. Animal models of cardiac cachexia. Int. J. Cardiol. 219 (15), 105-110 (2016).
  2. Tarnavski, O. Mouse surgical models in cardiovascular research. Methods. Mol. Biol. 573, 115-137 (2009).
  3. Verma, S. K., Krishnamurthy, P., Kishore, ....

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Ristampe e permessi

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