एसएच-SY5Y कोशिकाओं की चोट प्रेरित-ग्लूकोज के अभाव के खिलाफ एक न्यूरो सुरक्षात्मक एजेंट के रूप में एक वायुमंडलीय दबाव प्लाज्मा जेट के नए आवेदन
Summary
ग्लूकोज के अभाव पर कम खुराक वायुमंडलीय दबाव प्लाज्मा उपचार के न्यूरोप्रोटेक्टिव आवेदन के लिए एक प्रोटोकॉल-एसएच SY5Y चोटों प्रेरित.
Abstract
वायुमंडलीय दबाव प्लाज्मा जेट (APPJ) हाल के वर्षों में कई विषयों से शोधकर्ताओं का ध्यान आकर्षित किया है क्योंकि इसके उत्सर्जन प्रतिक्रियाशील नाइट्रोजन प्रजातियों (RNS) और प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों (ROS) के कई प्रकार शामिल हैं । हमारे पिछले अध्ययन oxidative तनाव प्रेरित चोटों के खिलाफ APPJ के cytoprotective प्रभाव दिखाया गया है । वर्तमान अध्ययन के उद्देश्य से एक विस्तृत इन विट्रो उपचार प्रोटोकॉल में ग्लूकोज के अभाव पर हीलियम APPJs के न्यूरोप्रोटेक्टिव अनुप्रयोगों के बारे में प्रदान करने के लिए है-SY5Y कोशिकाओं में चोट प्रेरित. एसएच-SY5Y मानव neuroblastoma-व्युत्पंन सेल लाइन RPMI १६४० में बनाए रखा गया था 15% भ्रूण बछड़ा सीरम के साथ पूरक । इसके बाद कल्चरल मीडियम को APPJ ट्रीटमेंट से पहले ग्लूकोज के बिना RPMI १६४० में बदल दिया गया । एक सेल मशीन में एक 1 एच मशीन के बाद, सेल व्यवहार्यता सेल गिनती 8 किट का उपयोग कर निर्धारित किया गया था । परिणाम से पता चला है कि, ग्लूकोज अभाव समूह की तुलना में, APPJ के साथ इलाज कोशिकाओं को एक खुराक पर निर्भर तरीके से काफी वृद्धि हुई कोशिका व्यवहार्यता प्रदर्शित, 8 एस के साथ एक इष्टतम खुराक के रूप में/ इस बीच, हीलियम प्रवाह ग्लूकोज वंचित-प्रेरित कोशिका हानि पर कोई प्रभाव नहीं पड़ा । हमारे परिणाम संकेत दिया है कि APPJ संभावित केंद्रीय तंत्रिका ग्लूकोज के अभाव से संबंधित प्रणाली में रोगों के लिए एक उपचार विधि के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है । इस प्रोटोकॉल भी विभिंन विकलांगता के साथ अंय कोशिकाओं के लिए एक cytoprotective आवेदन के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है, लेकिन कोशिका संस्कृति और APPJ उपचार की स्थिति फिर से समायोजित किया जाना चाहिए, और उपचार खुराक अपेक्षाकृत कम होना चाहिए ।
Introduction
वयस्क मस्तिष्क लगभग विशेष रूप से सामांय शारीरिक स्थितियों के तहत ऊर्जा चयापचय के लिए एक सब्सट्रेट के रूप में ग्लूकोज का उपयोग करता है । मानव मस्तिष्क शरीर के वजन का केवल 2% का गठन लेकिन शरीर के भीतर कुल ग्लूकोज की लगभग 25% की खपत1. यह अच्छी तरह से प्रलेखित है कि ग्लूकोज चयापचय रोग कोरोनरी स्ट्रोक और विभिन्न neurodegenerative रोगों के दौरान प्रमुख रोग परिवर्तन में से एक है, अल्जाइमर रोग सहित (AD), हटिंगटन की बीमारी (एचडी), और पार्किंसंस रोग (पीडी) 2,3. ग्लूकोज की कमी और या तो बिगड़ा ग्लूकोज या oxidative फास्फारिलीकरण सीधे एटीपी उत्पादन को प्रभावित कर सकते हैं और आगे तंत्रिका कोशिका मृत्यु को प्रेरित, जो ंयूरॉन रोग का खतरा बढ़ सकता है, सुझाव है कि कोशिका व्यवहार्यता को बनाए रखने या देरी सेल चोट के बाद ग्लूकोज अभाव इन रोगों के इलाज के लिए एक उचित दृष्टिकोण हो सकता है. ग्लूकोज मॉडुलन के माध्यम से न्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभाव की जांच, विरोधी भड़काऊ एजेंटों पर ध्यान केंद्रित, आयन चैनल मॉडुलन, मुक्त कट्टरपंथी मेहतरों, neurotrophic कारकों, आदि ब्याज की गई है । हालांकि, अनुवाद इन न्यूरोप्रोटेक्टिव दृष्टिकोण से नैदानिक अभ्यास करने के लिए चेन्नाई से सफल नहीं किया गया है4।
वायुमंडलीय दबाव प्लाज्मा जेट विमानों (APPJs) वायुमंडलीय कम तापमान गैस निर्वहन प्रौद्योगिकी है कि हाल के वर्षों में कई विषयों से बहुत से शोधकर्ताओं का ध्यान आकर्षित किया है की एक नई तरह के होते हैं । APPJs कैंसर कोशिका उपचार के रूप में विभिंन जैव चिकित्सा अनुप्रयोगों में दशकों के लिए इस्तेमाल किया गया है, बैक्टीरियल निष्क्रियता, रक्त जमावट, घाव हीलिंग, मौखिक चिकित्सा, आदि5,6, कई प्रकार के अपने उत्सर्जन के कारण प्रतिक्रियाशील नाइट्रोजन प्रजातियों (RNS) और प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों (ROS) (चित्रा 1)7। पिछले प्लाज्मा जैव चिकित्सा आवेदन मुख्य रूप से oxidative और/या बैक्टीरिया, कोशिकाओं, और ऊतकों पर nitrative तनाव पर ध्यान केंद्रित8। हालांकि, APPJ भी एक “डबल धार तलवार” RNS और ROS के बाद से हो सकता है महत्वपूर्ण कई शारीरिक और pathophysiological प्रक्रियाओं से संबंधित अणुओं संकेत intracellular है9। नाइट्रस ऑक्साइड (नहीं) जैविक प्रक्रियाओं की एक विस्तृत श्रृंखला को नियंत्रित करता है और विशेष रूप से केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (सीएनएस) में मानव शरीर में एक दोहरी भूमिका निभाता है । नहीं के निम्न स्तर दोनों विट्रो में और कई संकेत रास्ते10के माध्यम से vivo में उनकी न्यूरोप्रोटेक्टिव गतिविधियों को दिखाया गया है. हमारे पिछले अध्ययन पहले बताया कि हीलियम APPJ-प्रेरित कोई उत्पादन oxidative तनाव प्रेरित चोटों के खिलाफ APPJ के न्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभाव में शामिल किया गया था11. हालांकि, अन्य घायलों पर APPJs के प्रभाव की सूचना नहीं दी गई है । इसलिए, वर्तमान अध्ययन का उद्देश्य एक में इन विट्रो उपचार प्रोटोकॉल ग्लूकोज अभाव पर हीलियम APPJ के न्यूरोप्रोटेक्टिव अनुप्रयोगों के बारे में प्रदान करने के लिए है-एसएच SY5Y कोशिकाओं में चोट प्रेरित. पिछले अध्ययनों से अलग है, हमारे प्रोटोकॉल अत्यधिक प्लाज्मा प्रेरित चोटों के परिणामों के बिना न्यूरोप्रोटेक्टिव अनुप्रयोगों के लिए कम खुराक प्लाज्मा उपचार का इस्तेमाल किया, यह दर्शाता है कि APPJ उपचार संभावित रूप से एक उपंयास “नहीं दाता दवा के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है “भविष्य के अनुसंधान के लिए और यहां तक कि नैदानिक अनुवाद के लिए । इस प्रोटोकॉल भी विभिंन विकलांगता के साथ अंय प्रकार की कोशिका के लिए एक cytoprotective आवेदन के रूप में इस्तेमाल किया जा सुझाव दिया गया था, लेकिन APPJ उपचार की स्थिति फिर से समायोजित किया जाना चाहिए और उपचार खुराक अपेक्षाकृत कम होना चाहिए ।
Protocol
1. APPJ डिवाइस की तैयारी
सावधानी: कृपया उपयोग करने से पहले सभी प्रासंगिक सामग्री सुरक्षा डेटा पत्रक (MSDS) से परामर्श करें । एक धुएं डाकू और व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरण (सुरक्षा चश्मा, सुरक्षात्मक द?…
Representative Results
Discussion
SH-SY5Y कोशिकाओं एक मानव neuroblastoma-व्युत्पन्न सेल लाइन रहे हैं और व्यापक रूप से neurotoxicity या neuroprotection12पर इन विट्रो अध्ययनों में के लिए एक उपयुक्त सेल मॉडल के रूप में प्रयोग किया जाता है । एसएच-SY5Y सेल लाइन ग्ल?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम के लिए बीजिंग तंत्रिकाशल्यक संस्थान (2014-11), चीन की राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (११४७५०१९ और ८१२७१२८६) और बीजिंग प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (सं. ७१५२०२७) के नवाचार कोष द्वारा समर्थित किया गया था ।
Materials
| SH-SY5Y cell line | China Center for Type Culture Collection | 3111C0001CCC000026 | |
| RPMI 1640 medium | Thermo Scientific | 21875091 | stored at 4 °C |
| RPMI 1640 medium no glucose | Thermo Scientific | 11879020 | stored at 4 °C |
| fetal calf serum | Thermo Scientific | 16000044 | stored at -20 °C |
| tripsin-EDTA solution | Solarbio | T1300 | stored at 4 °C |
| 96 wells plate | corning | 3599 | |
| Cell Counting Kit-8 (CCK-8) | Dojindo Laboratories | CK04 | stored at 4 °C |
| microplate reader | Tecan | M200 Pro | for measuring the absorbance at 450 nm |
| High – voltage Power Amplifier | Trek | PD06087 | for amplifing the power |
| Function Signal Generator | MaZe Electronics Science&Technology | AT30120 | for providing the specific signal |
| High – Voltage Probe | Tektronix | P6015A | for detecting high voltage |
| Digital Oscilloscope | Tektronix | DPO4104B | for displaying the signal |
Riferimenti
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