神経変性疾患のマウスモデルで FITC 標識アルブミンの点滴静注による血液脳関門透過性の評価
Summary
本研究では神経変性条件下で血液-脳関門の破壊を評価するための簡単で効率的な手順を提案する.我々 の目的を達成するために我々 は高分子量かにラベル (FITC) を注入-マウス頸静脈にアルブミン静脈および蛍光顕微鏡による脳実質にその漏洩を評価します。
Abstract
血液脳関門 (BBB) 整合性の破壊は、異なる神経と神経変性疾患の一般的な機能です。開発と BBB の変化を正確に検出する信頼性の高いプロシージャの検証が重要であるし、便利なツールを表す摂動の BBB の恒常性と脳疾患の病態との間の相互作用は、さらなる調査を必要とするが潜在的疾患を予測するためターゲットを絞った治療戦略を進行と開発。
ここでは、BBB の BBB 透過性の欠陥は明らかに早熟で検出可能なハンチントン病のマウスの前臨床モデルで発生するそのような変性条件で漏れを評価するための簡単で効率的な手順を提案します。病気。具体的には、高分子量かにラベル (FITC)-アルブミン、後者は障害時にのみ、BBB を交差することがあるがマウスの頸静脈と血管や実質地区におけるその分布に鋭く融合その後、蛍光顕微鏡によって決定されます。
脳実質の緑色蛍光アルブミンの蓄積異常 BBB 透過性の指標として機能し、J の画像処理ソフトウェアを使用して量的に表わされるとき緑の蛍光強度として報告されます。
Introduction
中枢神経系 (CNS) 内の恒常性は、適切なコミュニケーションと神経細胞の機能のための前提条件です。中枢神経系柔密によって封鎖される周辺から、内皮細胞血液脳関門 (BBB)、末梢血流と脳との間のインターフェイスを表し、これらの 2 つの地区の1 間のクロストークで極めて重要な役割を果たしています。 ,2。BBB は複雑な専門マイクロ血管内皮細胞) 細胞複合体 – タイトな接合 (TJs) – によって互いにリンク、囲まれて周を主体とする立体構造物の動的ニューロン終末とアストロ サイトの足プロセス1,2。
生理学的な条件の下でそのまま BBB の非常に低透磁率により、脳の栄養素および他の分子の輸送の厳しい規制とにより中枢神経系の変化からユニークな保護、潜在的な末梢神経活動に影響を与える可能性があります血液の組成は、1,2,3を侮辱します。
BBB の整合性および高められた透磁率の中断長い神経の多くの重要な機能を構成するため知られている、神経変性障害4ただしハンティントンの病気 (HD)5,6, を含む、かどうかこのような機能不全が原因の現象や病気の過程で繁殖イベントはまだ不明です。BBB 破壊のタイミングもとらえどころのないまま、しかし、中断の BBB の整合性が、後半イベント早期のステップ6ではなく、病気の進行で,7を表さないことを示します出現の私達のグループと他の証拠,8、長期的な影響を持っている可能性があります。
これを念頭において、早熟役に立つ病気の進行と脳損傷を予測し、正常に代替しよりターゲットを絞った介入できるを開発する戦略を開発するために神経変性の BBB の内訳を明らかにすることが重要です。このような混乱の臨床結果を軽減します。したがって、BBB 減損の信頼性の高い画像は、脳疾患の診療・研究の主要な重要なのです。
本稿では高分子量フルオレセイン イソチオ シアン酸ラベル-アルブミン (FITC-アルブミン) を使用して、HD マウス モデルの BBB 透過性の評価の成功と単純な手順をについて説明します。通常、脳実質にバリアを越えることはできません FITC-アルブミンの漏出を BBB 漏れの指標として測定しました。この手法は、ラットと cerebrovasculature 障害9,10によって特徴付けられる他の病理学の条件に容易に適応可能であります。
Protocol
Representative Results
Discussion
我々 はここで説明する手法は、主に脳疾患条件下で BBB の漏れを検出するため便利です。BBB の機能不全が多様な神経学的疾患4の共通の特徴として注目されています。我々 は以前 HD6のようなまれな神経変性疾患のマウスモデルで BBB 整合性の初期の異常を説明するのにこのアプローチを使用します。
このメソッドは、相対的な簡易性?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品が”Fondazione Neuromed”でサポートされている、健康参加する「Ricerca グラーヴェ」イタリア省の資金
Materials
| Albumin-fluorescin isothiocyanate conjiugate | SIGMA | A9771-100MG | |
| pAb anti-Laminin | Novus Biologicals | NB300-144 | |
| CY3 anti-rabbit made in goat | MILLIPORE | AP132 | |
| SUPERFROST PLUS | Thermo Scientific | J1800AMNZ | |
| Cover Slips 24 X 50 mm | Thermo Scientific (DIAPATH) | 61050 | |
| Kilik Optimal Cutting Temperature (OCT) compound | Bio Optica | 05-9801 | |
| VECTASHIELD Mounting Media | VECTOR | H-1500 | Mounting media with DAPI |
| iNSu/Light Insulin Disposible Syringe | RAYS Health &Safety | INS1ML26G13 | |
| 30G 1/2" | BD Microlance | 304000 | Needle for Insulin disposible Syringe |
| Scalpel Handle | F.S.T. | 91003-12 | |
| #22 Disposable Scalpel blads | F.S.T. | 10022-00 | |
| Fine Iris scissors 10.5 cm | F.S.T. | 14094-11 | |
| Dumont Forceps #5745 45° 0.10 x 0.06 mm | F.S.T. | 11251-35 | |
| Graefe Forceps 10 cm | F.S.T. | 11051-10 | |
| Dumont Forceps #5 0.1 X 0.06 mm | F.S.T. | 11251-20 | |
| Medical patch | Medicalis | 34788 | |
| Sterile disposable towel drape | Dispotech | TVO50VE | |
| Stereoscopic Microscope | NIKON | SMZ 745 T | |
| Optic Illuminator LED light (C-FLED2) | NIKON | 1003167 | Optic Illuminator for Stereoscopic Micrscope |
| Eclipse Ni-U Microscope | Nikon | 932162 | Epifluorescence Microscope |
| Microscope digital Camera | Nikon | DS-Ri2 | Microscope camera |
| Intenslight | Nikon | C-HGFI | Microscope lamp |
| NIS-Elements 64 bit | Nikon | AR 4.40.00 | Analysis Software |
| Electric Razor | Gemei | GM-3007 |
Riferimenti
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