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Articolo metodologico

Laminotomia per accesso del ganglio di radice dorsale lombare e l'iniezione nei suini

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DOI:

10.3791/56434

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10 ottobre 2017

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In questo articolo

Sommario

Descriviamo un metodo per laminotomia in maiali che fornisce l'accesso ai gangli della radice dorsale lombare (DRG) per iniezione intraganglionic. Progresso di iniezione è monitorato intraoperatively e istologicamente confermato fino a 21 giorni dopo la chirurgia. Questo protocollo potrebbe essere utilizzato per futuri studi preclinici su iniezione di DRG.

Abstract

Gangli delle radici dorsali (DRG) sono anatomicamente ben definite strutture che contengono tutti i neuroni sensoriali primari sotto la testa. Questo fatto rende gli obiettivi attraenti DRG per iniezione di approcci terapeutici volti a trattare il dolore cronico. In modelli animali di piccole dimensioni, il laminectomy è stato utilizzato per facilitare l'iniezione di DRG perché coinvolge la rimozione chirurgica dell'osso vertebrale che circondano ciascun DRG. Dimostriamo una tecnica per iniezione intragangliari di DRG lombare in una grande specie animale, vale a dire, suina. Laminotomia viene eseguita per consentire l'accesso diretto al DRG utilizzando materiali, strumenti e tecniche neurochirurgiche standard. Rispetto al più vasta rimozione dell'osso tramite laminectomy, implementiamo laminotomia per conservare l'anatomia spinale ottenendo accesso sufficiente di DRG. Intraoperative progresso dell'iniezione di DRG è controllata mediante un colorante non tossico. A seguito di eutanasia il giorno post-operatorio 21, il successo di iniezione è determinato dall'istologia per distribuzione intragangliari di 4', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI). Iniettiamo una soluzione biologicamente inattiva per illustrare il protocollo. Questo metodo potrebbe essere applicato in futuro preclinica per soluzioni terapeutiche di destinazione per DRG. La nostra metodologia dovrebbe facilitare il test la traducibilità dei paradigmi animale piccoli intragangliari in una specie animale. Inoltre, questo protocollo può servire come una risorsa fondamentale per chi ha intenzione di studi preclinici di iniezione di DRG in maiali.

Introduzione

Gangli delle radici dorsali (DRG) sono raccolte anatomicamente discreti, un neurone situati lungo la colonna vertebrale. Ciascun DRG contiene i neuroni sensoriali primari che codificano e trasmettere stimoli periferici al sistema nervoso centrale (SNC) da regioni specifiche del corpo. Per esempio, il dolore dell'osteoartrite inizia quando recettori del dolore che si trova a circa un giunto percepiscono stimoli nocivi. Questo processo è definito nocicezione. A lungo termine consapevolezza di stimoli nocivi conduce a dolore cronico 1.

Il dolore cronico è un frequente soggetto di studio preclinico 2

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Protocollo

tutti i metodi descritti qui sono stati approvati da istituzionale Animal Care ed uso Committee (IACUC) della Mayo Clinic.

1. prerequisiti di rigore e riproducibilità

  1. per garantire il rigore del design, seguono gli standard nazionali di laboratorio di buona pratiche sono in ogni momento e ottenere l'approvazione interna di IACUC (o comitato simile) prima di qualsiasi animale coinvolgimento in esperimenti.
    Nota: Questo protocollo è stato progettato per mantenere un approccio clinicamente fedele. Così, i materiali, strumenti e tecniche coinvolte sono descritte in modo identico ai più alti standard clinici in esseri umani. P....

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Risultati

Valutazione istologica della diffusione per iniettato
Consegna di successo di injectate per DRG è determinata dalla valutazione istologica di DAPI diffondere. La tecnica prevede il posizionamento della punta dell'ago nel centro tridimensionale del DRG. Pertanto, consegna di successo è determinata dalla valutazione dell'entità di DAPI colorazione da sezioni istologiche sia vicino (sezioni centrali DRG) e lontano (periferici DRG sezioni) per la punta dell'ago. Figura 1A e <.......

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Discussione

Abbiamo cercato di descrivere un metodo per l'esposizione chirurgica di DRG via laminotomy e intragangliari iniezione in una sana grande specie animali, in particolare, suina. Nei roditori, un metodo simile è stato dettagliato 12 e utilizzato per fornire gli agenti farmacologici convenzionali 8,10 e vettori virali 6,7,9,

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Dichiarazioni

Nessuno; gli autori non hanno conflitti di interesse relativi a questo studio.

Ringraziamenti

Lo studio è stato effettuato con il supporto dalla Fondazione famiglia Schulze (per A.S.B.).

....

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Grande fionda per animali umaniBritz & Azienda002539Modificato per includere l'apertura addominale
Elettrodo adesivo per il ritorno del paziente - 9 polliciMedtronicE7506-Ranger
sistema di riscaldamento del sangue e dei fluidi3M24500-Fluido
di Ringer lattatoHospira0409-7953-09-Dispositivo
riscaldamento dell'aria Force3M77500-
Duraprep soluzione con applicatore, 26 mL (0,7% iodio povacrylex, 74% alcool isopropilico)3M8630-Asciugamani
chirurgici monouso steriliMedlineMDT2168286-Ioban
2 incisa3M6651EZSB-Bomboletta
di aspirazione monouso e tuboMedlineDYND44703H-Button
switch elettrochirurgico monopolareMedtronicE2450H-Pinza
elettrochirurgica bipolare diritta liscia fine, lamaBovieA826-
Miltex4-315-
#11 lamaMiltex4-311-4
x 4 garza chirurgicaDynarex3262-Weitlaner
divaricatore autobloccante, 8 polliciMiltex11-618-
Divaricatore autobloccante Meyerding, 1 x 2 3/8 polliciSklar42-2078-Gelpi
divaricatore autobloccante, 7 polliciSklar60-6570-Freer
elevatore, 5 mmMedline
MDS4641518F-Cera osseaEthiconW31G-Rongeur
del disco intervertebrale Spurling, 3 mmSklar42-2852-
Spurling 45 gradi, rongeur Kerrison up-biting, 2 mmMedline
MDS4052802-Leksell rongeur angolato, 2 mmSklar40-4097-Gelfoam
, misura 50Pfizer
AZL32301-Cottonoid pattyMedtronic
8004007-Frazier punta di aspirazione, 6 FrSklar50-2006-Frazier
punta di aspirazione, 10 FrSklar50-2010-Dandy
gancio nervoso ad angolo retto smussatoMedlineMDS4005220-Sutura
nylon, 6-0Ethicon697G-Castroviejo
micro porta aghi liscioMedlineMDG2428614-22
gauge Ago spinale a punta QuinkeHalyard Health18397-32
gauge Ago CED con mozzo Luer di bloccaggioVedi commentin/aCome in: Pleticha, J., Maus, T.P., Christner, J.A., Marsh, M.P., Lee, K.H., Hooten, W.M., Beutler, A.S. Somministrazione minimamente invasiva potenziata per convezione di farmaci biologici nei gangli della radice dorsale: convalida nel modello di maiale e modellazione prospettica nell'uomo. Nota tecnica. J Neurosurg. 121(4), 851-8 (2014).
Tubo in polietilene, siringa da 5 piediScientific CommoditiesBB31695-PE/05-Monoject
pompa a siringaChemyx10050-DAPI
Sigma-AldrichD9542-Fast
Green FCFSigma-AldrichF7252-Siringa
per irrigazione a bulboMedlineDYND20125-Pinze
Adson a denti finiMedlineMDS1000212-Vicryl
sutura, 0EthiconJ603H-Vicryl
sutura, 2-0EthiconJ317H-Contatore
dell'agoMedline
NC20FBRGS-Steri-strip chiusura cutanea, 1/2x4 pollici3MR1547-
di telo #15 da 4 1/2 pollici in , Kendall SY15352-NanoJet da 3 mL

Riferimenti

  1. Millan, M. J. The induction of pain: An integrative review. Prog Neurobiol. 57 (1), 1-164 (1999).
  2. Burma, N. E., Leduc-Pessah, H., Fan, C. Y., Trang, T. Animal models of chronic pain: Advances and challenges for clinical translation. J Neurosci Res. , (2016).
  3. Pleti....

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