高分解能質量分析に結合された二次 Nanoelectrospray イオン化を用いたリアルタイム呼吸解析
Summary
高分解能質量分析法の実証に結合する二次 nanoelectrospray イオン化を使用して、リアルタイムで呼気の化学組成を評価するためのプロトコル。
Abstract
呼気揮発性有機化合物 (Voc) は、彼らは非侵襲的な方法で病気の診断や環境曝露のバイオ マーカーとして機能するためにかなりの関心を喚起しています。この作品は、二次 nanoelectrospray イオン化結合した高分解能質量分析法 (秒システム人事管理システム) を使用してリアルタイムで呼気中の Voc を特徴付けるためのプロトコルを提案する.自家製秒システム ソース容易に開設さ商業システムのソースで。何百ものピークの呼気のバック グラウンド減算質量スペクトルで観察し、, 質量精度値が-4.0-13.5 ppm と-20.3-1.3 ppm 正と負イオン検出モードでそれぞれ。ピークは、正確な質量と同位体パターンに従って正確な元素組成と割り当てられました。未満 30 s を使用して 1 つの呼気測定と六つのレプリケートされた測定の約 7 分かかります。
Introduction
最新の分析技術の急速な発展と人間の呼気1揮発性有機化合物 (Voc) の何百もを確認されています。これらの Voc 主に起因する肺胞の空気 (健康な大人のための 〜 350 mL) と解剖デッド スペース空気 (~ 150 mL)2、身体代謝3,4,5,6,7 に影響 ,8と環境汚染9、それぞれ。その結果、識別された場合、これらの Voc が非侵襲的な方法で病気の診断や環境曝露のバイオ マーカーとして使用することを約束。
ガスクロマトグラフィー質量分析法 (GC/MS) は最も広く使用されている呼気揮発性有機化合物2、リアルタイム呼吸分析のために開発されている、直接の質量分析の定性・定量分析法の利点があります。高時間分解能と簡単なサンプルの事前準備。プロトン移動反応10MS (PTR MS) などの直接の MS 技術選択イオン フロー チューブ MS (ふるいにかける MS)11、二次エレクトロ スプレー イオン化 MS (SESI MS)12,13 (採掘エレクトロ スプレーとして名前も電離 EESI MS14,15MS) トレース大気中のガス分析 (多賀)16とプラズマ イオン化 MS (PI MS)17に提案されている近年。
SESI はユニバーサル ソフト イオン化テクニック19,20,21; としてよく知られている直接の MS のテクニックのすべてそして、ソースは簡単にカスタマイズし、質量分析計、例えば時間の飛行質量分析計8,15の種類別に結合、イオン トラップ質量分析計14そして orbitrap 質量12 ,18。今まで、SESI MS 使用されています22呼吸器疾患の診断に概日リズム3,6,23, 薬物動態7、8を測定し、代謝経路4等を明らかにします。最近、商業 SESI ソースが利用可能になります。
本研究では簡便でコンパクトなセカンダリ nanoelectrospray イオン源 (Sec システム) がセットアップされ、高分解能質量分析計を結合します。呼吸の呼気揮発性有機化合物のリアルタイム測定も行いました。
Protocol
注意: 使用前に関連するすべての材料安全データ用紙 (MSDS) を参照してください。ください適切な個人用保護具、例えば白衣、手袋、ゴーグル、フルの長さのズボン、閉じてつま先の靴)。 1 秒システム ソースを設定します。 SESI プロセス、すなわち、に従って Sec システム ソースを設定呼吸ガスをエレクトロ スプレー プルームを交差する導入・帯電…
Representative Results
図 3は、 m/z 50 750 両方の正と負イオン検出モードの下で記録の質量範囲の息指紋を示します。291 ピーク (ピーク強度 > 5.0×104)、173 の峰 (ピーク強度 > 3.0×104) それぞれ正と負のイオンの検出モードでバック グラウンド減算息指紋で観察されています。質量スペクトルのピークを識別するために詳細12,</sup…
Discussion
商業システムのソースに基づいて秒システム ソースを構築し、イオン化効率は ESI ソース30を使用してのそれより高い。さらに、イオン化効率をさらに改善、密室でそれ分離プロセスとして周囲の空気からと同時に時間を容易にガスのサンプルとスプレー プルームの混合します。秒システムを使用して、以下のパラメーターはインストール、アプリケーションおよびメンテ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、国家自然科学基金の中国 (第 91543117) によって財政的にサポートされています。
Materials
| Ultrapure water | Merck Millipore, USA | MPGP04001 | Resistance >18.2 MΩ·cm |
| Formic acid | Sigma-Aldrich, USA | F0507 | Corrosive to the respiratory tract. |
| Nitrogen gas | Guangzhou Shiyuan Gas Co. Ltd., China | N.A.a | Purity >99.99% |
| Q Exactive hybrid quadrupole-orbitrap mass spectrometer | Thermo Scientific, USA | 02634L(S/N) | Beware of high voltage and high temperature |
| NanoESI source | Thermo Scientific, USA | ES002373(S/N); ES071(P/N) | Beware of high voltage and high temperature |
| Nano LC pump | Thermo Scientific, USA | 5041.0010A(P/N) | / |
| Xcalibur software (Version 3.0) | Thermo Scientific, USA | BRE0008596 | / |
| Dino-Lite Digital Microscope | Tech Video System (SuZhou) Co.Ltd., China | CQ401833R(S/N) | / |
| Nafion tubing | Perma Pure LLC, USA | ME60 | / |
| PTFE tubing (I.D. 4 mm) | Dongguan Hongfu Insulating Material Co. Ltd., China | N.A. | Beware of the possible loss of polar compounds |
| Mass flow controller | Line-Tech, Korea | M15122007 (S/N) | / |
| Flow meter | Yuyao Industrial Automation Meter Factory, China | 40784 | / |
| aN.A.: not available. |
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Cite This Article
Li, X., Huang, D. D., Du, R., Zhang, Z. J., Chan, C. K., Huang, Z. X., Zhou, Z. Real-time Breath Analysis by Using Secondary Nanoelectrospray Ionization Coupled to High Resolution Mass Spectrometry. J. Vis. Exp. (133), e56465, doi:10.3791/56465 (2018).