यहां हम थूक प्रेरण की तकनीक का वर्णन । यह प्रोटोकॉल भी एक अवकलन सेल गिनती करने के लिए और अधिक विश्लेषण के लिए थूक supernatant और कोशिकाओं को इकट्ठा करने के थूक प्रसंस्करण बताते हैं ।
थूक प्रेरण और प्रसंस्करण की तकनीक एक मांयता प्राप्त गैर इनवेसिव विधि संग्रह और वायुमार्ग, जो अस्थमा की तरह विभिंन श्वसन रोगों में दिलचस्प है से कोशिकाओं के विश्लेषण की अनुमति है, जीर्ण प्रतिरोधी फुफ्फुसीय रोग (सीओपीडी), पुरानी खांसी, या अज्ञातहेतुक फेफड़े की फाइब्रोसिस । इस तकनीक को अच्छी तरह से सहन, सुरक्षित और गैर इनवेसिव है, लेकिन वर्तमान में अनुसंधान सेवाओं और नैदानिक अभ्यास में विशेष केंद्रों के लिए सीमित है, क्योंकि यह तकनीकी तौर पर मांग, समय लेने वाली है, और प्रशिक्षित कर्मचारियों की आवश्यकता है । थूक प्रेरण और विश्लेषण की सफलता की दर के बारे में ८०% है ।
यहां, हम प्रेरण और थूक नमूनों की प्रयोगशाला प्रसंस्करण का वर्णन । थूक salbutamol के साथ hypertonic या isotonic खारा की साँस लेना द्वारा प्रेरित है । प्रसंस्करण के लिए, हम पूरे थूक तकनीक का उपयोग करें । Dithiothreitol (डीटीटी) थूक नमूने के mucolysis की अनुमति के लिए प्रयोग किया जाता है । थूक प्रसंस्करण के प्राथमिक उद्देश्य airway लुमेन में मौजूद कोशिका प्रकार का अध्ययन करने के लिए एक अवकलन सेल गिनती प्राप्त करने के लिए है. अतिरिक्त विश्लेषण भी थूक supernatant और थूक कोशिकाओं है, जो भड़काऊ प्रक्रियाओं और प्रतिरक्षा तंत्र में आगे की जांच की अनुमति दे सकता है पर किया जा सकता है । उदाहरण supernatant थूक में मध्यस्थों का अध्ययन और ऐसे प्रवाह cytometry, जीनोमिक्स, या प्रोटियोमिक् के रूप में थूक कोशिकाओं पर विश्लेषण का एक बड़ा स्पेक्ट्रम प्रदर्शन शामिल हैं.
अंत में, स्वस्थ नियंत्रण, दमा, और सीओपीडी रोगियों में थूक विश्लेषण के प्रतिनिधि परिणाम प्रस्तुत कर रहे हैं ।
कई तरीकों airway सूजन की जांच करने के लिए उपयोग किया जाता है: प्रत्यक्ष माप (जैसे बायोप्सी या bronchoalveolar lavages) और अप्रत्यक्ष तरीके (लक्षण आकलन की तरह, रक्त नमूना विश्लेषण और फेफड़ों समारोह परीक्षण)1। प्रत्यक्ष तकनीक का लाभ है मज़बूती से airway सूजन का आकलन है, लेकिन वे आक्रामक और व्यावहारिक नहीं है क्योंकि रोगी असुविधा और जोखिम के बड़े पैमाने पर1खर्च । अप्रत्यक्ष तरीकों के लिए के रूप में, वे खराब airway सूजन के प्रत्यक्ष मूल्यांकन के साथ सहसंबंधी1।
थूक संग्रह एयरवेज से कोशिकाओं के नमूने के लिए एक और तरीका है और airway सूजन के प्रत्यक्ष आकलन की अनुमति देता है । फिर भी, सहज थूक उत्पादन गरीब गुणवत्ता के नमूनों के लिए नेतृत्व कर सकते हैं और सभी रोगियों के लिए संभव नहीं है2. इस समस्या का उपयोग करके अल्ट्रासोनिक nebulized hypertonic खारा थूक उत्पादन2प्रेरित करने के लिए दूर किया गया है । इस विधि शुरू में Pneumocystis carinii निमोनिया के निदान के लिए मानव इम्यूनो वायरस (एचआईवी) से संक्रमित रोगियों में इस्तेमाल किया गया था3 और १९९२4में स्वस्थ विषयों और दमा के लिए अनुकूलित किया गया था । थूक प्रेरण isotonic खारा5का उपयोग करके और अधिक गंभीर रोगियों में भी संभव है । हालांकि आम तौर पर अच्छी तरह से सहन, खारा की साँस लेना hyperresponsive एयरवेज के साथ रोगियों में आकर्ष कारण हो सकता है5. इसलिए, यह प्रक्रिया1से पहले एक लघु-कार्य बीटा एगोनिस्ट व्यवस्थापित करने के लिए अनुशंसित है । इसके अलावा, हम पहले से पता चला है कि अल्ट्रासोनिक छिटकानेवाला में खारा समाधान करने के लिए salbutamol जोड़ने आगे इस जोखिम को कम6। थूक प्रेरण के लाभ यह है कि यह गैर इनवेसिव2 और सुरक्षित है जब उचित सावधानियों5लिया जाता है ।
थूक नमूने के प्रसंस्करण के लिए, दो तरीकों वर्तमान में साहित्य में इस्तेमाल कर रहे हैं: पूरे थूक तकनीक और प्लग चयन7। हमारी प्रयोगशाला में, पूरे थूक तकनीक का प्रदर्शन किया है । थूक प्रसंस्करण के प्राथमिक उद्देश्य airway लुमेन में मौजूद सूजन के प्रकार का अध्ययन करने के लिए एक अंतर कोशिका गिनती प्राप्त करने के लिए है । हालांकि, कई अतिरिक्त विश्लेषण भी आगे भड़काऊ प्रक्रियाओं और प्रतिरक्षा तंत्र की जांच करने के लिए संभव हैं, या तो थूक supernatant में मध्यस्थों का अध्ययन करके8 या थूक कोशिकाओं पर विस्तृत जांच प्रदर्शन (उदा. , प्रवाह cytometry9, सेल संस्कृतियों10, जीनोमिक्स10, प्रोटियोमिक्10, immunocytochemistry7, में सीटू संकरण7, आदि)
थूक प्रेरण और विश्लेषण की तकनीक वर्तमान में नैदानिक अभ्यास में अनुसंधान सेवाओं और विशेष केंद्रों तक ही सीमित है, क्योंकि यह तकनीकी रूप से मांग, समय लेने वाली है, और प्रशिक्षित स्टाफ1की आवश्यकता है । Airway सूजन अस्थमा जैसे विभिन्न श्वसन रोगों, जीर्ण प्रतिरोधी फुफ्फुसीय रोग (सीओपीडी), क्रोनिक खांसी, या अज्ञातहेतुक फेफड़े फाइब्रोसिस11के लिए इस विधि के साथ जांच की जा सकती है ।
प्रेरित थूक विधि airway डिब्बे का अध्ययन करने के लिए एक उपयोगी उपकरण है । इस तकनीक के कई संभावित आवेदन कर रहे हैं । सबसे पहले, यह प्रतिरक्षा कोशिकाओं और विभिंन श्वसन रोगों में शामिल तंत्र के बारे में ज्ञान में सुधार हो सकता है । उदाहरण के लिए, इस तकनीक रोगियों के बड़े साथियों में airway सूजन की जांच की अनुमति दी है, और यह दिखाया गया है कि दमा रोगियों के बारे में आधा एक असामांय airway इओसिनोफिलिक सूजन की विशेषता है15, 16 , 17, जबकि सीओपीडी रोगियों आमतौर पर एक उठाया थूक प्रदर्शन न्युट्रोफिल18गिनती । इस तकनीक भी अज्ञातहेतुक फेफड़े फाइब्रोसिस के साथ रोगियों में airway सूजन के बेहतर लक्षण वर्णन करने के लिए योगदान दिया है और सबूत मध्यस्थों कि इस रोग के लिए योगदान कर सकते हैं19। दूसरा, प्रेरित थूक की तकनीक उपचार के लिए प्रतिक्रिया की भविष्यवाणी करने के लिए उपयोगी हो सकता है । उदाहरण के लिए, थूक इयोस्नोफिल्स की एक असामान्य प्रतिशत की उपस्थिति corticosteroid जवाबदेही11,18के एक पूर्वानुमान मार्कर होने के लिए दिखाया गया है. अस्थमा और सीओपीडी में थूक इयोस्नोफिल्स के प्रतिशत को सामान्य करने के लिए corticosteroids की खुराक सिलाई, वर्तमान नैदानिक दिशा निर्देशों के अनुसार उपचार के समायोजन से अधिक तीव्रता की संख्या को कम करने में अधिक प्रभावी होना दिखाया गया था11 ,20,21. तीसरा, थूक विश्लेषण लक्षित चिकित्सा विकसित करने में मदद कर सकते हैं । उदाहरण के लिए, सीओपीडी और कुछ दमा रोगियों में थूक न्यूट्रोफिल की एक असामान्य संख्या की उपस्थिति antineutrophilic उपचार के विकास के लिए नेतृत्व किया गया है11. चौथा, तकनीक निदान में एक भूमिका निभा सकता है । उदाहरण के लिए, थूक eosinophilia की उपस्थिति गैर-दमा इओसिनोफिलिक ब्रोंकाइटिस11का निदान करने के लिए आवश्यक है ।
एक अंतर कोशिका गिनती प्राप्त करने के अलावा, थूक उत्प्रेरण की तकनीक भी थूक supernatant या थूक कोशिकाओं का अध्ययन करके, कई अतिरिक्त विश्लेषण के प्रदर्शन की अनुमति देता है. थूक supernatant के साथ उदाहरण मध्यस्थों का विश्लेषण8,19,22 और इयोस्नोफिल्स22के लिए नमूने के chemotactic गतिविधि का आकलन शामिल हैं । थूक कोशिकाओं से, आरएनए निकाला जा सकता है और microRNA या जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण के लिए इस्तेमाल किया19,23 . थूक कोशिकाओं को भी प्रवाह द्वारा विश्लेषण किया जा सकता है cytometry9,23 जो अनुमति देता है, दूसरों के बीच में, immunophenotyping और छंटाई कोशिकाओं । इसके अलावा, थूक कोशिकाओं को10प्रसंस्कृत किया जा सकता है, और उनके मध्यस्थ उत्पादन इन विट्रो24में मापा जा सकता है । यह ध्यान देने योग्य बात है कि इस मामले में, मध्यस्थ सामग्री क्या थूक supernatant में पाया जा सकता से अलग है लायक है । दरअसल, थूक supernatant में मध्यस्थों airway निवासी कोशिकाओं से स्राव से प्रभावित हो सकता है और प्लाज्मा इंग्लैण्ड द्वारा, थूक सेल संस्कृति के विपरीत24मॉडल. अंत में, immunocytochemistry और सीटू संकरण में भी थूक कोशिकाओं7का उपयोग कर किया जा सकता है ।
प्रेरित थूक तकनीक कुछ सीमाएं हैं । प्रेरण चिकित्सा पर्यवेक्षण के तहत किया जाना चाहिए । इसके लिए मरीजों को गहन निर्देश देना भी संचालक के लिए जरूरी है । अंय सीमाओं के रोगियों के सहयोग और चिकित्सा शर्त शामिल हैं, के रूप में श्वसन प्रयासों की जरूरत है । बच्चों में इस तकनीक की व्यवहार्यता के बारे में, कई अध्ययनों ने बताया है कि यह 6 वर्ष से अधिक उम्र के बच्चों में सफल और सुरक्षित था25. & #60 के बच्चों पर डाटा; 6 वर्ष की आयु की कमी है25, लेकिन यह संभावना है कि थूक प्रेरण उन बच्चों में प्रदर्शन करने के लिए मुश्किल है14। तकनीक वर्तमान में अनुसंधान सेवाओं और विशेष केंद्रों के लिए प्रतिबंधित है क्योंकि यह तकनीकी तौर पर मांग, समय लेने वाली है, और यह प्रशिक्षित स्टाफ1की आवश्यकता है । एक और सीमा है कि थूक प्रेरण और विश्लेषण की तकनीक हमेशा सफल नहीं है, जिसका अर्थ है कि एक पठनीय cytospin हमेशा26प्राप्त नहीं है । हालांकि, सफलता की दर आमतौर पर रोगियों के विभिंन साथियों में ८०% के आसपास है4,26,27,28,29। अंत में, सावधानी जब उम्र के मिलान के बारे में रोगियों के विभिन्न साथियों की तुलना के रूप में यह थूक सेल गिनती30,31को प्रभावित करने के लिए दिखाया गया था लिया जाना चाहिए. इसी तरह, लिंग और तंबाकू की आदतों के रूप में अंय मानकों के रूप में वे भी थूक सेल गिनती29,३२के साथ हस्तक्षेप कर सकते है मिलान किया जाना है । जब रोगी मिलान संभव नहीं है, एक और तरीका है खाते में उंर, लिंग या धूंरपान की स्थिति लेने के लिए इन विशेषताओं के लिए सांख्यिकीय विश्लेषण समायोजित है ।
बायोप्सी और bronchoalveolar lavages की तरह एयरवेज से कोशिकाओं को इकट्ठा करने की अनुमति है कि अन्य तकनीकों की तुलना में, प्रेरित थूक विधि सरल, अच्छी तरह से सहन, सुरक्षित, प्रतिलिपि, लागत प्रभावी, और गैर इनवेसिव होने का लाभ है । ये लाभ प्रेरित थूक तकनीक एक बड़े पैमाने पर प्रदर्शन किया जा करने के लिए और बार-बार के साथ की अनुमति है, और यह airway नमूना के लिए पसंद का एक विकल्प बना. Bronchosorption एक और airway मध्यस्थों का आकलन करने के क्रम में द्रव अस्तर श्लैष्मिक के संग्रह की अनुमति तकनीक है३३। हालांकि इस तकनीक (ब्रोंकोस्कोपी की आवश्यकता होती है) अधिक प्रेरित थूक से अधिक आक्रामक है, यह लार के साथ किसी भी संक्रमण से बचने और bronchoalveolar लेवेज३३में से मध्यस्थों के उच्च सांद्रता प्राप्त करने के फायदे हैं ।
महत्वपूर्ण कदम प्रोटोकॉल में ध्यान देने की जरूरत है । सबसे पहले, सावधानी खारा एकाग्रता और प्रेरण के समय के विषय में लिया जाना चाहिए, क्योंकि इन दो मापदंडों परिणामों को प्रभावित कर सकते हैं और इसलिए मानकीकृत३४,३५होना चाहिए. दूसरा, डीटीटी के साथ mucolysis प्रसंस्करण का एक महत्वपूर्ण कदम है । के रूप में पंजाबियों की तुलना में, डीटीटी बेहतर थूक कोशिकाओं को फैलाने के लिए दिखाया गया था7, जो cytopsin स्लाइड गुणवत्ता में सुधार करता है और एक प्रतिलिपि सेल गिनती2के लिए आवश्यक है । हालांकि, mucolytic एजेंट जैव रासायनिक घटकों की माप के साथ हस्तक्षेप कर सकते हैं ।Spiking प्रयोगों तो प्रदर्शन किया जाना चाहिए जब एक नया जैव रासायनिक यौगिक३६को मापने । अंत में, प्रक्रिया का एक और महत्वपूर्ण कदम सेल गिनती कदम है, जो एक प्रशिक्षित तकनीशियन द्वारा किया जाना चाहिए विश्वसनीय और व्याख्यात्मक परिणाम सुनिश्चित करने के लिए है ।
थूक प्लग (विशसीड़ या सघन भागों) का उपयोग कर एक वैकल्पिक विधि, पूरे थूक के बजाय, यह भी साहित्य7में वर्णित है । दोनों तकनीकों फायदे और नुकसान है । पूरे थूक तकनीक और अधिक तेजी से प्रसंस्करण7की अनुमति देता है, लेकिन अक्सर लार, जो नमूना पतला और cytospins2,7की गुणवत्ता को कम कर सकते हैं के साथ दूषित है । प्लग चयन तकनीक के साथ, लार संदूषण कम है, जिसका मतलब है कि नमूनों अक्सर द्रव चरण मध्यस्थों की खुराक के लिए बेहतर गुणवत्ता के होते हैं और cytospin स्लाइड के लिए7. प्रसंस्करण हालांकि अब7 है और चयनित प्लग पूरे नमूना३७के प्रतिनिधि नहीं हो सकता है । यह भी ध्यान देने योग्य बात है कि नहीं सभी नमूनों प्लग है, जो सीमित किया जा सकता है लायक है । दोनों विधियां मांय और प्रतिलिपि हैं, और वर्तमान में कोई प्रमाण नहीं है कि अवकलन कक्ष इन दोनों विधियों से प्राप्त गणनाएं भिंन है14,३८।
भविष्य में, प्रेरित थूक जांच, निदान, और भड़काऊ श्वसन रोगों के सभी प्रकार के प्रबंधन के लिए एक नैदानिक उपकरण प्रदान करने के लिए के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है ।
The authors have nothing to disclose.
इस काम को यूनिवर्सिटी हॉस्पिटल ऑफ लिएआगे (चू लिएआगे) ने सपोर्ट किया था. हम वीडियो उत्पादन के लिए “इंस्टेंट प्रोडक्शंस” स्वीकार करते हैं । हम भी सिडरिक फ़्रांस्वा, जो रोगी फिल्म में छपी स्वीकार करते हैं ।
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