otx1 和 otx2 作为鼻窦癌和嗅觉神经母细胞瘤的两种可能的分子标记物的鉴定
Summary
同源基因是调节基因, 通常与成人生物中的肿瘤有关。我们通过免疫组织化学和实时 pcr 分析, 在正常和炎症性鼻黏膜和鼻窦肿瘤中研究了它们的比较表达, 以便将它们作为可能的诊断和治疗靶点。
Abstract
otx同源 (hb) 基因在胚胎形态发生过程中和成人生物嗅觉上皮发育过程中被表达。这些基因中发生的突变通常与人类肿瘤的发生有关。目前还没有关于otx基因与鼻腔肿瘤之间可能存在的相关性的数据。这项工作的目的是了解是否 otx1和otx2 可以被认为是鼻腔肿瘤发展中的分子标记。我们选择鼻窦腺癌通过免疫组织化学和实时 pcr 分析来研究otx1和otx2基因的表达。所有的肠型腺癌 (itac) 样本中都没有otx1和otx2 。只有在非肠型腺癌 (nitc) 中发现了 otx1 mrna, 而otx2 mrna 仅在嗅觉神经母细胞 (ont) 中表达。我们已经证明,不同基因表达的 otx1和otx2基因可能是一个有用的分子标记, 以区分不同类型的鼻窦肿瘤。
Introduction
otxhb 基因是果蝇正畸基因 (otd) 的脊椎动物同源体, 它们编码了通常在胚胎形态发生过程中表达的转录因子, 但它们也可以在具有不同功能的成虫体内表达.在胚胎发育过程中, 它们控制着细胞的特性、细胞分化和身体轴的定位。otx家族包括显示不同功能的 otx1和otx2基因。otx1参与大脑和感觉器官的发育。在成虫体内, 它在感觉器官中表达, 并在垂体2的前叶中在低水平转录;它在造血中也有一定的作用, 表达于造血多能和祖细胞3。otx2参与了根头的发育, 它的转化蛋白起到了语素的作用, 因为它产生了一个梯度, 通过梯度激活或抑制其他基因以时空的方式被激活或抑制, 从而对细胞做出贡献增殖和分化。在成虫体内, otx2 只存在于脉络丛和松果体4中。
otx基因的突变通常与人类先天、身体或代谢缺陷的出现有关。otx基因的得失突变如果不能正确控制细胞生长和分化, 就会促进肿瘤的发生.在白血病和淋巴瘤以及许多实体瘤 (例如,髓母细胞瘤 6、攻击性非霍奇金淋巴瘤2、乳腺癌7、结直肠癌8和视网膜母细胞瘤 9),otx hb 基因的放松表达有据可查的 10。此外, 由于 otx2 基因在控制眼睛发育方面的关键作用, 在眼邻症和微孔瘤11的病例中已经显示出otx2突变。
在固体肿瘤的背景下, 分子和表型标记的发现是诊断、分类和治疗几种类型的肿瘤11的一个重要挑战, 包括那些源于鼻腔和鼻窦的肿瘤鼻窦。事实上, 尽管这些区域只占一个适度的解剖空间, 粘膜上皮, 腺体, 软组织, 骨骼, 软骨或神经外皮, 和造血细胞往往可以是复杂和组织学不同的起源的网站组的肿瘤。涉及窦冬道的不同类型的肿瘤呈现了各种特征, 克服了通常在上空气消化道甚至在身体大部分部位看到的特征12。鼻窦恶性肿瘤是罕见的, 每年的发病率为全世界1:10000 居民, 因此, 这妨碍了有关肿瘤发生的途径的研究和替代治疗策略的测试。尽管如此, 成像技术、手术方法和放射治疗的进步改善了鼻窦癌的临床管理。此外, 细胞系的发展以及动物模型和癌症基因分析目前构成了未来有针对性的抗癌疗法13的基础。到目前为止, 还没有关于otx1和/或otx2在鼻腔肿瘤、鼻窦和鼻咽的报告。由于我们之前观察到otx1和otx2 参与了乳腺癌7, 我们想知道这些基因是否不仅存在于正常的鼻黏膜中, 也存在于鼻腔肿瘤中。为了达到这一目标, 我们从病理学系获得了1985年至2012年收集并根据世界卫生组织 (世卫组织) 分类的正常黏膜、鼻和鼻窦腺癌的 varese 样本中的 “osedale di circolo”头颈部肿瘤的分类。我们选择通过实时 pcr 和免疫组织化学分析对它们进行分析, 并评估otx1和otx2的表达, 以确定它们是否可以被视为这些类型肿瘤的分子标记。
Protocol
Representative Results
Discussion
本研究首次表明 , 根据 mrna 水平 , hb 基因 otx1 和 otx2 在正常鼻窦黏膜和粘膜下腺体、炎症息肉、鼻窦施奈德里安状瘤以及不同的上皮和神经外皮中表达肿瘤, 包括鳞状癌、非肠型鼻窦腺癌、唾液腺型肿瘤、神经内分泌肿瘤和国家统计局。
修改和故障排除:
为了避免 rna 降解, 我们在病理学实验室执行了分离协议。在我们划破滑梯后, 所有的样品都被迅速冷却并…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作得到了 grandi strumenti 大学中心、fondazione comunitaria del varesotto、monte di lombardia 基金会和 fondazione anna villa e felice rusconi 的支持。
Materials
| RecoverAll Total Nucleic Acid Isolation | Applied Biosystem | AM1975 | |
| High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kit | Applied Biosystem | 4368814 | |
| TaqMan Universal PCR Master Mix, no AmpErase UNG | Applied Biosystem | 4326614 | |
| ABI Prism 7000 | Applied Biosystem | 270001857 | |
| ACTB probe | Applied Biosystem | Out of production. Sequence protected by copyright | |
| OTX1 probe | Applied Biosystem | Out of production. Sequence protected by copyright | |
| OTX2 probe | Applied Biosystem | Out of production. Sequence protected by copyright | |
| Acqueous Hydrogen Peroxide | Merk | 1072090250 | |
| Citrate Buffer | Sigma-Aldrich | 20276292 | |
| Triton | Sigma-Aldrich | 101473728 | |
| Tris | Merk | 108382 | |
| NaCl | Merk | 106404 | |
| Goat Anti-OTX2 Antibody | Vector Laboratories | Out of production. Catalog number not available | |
| Rabbit Anti-Goat Antibody | Vector Laboratories | BA5000 | |
| ABC-Peroxidase Complex | Vector Laboratories | PK6100 | |
| 3,3'-diaminobenzidine tetrahydrocloride (DAB) | Sigma-Aldrich | D5905 | |
| Harris Hematoxylin | Bioptica | 0506004/L | |
| Pertek | Kaltek SRL | 1560 | |
| BioClear | Bioptica | W01030799 |
Riferimenti
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