Sinonasal karsinom ve koku nöroblastomlar için iki olası moleküler işaretleyici olarak OTX1 ve OTX2 tanımlama
Summary
Düzenleme çoğu yetişkin organizmalarda tümörleri ile ilgili genler Homeobox genleri bulunmaktadır. Biz onların karşılaştırmalı ifade immunohistokimyasal ve gerçek zamanlı PCR analizleri, normal ve inflamatuar burun mucosae ve onlara olası tanı ve tedavi hedefleri kullanmak için sinonasal neoplazmlar tarafından araştırdık.
Abstract
OTX (HB) homeobox genleri embriyonik morfogenez ve yetişkin organizmalarda koku epitel gelişimi sırasında ifade edilir. Bu genlerinde meydana gelen mutasyonlar kez insan tumorigenesis ilgili. Veri ile ilgili OTX genler ve burun boşluğuna tümörler arasındaki olası korelasyon bugün mevcuttur. Bu çalışmanın amacı, OTX1 ve OTX2 olarak nazal tümör gelişiminde moleküler belirteçleri kabul edilebilir eğer anlamaktır. Biz immunohistokimyasal ve gerçek zamanlı PCR analizleri OTX1 ve OTX2 genlerin ifade araştırmak için Burun kemiği ve sinonasal Adenokanserine seçildi. OTX1 ve OTX2 devamsızlık saatlerinizi tüm örneklerinde sinonasal bağırsak tipi Adenokanserine (ITACs). OTX2 mRNA sadece koku nöroblastomlar (ONs) ifade edildi iken OTX1 mRNA sadece sigara-Intestinal tip Adenokanserine içinde (NITACs) tespit edilmiştir. OTX1 ve OTX2 genler için fark gen ekspresyonu sinonasal tümör farklı tür ayırt edilebilmesi için yararlı bir moleküler işaretçisi olabilir göstermiştir.
Introduction
OTX HB genler (otd) Drosophila orthodenticle genlerin omurgalı homologue ve onlar normalde sırasında embriyonik morfogenez ifade edilir transkripsiyon faktörleri için kodlamak, ama onlar da farklı fonksiyonları ile yetişkin canlı ifade edilebilir . Embriyonik gelişim sırasında hücre kimliğini, hücre farklılaşma ve vücut axis¹ konumlandırma belirtimi kontrol ediyorlar. OTX ailesi farklı işlevler görüntülemek OTX1 ve OTX2 gen içerir. OTX1 beyin ve duyu organı geliştirme ilgilenmektedir. Yetişkin canlı duyu organları ifade edilir ve2hipofiz ön LOB düşük seviyelerde sentezlenir; Bu da hematopoiesis, hematopoetik pluripotent ve progenitör hücrelerin3ifade bir rol oynar. OTX2 rostral başından gelişiminde ilgilenmektedir ve onun çevrilmiş protein eylemleri bir morphogen olarak hangi diğer genler yoluyla bir degrade üretir çünkü aktif veya böylece hücreye katkıda spatio-zamansal bir şekilde bastırılmış nükleer silahların yayılmasına karşı ve farklılaşma. Yetişkin organizmada OTX2 sadece choroid plexus ve epifiz bezi4‘ te bulunur.
OTX genlerdeki mutasyonlar kez insan Konjenital, somatik veya metabolik kusurları görünümünü ilişkilidir. Onlar düzgün hücresel büyüme ve/veya farklılaşma5kontrol etmek mümkün değilse kazanç veya kaybın OTX genlerdeki mutasyonlar tumorigenesis teşvik. Kanserini ve kanserleri de olduğu gibi birçok solid tümör (örn., medulloblastomas6, agresif non-Hodgkin kanserleri2, meme karsinomlar7, kolorektal kanserler8ve Retinoblastom9), kuralsız OTX HB genler iyi belgelenmiş10ifadesidir. Buna ek olarak, OTX2 mutasyonlar anophthalmia ve microphtalmia11 bu gen göz geliştirme kontrolü için çok önemli rolü nedeniyle durumlarında gösterilmiştir.
Katı neoplazmlar bağlamında, moleküler ve fenotipik işaretleri keşfi tanı, sınıflandırma ve tümör11burun ve paranazal köken de dahil olmak üzere, çeşitli tedavi için önemli bir sorun olduğunu. sinüsler. Aslında, bu rağmen bu alanlarda sadece mütevazı bir anatomik alan, Mukozal epitel, bezleri, yumuşak doku, kemik, kıkırdak veya sinirsel/nöroektodermal işgal, ve hematolymphoid hücreleri genellikle karmaşık ve histolojik olarak farklı kökeni için site olabilir tümör grupları. Neoplazmlar sinonasal yolu içeren farklı türde çeşitli ne genellikle üst aerodigestive sistem veya bile vücut12birçok yerinde boyunca görülen üstesinden özellikler mevcut. Sinonasal maligniteler nadirdir ve 1:100,000 nüfuslu bir yıllık insidansı dünya çapında mevcut ve bu yüzden bu çalışmalar ile ilgili tumorigenesis ve alternatif tedavi stratejileri test yolları önler. Buna rağmen teknikleri, Imaging’de gelişmeler cerrahi yaklaşımlar ve radyoterapi sinonasal kanser klinik yönetiminin iyileştirilmiştir. Ayrıca, hücre hatları gibi hayvan modelleri ve kanser genetik profilleme gelişimi şu anda gelecekte hedeflenen antikanser terapiler13temelini oluşturmaktadır. Bugüne kadar neoplazmlar OTX1 ve/veya OTX2 ifadede burun boşluğuna, paranazal sinüsler ve nazofarinksi ilgili hiçbir raporlar vardır. Daha önce meme kanseri7‘ OTX1 ve OTX2 dahil olan gözlemledim beri bu genler mevcut değil sadece normal nazal mukoza aynı zamanda burun boşluğuna içinde tümörler olup olmadığını merak etti. Biz “Ospedale di Circolo” Varese örneklerinde normal mukoza ve 1985 2012’ye toplanan ve Dünya Sağlık Örgütü (WHO) göre sınıflandırılmış Burun kemiği ve sinonasal Adenokanserine patoloji Bölümü elde edilen bu hedefe ulaşmak için Baş ve boyun tümörleri sınıflandırılması. Gerçek zamanlı PCR ve immünhistokimya analizleri çözümlemek seçtiğimiz ve bu tür tümör moleküler işaretleyiciler düşünülebilir eğer belirlemek için OTX1 ve OTX2 ifade değerlendirilir.
Protocol
Representative Results
Discussion
Bu çalışmada gösterir, mRNA düzeylerine göre ilk defa OTX1 ve OTX2 HB genler ifade normal sinonasal mukoza ve submucosal bezleri, inflamatuar polipler, sinonasal Schneiderian papillomas ve farklı epitel ve nöroektodermal neoplazmlar, Skuamöz Karsinom, bağırsak türü sinonasal Adenokanserine, Tükürük bezi tipi tümörler, nöroendokrin neoplazmlar ve ONs da dahil olmak üzere.
Değişiklikler ve sorun giderme:
RNA yıkımı önlemek için biz patoloji lab…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu eser tarafından Centro Grandi Strumenti Università dell’Insubria, Fondazione Comunitaria del Varesotto, Fondazione del desteklenmiştir Monte di Lombardia ve Fondazione Anna Villa e Felice Rusconi.
Materials
| RecoverAll Total Nucleic Acid Isolation | Applied Biosystem | AM1975 | |
| High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kit | Applied Biosystem | 4368814 | |
| TaqMan Universal PCR Master Mix, no AmpErase UNG | Applied Biosystem | 4326614 | |
| ABI Prism 7000 | Applied Biosystem | 270001857 | |
| ACTB probe | Applied Biosystem | Out of production. Sequence protected by copyright | |
| OTX1 probe | Applied Biosystem | Out of production. Sequence protected by copyright | |
| OTX2 probe | Applied Biosystem | Out of production. Sequence protected by copyright | |
| Acqueous Hydrogen Peroxide | Merk | 1072090250 | |
| Citrate Buffer | Sigma-Aldrich | 20276292 | |
| Triton | Sigma-Aldrich | 101473728 | |
| Tris | Merk | 108382 | |
| NaCl | Merk | 106404 | |
| Goat Anti-OTX2 Antibody | Vector Laboratories | Out of production. Catalog number not available | |
| Rabbit Anti-Goat Antibody | Vector Laboratories | BA5000 | |
| ABC-Peroxidase Complex | Vector Laboratories | PK6100 | |
| 3,3'-diaminobenzidine tetrahydrocloride (DAB) | Sigma-Aldrich | D5905 | |
| Harris Hematoxylin | Bioptica | 0506004/L | |
| Pertek | Kaltek SRL | 1560 | |
| BioClear | Bioptica | W01030799 |
Riferimenti
- Boncinelli, E., Simeone, A., Acampora, D., Gulisano, M. Homeobox genes in the developing central nervous system. Ann genet. 36 (1), 30-37 (1993).
- Omodei, D., et al. Expression of the Brain Transcription Factor OTX1 Occurs in a Subset of Normal Germinal-Center B Cells and in Aggressive Non-Hodgkin Lymphoma. American J. Pathol. 175, 2609-2617 (2009).
- Levantini, E., et al. Unsuspected role of the brain morphogenetic gene Otx1 in hematopoiesis. Proc. Natl. Acad. Sci USA. 100 (18), 10299-10303 (2003).
- Larsen, K. B., Lutterodt, M. C., Mollgard, K., Moller, M. Expression of the homeobox OTX2 and OTX1 in the early developing human brain. J. Histochem. Cytochem. 58, 669-678 (2010).
- Abate-Shen, C. Deregulated homeobox gene expression in cancer: cause or consequence?. Nat. Rev. Cancer. 2, 777-785 (2002).
- de Haas, T., et al. OTX1 and OTX2 expression correlates with the clinicopathologic classification of medulloblastomas. J. Neuropathol. Exp. Neurol. 65, 176-186 (2006).
- Terrinoni, A., et al. OTX1 expression in breast cancer is regulated by p53. Oncogene. 30 (27), 3096-3103 (2001).
- Yu, K., et al. OTX1 promotes colorectal cancer progression through epithelial-mesenchymal transition. Biochem. Biophys Res Commun. 44 (1), 1-5 (2014).
- Glubrecht, D. D., Kim, J. H., Russel, L., Bamforth, J. S., Godbout, R. Differential CRX and OTX2 expression in human retina and retinoblastoma. J. Neurochem. 111 (1), 250-263 (2009).
- Coletta, R. D., Jedlicka, P., Gutierrez-Hartamn, A., Ford, H. L. Transcriptional control of the cell cycle in mammary gland development and tumorigenesis. J. mammary gland Biol. Neoplasia. 9, 39-53 (2004).
- Cordes, B., et al. Molecular and phenotypic analysis of poorly differentiated sinonasal neoplasms: an integrated approach for early diagnosis and classification. Hum Pathol. 40, 283-292 (2009).
- Stelow, E. B., Bishop, J. A. Update from the 4th Edition of the World Health Organization Classification of Head and Neck Tumours: Tumors of the Nasal Cavity, Paranasal Sinuses and Skull Base. Head Neck Pathol. 11 (1), 3-15 (2017).
- Llorente, J. L., et al. Sinonasal carcinoma: clinical, pathological, genetic and therapeutic advances. Nat. Rev. Clin. Oncol. 11 (8), 460-472 (2014).
- Sidransky, D. . World health organization classification of tumors. Pathology and genetics of head and neck tumors. 9, (2005).
- Radulesku, T., et al. Endoscopic surgery for sinonasal tumors: The transcribriform approach. J Stomatol Oral Maxillofac Surg. 118 (4), 248-250 (2017).
- Muller, P. A. J., Vousden, K. H. p53 mutations in cancer. Nature cell biology. 15 (1), 2-8 (2013).
- Holmila, R., et al. Profile of TP53 gene mutations in sinonasal cancer. Mutat Res. 686 (1-2), 9-14 (2010).
