एक समय चूक, लेबल मुक्त, मात्रात्मक और सक्रिय मानव कैंसर कोशिकाओं के गुणात्मक चरण इमेजिंग अध्ययन
Summary
निष्क्रिय और सक्रिय कैंसर कोशिका phenotypes मात्रात्मक चरण इमेजिंग का उपयोग विशेषता थे । सेल प्रसार, प्रवास, और आकृति विज्ञान परख एकीकृत और एक सरल विधि में विश्लेषण किया गया ।
Abstract
angiogenic phenotype के अधिग्रहण ट्यूमर निद्रा से बचने का एक आवश्यक घटक है । हालांकि इन विट्रो परख (जैसे, प्रसार, प्रवास, और अंय) में कई क्लासिक और vivo में मॉडल की जांच करने के लिए विकसित किया गया है और angiogenic और गैर angiogenic सेल phenotypes की विशेषता है, इन तरीकों समय है और गहन श्रम, और अक्सर महंगी एजेंट और उपकरणों की आवश्यकता है, साथ ही महत्वपूर्ण विशेषज्ञता । हाल के एक अध्ययन में, हमने angiogenic और गैर-angiogenic मानव ऑस्टियो खोस कोशिकाओं के समय-चूक और लेबलिंग-फ़्री characterizations का संचालन करने के लिए एक उपंयास मात्रात्मक चरण इमेजिंग (QPI) तकनीक का उपयोग किया । सेल आकृति विज्ञान, प्रसार, और गतिशीलता सहित सेलुलर मापदंडों का एक पैनल, मात्रात्मक मापा और QPI का उपयोग कर विश्लेषण किया गया । इस उपंयास और मात्रात्मक दृष्टिकोण को लगातार और गैर इनवेसिव प्रासंगिक सेलुलर प्रक्रियाओं, व्यवहार का अध्ययन करने का अवसर प्रदान करता है, और कैंसर की कोशिकाओं और एक सरल और एकीकृत तरीके से अंय प्रकार के सेल के लक्षण । यह रिपोर्ट हमारे प्रायोगिक प्रोटोकॉल का वर्णन करती है, जिसमें सेल तैयारी, QPI अधिग्रहण और डेटा विश्लेषण शामिल है ।
Introduction
एक ठोस ट्यूमर के विकास और प्रगति में सबसे जल्द चौकियों में से एक angiogenic phenotype, कैंसर की एक बानगी के अधिग्रहण है । इस प्रगति जैव रासायनिक और आणविक प्रक्रियाओं की एक किस्म शामिल है1,2,3। ट्यूमर प्रगति में इस महत्वपूर्ण कदम के अध्ययन में एक तकनीकी चुनौती उपकरण की कमी के लिए लगातार और मात्रात्मक विशेषताएं और angiogenic और गैर angiogenic phenotypes के बीच एक निष्पक्ष तरीके से जीवित कैंसर कोशिकाओं के अंतर है । पारंपरिक परख के सेलुलर व्यवहार की जांच करने के लिए इस्तेमाल किया जा रहा angiogenic और गैर angiogenic कोशिकाओं को आम तौर पर महंगी रिएजेंट और उपकरणों की आवश्यकता होती है, उदाहरण के लिए, सेल प्रसार/5, 6,7,8,9,10,11,12,13,14 या vivo मूल्यांकन4,5,6,8,15,16, साथ ही महत्वपूर्ण विशेषज्ञता और गहन की आवश्यकता में पूरक समय और श्रम की खपत ।
हाल ही में, मात्रात्मक चरण इमेजिंग (QPI) सेल आकृति विज्ञान और व्यवहार मापदंडों की एक किस्म का समय चूक और लेबलिंग मुक्त मूल्यांकन में सक्षम बनाता है कि एक उपंयास तकनीक के रूप में उभरा है17,18,19, 20 , 21 , 22. पारंपरिक ऑप्टिकल माइक्रोस्कोपी के विपरीत, एक ऑप्टिकल वस्तु के माध्यम से प्रकाश गुजरता के बाद पिक्सेल द्वारा चरण shift पिक्सेल के QPI quantifies रूपांतरों, और परिवर्तित ऑप्टिकल मोटाई और मात्रा के साथ एक हाथ को खंगाला, इस प्रकार प्रत्यक्ष सक्षम लाइव कोशिकाओं और निम्नलिखित सुविधाओं का विश्लेषण: (1) मात्रात्मक इमेजिंग, (2) गैर इनवेसिव और समय चूक इमेजिंग, (3) लेबल मुक्त इमेजिंग, और (4) एक साथ बहु-पैरामीटर इमेजिंग. इन सुविधाओं QPI एक शक्तिशाली उपकरण का आकलन करने और सेलुलर स्तर पर रोग प्रक्रियाओं को समझने के लिए बनाते हैं ।
हाल के एक अध्ययन में, हम QPI उपयोग के लिए मात्रात्मक विशेषताएं और angiogenic खोस के बीच अंतर-एक और गैर angiogenic खोस-N एक व्यवस्थित और मात्रात्मक तरीके से मानव phenotypes कोशिकाओं के ऑस्टियो, कोशिका आकृति विज्ञान के विश्लेषण के संयोजन, प्रसार, और गतिशीलता23। छवि विश्लेषण सॉफ्टवेयर, सेल रूपात्मक और व्यवहार मापदंडों का एक पैनल का उपयोग मात्रात्मक angiogenic और गैर angiogenic मानव ऑस्टियो कोशिकाओं के बीच तुलना में थे और पांच विशिष्ट अंतर इन दोनों के बीच की पहचान की गई phenotypes । यह उपंयास दृष्टिकोण जैविक रूप से प्रासंगिक सेलुलर विशेषताओं की एक किस्म का आकलन करने के लिए एक एकीकृत और मात्रात्मक मंच प्रदान करता है ।
Protocol
Representative Results
Discussion
इस अध्ययन में, हम एक इन विट्रो, गैर इनवेसिव, और लेबल मुक्त विधि QPI का उपयोग करने के लिए मात्रात्मक angiogenic और मानव ऑस्टियो कोशिकाओं के गैर angiogenic phenotypes की विशेषता का वर्णन । एकाधिक सेलुलर मापदंडों इस एकीकृत, उच…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
लेखक कृतज्ञता स्तन कैंसर अनुसंधान फाउंडेशन और उंनत चिकित्सा अनुसंधान फाउंडेशन के समर्थन स्वीकार करते हैं ।
Materials
| T75 flask | Corning, NY, USA | 353136 | |
| 6-well plates | Corning, NY, USA | 3506 | |
| Dulbecco’s modified Eagle medium (DMEM) | Thermo Fisher Scientific, MA, USA | 11965092 | |
| Fetal bovine serum (FBS) | Atlanta Biologicals, GA, USA | S11550 | |
| Penicillin Streptomycin | Thermo Fisher Scientific, MA, USA | 15140122 | |
| Phosphate buffered saline (PBS) | Thermo Fisher Scientific, MA, USA | 10010023 | |
| Beckman Z1 Coulter counter | Beckman Coulter, IN, USA | Z1 | |
| HoloMonitor M4 | Phase Holographic Imaging Phi AB, Lund, Sweden | M4 | Microscope |
| Hololid | Phase Holographic Imaging Phi AB, Lund, Sweden | PHI 8020 | |
| HStudioM4 | Phase Holographic Imaging Phi AB, Lund, Sweden | HStudioM4 | Software |
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