環境有害物質に暴露したラットの下顎からエナメル器官の微細解剖
Summary
エナメル質の形成と変化を理解すると、エナメル芽細胞活性の検討が必要です。ここでは、さらに定量的および定性的な実験プロシージャで使用可能性があります分泌と成熟期エナメル芽細胞を含むエナメル器官のマイクロ分析する信頼性と一貫性のある手法について述べる。
Abstract
環境条件や生活の方法から生じるエナメル質欠損、彼らの高い有病率のため公衆衛生の懸念されます。これらの欠陥はエナメル合成エナメル エナメル器官であるという責任がある細胞の活性変化に起因します。、エナメル質形成におけるエナメル芽細胞増殖、分化、死のイベントの具体的かつ正確なシーケンスに従ってください。ラットの切歯を継続的に成長、生理学的および病理学的条件でエナメル芽細胞活動と分化段階を研究する適切な実験的モデルです。ここでは、我々 はマイクロ分析環境有害物質に暴露したラットのエナメル器に信頼性の高い一貫した方法をについて説明します。ミクロ解剖歯科上皮には分泌と成熟期エナメル芽細胞in situハイブリダイゼーション、免疫組織化学的アッセイなどの定性的な実験のためだけでなくなどの定量に使用できるにはが含まれてRT qPCR、RNA シーケンスおよび西部にしみが付くこと。
Introduction
環境毒性や不適切な生活習慣1,2,3,4への暴露から多く発達エナメル質の欠損があります。中断イベント、現在記載されている手順を使用してエナメル質形成の分子の特性、いくつかの有害物質への暴露の早いマーカーとして結果エナメル質欠損の使用を推進しの健康の歴史の再構成のために役立つことがあります。エナメル質が synthetized1,2周産期の期間それぞれの患者。エナメル合成は、エナメル芽細胞活動5によって 4 つの段階に分けることができます。最初のステップでは、前駆体細胞および pre-エナメル芽細胞増殖を再びグループ化します。2 番目の段階では、差別化されたエナメル芽細胞はエナメル基質タンパク質 (体)、主にアメロゲニン、エナメリン、アメロブラスチン、最終的なエナメル質の厚さを決定するを分泌します。したがって、EMP 合成の中断は、エナメル質の定量的欠陥につながります。におけるエナメル質の厚さの堆積後成熟段階を開始します。この段階で、幅と厚さにおけるアパタイト結晶の成長により重量最大 96% の生体組織は、最高の鉱化作用の割合に到達するエナメル質ができます。質的に成熟段階鉛中に発生する中断イベントはエナメルの欠陥です。最後に、エナメル、齧歯動物の色素沈着とも呼ばれる後の成熟の段階に入るし、歯噴火しエナメル質欠損 (もしあれば) 取り返しのつかない不可逆的なアポトーシスを受ける、欠陥の潜在的な回顧記録を提供エナメル芽細胞と強調しました。齧歯動物、エナメル、同様の一連のイベントがそれらをエナメルの一般的なプロセスを検討する適切なモデルの歯が成長し続ける特殊性で移動できます。したがって、エナメルの中断のエナメル質および/または中断イベントの時間ウィンドウの種類に応じて、数量の変更の結果します。その意味で、ダイオキシン類、鉛、および内分泌撹乱化学物質ビスフェノール A (BPA)、ゲニステイン、ビンクロゾリンなどへの暴露は、エナメル hypomineralizations1,2,3 を生成する示されています。 ,6,7,8。非対称白い不透明な斑点は、胎児期、出生1後最初の月の間に低用量 BPA 用量に暴露したラットの切歯に同定されました。これらのエナメル質欠損ラットと人間の臼歯切歯 hypomineralization (MIH) の類似した臨床的、構造的、生化学的特性を共有します。MIH は最近は、歯のエナメル質の病理病因まだ残る多くの因果関係の要因にもかかわらず不明9,10の9,10,11 に仮定されたこと ,12。
環境要因のための別の重要なエナメル hypomineralization 病理は歯の弗素症 (DF)、フッ化物の過剰吸収の結果である (> 0.1 mg/kg/日)13,14。フッ化物の主な情報源は、飲料水は、補足またはフッ化物で自然豊かです。フッ化物は、齲蝕予防にもしばしば処方が、予防的投与量はわずか 50% 毒性の 1 つよりも低い (0.05 mg/kg/日)。MIH と DF、環境要因への暴露から生じる 2 つの頻繁に病態が生じる内分泌かく乱化学物質2など他の有害物質とフッ化物の hypomineralizing 効果の増強により特徴付けられる必要がある共通の機能またはアモキシシリン15。
異なる分化段階でエナメルを含むラット エナメル器官の郭清のマイクロは、エナメル芽細胞の活動を妨害し、歯の噴火後診断されるエナメル質欠損を引き起こすことができる分子の作用のメカニズムを理解するのに役立ちます。つまり、環境毒性のためエナメル質遺伝子発現とエナメル マトリックス組成の変化の特性評価、有害物質への暴露の歴史の再構成ができ、環境安全の公共の監視が容易になります健康。
Protocol
Representative Results
Discussion
エナメル質欠損の特性が、変化の理解を開発を助けるかもしれない変えられたエナメル芽細胞活性および/または混乱したエナメル芽細胞増殖・分化・成熟プロセス鉛不可逆的なエナメル質欠損し、順番、エナメル質形成におけるエナメル芽細胞の活動。したがって、孤立したエナメル器官の研究は、エナメルの欠陥がどのような環境や遺伝、その起源につながる病理のイベントを明らかにす…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この仕事は、歯科医学の研究 (IFRO) の大学パリ ・ ディドロ、フランス国立衛生研究所と医学研究 (INSERM)、フランスの研究所によって賄われていた。
Materials
| Bisphenol A | Sigma Aldrich, Saint Louis MO | 239658 | |
| formalin 10% | Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO | HT5012 | |
| Tri-Reagent | Euromedex, France | TR118 | |
| RLT buffer | Qiagen, Les Ulis, France | 74126 | RNeasy Protect Mini Kit |
| Androgen receptor antibody | Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) | sc-816 | rabbit polyclonal antibody |
| PBS 10x | EUOMEDEX | ET330.A | |
| Sodium fluoride (NaF) | Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO | S-1504 | |
| paraplast regular | Leica microsystems, Nanterre cedex, France | 39601006 | called was/parafin in the text |
| tissue OCT | VWR, Fontenay-sous-Bois, France | 411243 | |
| Extra Fine Bonn Scissors – Straight/8.5 cm | PHYMEP , Paris, France | 14084-08 | |
| Handle for Scalpel Blades – 12.5 cm | PHYMEP, Paris, France | 10035-12 | |
| Curved Scalpel Blade | PHYMEP , Paris, France | 10035-20 | |
| Dissecting Knife – Fine/Straight Tip | PHYMEP , Paris, France | 10055-12 | |
| Circle Knife | PHYMEP, Paris, France | 10059-15 | |
| scalpel blades n°11 Swann-Morton | VWR, Fontenay-sous-Bois, France | 233-0024 | |
| binocular lens | Leica biosystems, Nanterre cedex, France | MZFLIII |
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