허 혈 성 뇌졸중의 쥐 모델에서 뇌혈관 장애의 비보에 평가

Summary

이 절차의 전반적인 목표는 비보에 허 혈 성 뇌졸중의 쥐 모델에서 뇌혈관 장애의 평가 대 한 높은 재현 기법을 제공 하는입니다.

Abstract

허 혈 성 뇌졸중 vasogenic 대뇌 부 종 및 후속 기본 뇌 손상, 혈액-뇌 장벽 (BBB)의 파괴를 통해 중재 된다 이끌어 낸다. 유발 허 혈 성 뇌졸중 쥐 설립 되었고 BBB의 기능 무결성을 조사 하 비보에 모델로 사용. 허 혈 성 상해 두뇌 샘플에서 에반스 블루 (EB)의 spectrophotometric 감지 소설 치료 modalities의 개발과 연구에 대 한 신뢰할 수 있는 정당성을 제공할 수 있습니다. 이 방법은 재현성 결과 생성 하 고 특별 한 장비를 위한 필요 없이 어떤 실험실에 적용 됩니다. 여기, 선물이 쥐에서 허 혈 성 뇌졸중의 유도 따라 EB의 넘쳐 흐름의 검출에 시각 및 기술 지침.

Introduction

Vasogenic 뇌 부 종 혈액-뇌 장벽 (BBB) 중단으로 인해 허 혈 성 뇌졸중의 중요 한 합병증 및 뇌졸중 환자^1,2에서 생존 율의 주요 결정 요인이 남아 있다. 혈액-뇌 장벽 (BBB)는 뇌 모 세관 내 피 세포 (BCECs)에 의해 형성 된 뚜렷한 혈관 구성 요소 (예: BCECs, pericytes, astroglial, 및 신경 세포³중 꽉 접합)의 구성, 제공 하는 중앙 신경 조직 (CNS) 말 초 혈액 순환^4,5사이의 특수 하 고 역동적인 인터페이스. 국 소 빈 혈 reperfusion 상해 등 모욕 BBB의 기능적 무결성을 방해 하 고 궁극적으로 트리거 대뇌 염증 및 기본 뇌 손상 뇌 실질에 순환 하는 백혈구의 침투를 후속으로 이어질 수 있습니다. ^{6 , 7}. 뇌졸중의 발생에 따라 BBB의 부전의 정확한 검출을 위한 동물 모델 필요. 이러한 모델은 새로운 신경 보호 전략을 소개 하 고 기본 병 태 생리 기계 장치 공부에 대 한 매우 중요. 체 외에서 세포 문화 기반 모델 BBB의 높은 개발 하 고 되었습니다 BBB physiopathology^8,,910의 분자 연구에 사용. 그럼에도 불구 하 고, vivo에서 동물 모델, 인간의 임상 조건에 비슷한 BBB의 허 혈 성 손상, 생산은 또한 매우 보람 이와. 에반스 블루 (EB)의 넘쳐 흐름의 정량적 검출은 잘 허용 하 고 민감한 기술 평가 BBB 무결성 및 신경 퇴행 성 질환, 허 혈 성 뇌졸중^11, 를 포함 하 여 기능에 대 한 사용 되었습니다. ^{12 , 13 , 14}.이 방법은 비용, 재현성, 및 완전히 적용 가능한 모든 실험 실험실에서. 그것의 구현 방사성 트레이 서¹⁵ 또는 자기 공명 영상 (MRI)¹⁶다른 방법에 대 한 필수 구성 요소를 같은 고급 장비를 필요 하지 않습니다. 이 문서에서는, BBB 평가 EB 넘쳐 흐름을 사용 하 여 허 혈 성 뇌졸중의 쥐 모델에서의 기본적인 기술적 프로세스 포괄적으로 설명 합니다.

Protocol

모든 절차는 동물 연구를 실시 위한 아르다 빌 대학교 의료 과학 연구 위원회의 지침에 따라 수행한 (윤리적 ID 번호: 적외선 ARUMS입니다. REC.1394.08).이 시각된 연구에서 사용 하는 성인 남성 Sprague-Dawley 쥐 (300-350 g) 목초지 연구소 (테헤란, 이란)에서 얻은. 1. 마 취와 Flowmetry 4 %isoflurane 사용 하 여 마 취를 유도 하 고 수술 하는 동안 질소 산화물 (70 %v / v)와 산소 (30 %v / v)의 …

Representative Results

가짜 운영 쥐의 좌 반구와 우 반구에서 EB 수준에 중요 한 차이가 없었다 (1.06 ± 0.1 µ g/g과 1.1 ± 0.09 µ g/g, 각각). 그림 2A 2B, 일시적인 허 혈의 유도에서 같이 (90 분 허 혈 / 24 h reperfusion) EB 수준에 상당한 차이 발생 (10.41 ± 0.84 µ g/g, p < 0.001) 각각에 비해 허 혈 성 쥐의 왼쪽된 반구에 운영 하는 가짜 쥐에 반구입니다. 샨 다, 이러한 결과 나타냅니다 정상적?…

Discussion

지금까지, autoradiography 방사성 추적기^24,25, 면역 형광 검사 현미경 검사 법^26,27, EB 넘쳐 흐름 기술은^20, 의 검출 등 다양 한 방법 ²³ 혈액-뇌 장벽 손상을 평가 하는 데 사용 되었습니다. EB 염료 강력 하 게 혈 청 알 부 민에 바인딩할 수 이며 혈관 누설을 감지 하 고 측?…

Materials

Isoflurane	Piramal	AWN 34041100	20 – 25 °C
2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride (TTC)	Molekula	31216368	4 years
Sprague–Dawley rats	Pasture Institute (Tehran, Iran)		300-350g
Evans Blue	Sigma-Aldrich	314-13-6
Trichloroacetic acid	Sigma-Aldrich	76-03-9	2 years
Bupivacaine HCl (0.5%)	Delpharm Tours		below  25 °C
Bupernorphine	Exir (Iran)
Sodium Carbonate	Sigma-Aldrich	497-19-8
Sodium chloride	Sigma-Aldrich	7647-14-5
Di- Sodium hydrogen phosphate	EMD Millipore	231-448-7
Potassium chloride	Sigma-Aldrich	7447-40-7
Ethanol	Sigma-Aldrich	64-17-5
silicone(Xantopren)	Heraeus	EN ISO 4823
Activator universal plus	Heraeus	66037445
Micro-Dissecting forceps	Stoelting	52100-41
Spring Scisors	Stoelting	52130-00
Operating  Scissors	Roboz	52140-70
Brain matrix	Stoelting	51390
Anesthesia Machine for Small Animals |	Kent Scientific	SS-01
Power Lab system	AD Instruments	ML880
Laser Doppler flowmeter	AD Instruments	ML191
Heating feed back system	Harvard Appratus	72-7560
Vascular micro clamp	FineScience Tools	18055-03
Silk 5-0 suture thread	Ethicon	682G
Ethilon 4-0 suture thread	Ethicon	EH6740G