Una valutazione In Vivo di rottura della barriera emato - encefalica in un modello del ratto del colpo ischemico

Summary

L’obiettivo generale di questa procedura è quello di fornire una tecnica altamente riproducibile per la valutazione in vivo della perturbazione barriera emato – encefalica nei modelli del ratto del colpo ischemico.

Abstract

Ictus ischemico conduce a edema cerebrale di vasogenic e successive cranico primario, che è mediata attraverso la distruzione della barriera sangue – cervello (BBB). Ratti con il colpo ischemico indotto sono stati stabiliti e usati come modelli in vivo per studiare l’integrità funzionale della BBB. Rilevazione spettrofotometrica di blu di Evans (EB) nei campioni di cervello con lesione ischemica potrebbe fornire giustificazione affidabile per la ricerca e lo sviluppo delle modalità terapeutiche novelle. Questo metodo genera risultati riproducibili ed è applicabile in qualsiasi laboratorio senza necessità di attrezzature speciali. Qui, presentiamo una guida di riferimento tecnico e visualizzato sulla rilevazione di stravaso di EB dopo induzione del colpo ischemico in ratti.

Introduction

L’edema vasogenic cervello dovuto rottura della barriera emato – encefalica (BBB) rimane una complicazione importante dell’ictus ischemico e un elemento determinante del tasso di sopravvivenza in pazienti ictus^1,2. L’emato – encefalica (BBB), che è formata da cellule endoteliali dei capillari del cervello (BCECs) e composto da componenti distinti neurovascular (ad es., giunzioni strette tra BCECs, periciti, astroglial e cellule neuronali³), fornisce un specializzata e dinamica interfaccia tra il sistema nervoso centrale (SNC) e la circolazione del sangue periferico^4,5. Insulti come lesioni di ischemia-riperfusione potrebbero compromettere l’integrità funzionale della BBB e portare alla successiva penetrazione di leucociti circolanti nel parenchima del cervello che attivano in definitiva l’infiammazione cerebrale e lesioni cerebrali primari ^{6 , 7}. modelli animali sono necessari per l’esatta individuazione della disfunzione di BBB seguendo l’occorrenza di un oggetto stroke. Tali modelli sono di grande importanza per lo studio di base dei meccanismi fisiopatologici e introducendo nuove strategie neuroprotettive. In vitro modelli cellulari basati sulla cultura della BBB sono stati altamente sviluppati e utilizzati per lo studio molecolare del BBB fisiopatologia^8,9,10. Tuttavia, in vivo modelli animali, che producono un danno ischemico della BBB simili a condizioni cliniche umane, sono anche molto utili a questo proposito. La determinazione quantitativa dello stravaso di blu di Evans (EB) è una tecnica ben accettata e sensibile che è stata utilizzata per la valutazione dell’integrità BBB e funzione nelle malattie neurodegenerative, tra cui ictus ischemico^{11, 12 , 13 , 14}. questo metodo è conveniente, fattibile, riproducibile e completamente applicabile in qualsiasi laboratorio sperimentale. Sua attuazione non richiede attrezzature avanzate, come traccianti radioattivi¹⁵ o risonanza magnetica (MRI)¹⁶, che sono prerequisiti per altri metodi. In questo articolo, dimostriamo completamente base processi tecnici di valutazione BBB utilizzando lo stravaso EB nei modelli del ratto del colpo ischemico.

Protocol

Tutte le procedure sono state eseguite in conformità con le linee guida di Ardabil University of Medical Sciences Research Council per lo svolgimento di studi sugli animali (numero ordine etico: IR ARUMS. REC.1394.08). In questo studio visualizzato in quel momento, abbiamo usato ratti Sprague-Dawley maschio adulto (300-350 g) ottenuti da pascolo Institute (Teheran, Iran). 1. anestesia e flussometria Inducono anestesia utilizzando 4% isoflurane e mantenerla con isoflurano (1-1,5%) in…

Representative Results

Non c’era differenza significativa nei livelli EB nell’emisfero destro rispetto all’emisfero sinistro dei ratti falsità-azionati (1,06 ± 0.1 µ g/g e 1,1 ± 0.09 µ g/g, rispettivamente). Come mostrato nelle figure 2A-2B, induzione di ischemia transitoria (90 min di ischemia / riperfusione 24 h) ha causato una differenza significativa nei livelli di EB (10,41 ± 0.84 µ g/g, p < 0,001) nell'emisfero sinistro di ratti ischemici, rispetto al rispettivo emisfero n…

Discussion

Finora, vari metodi come l’autoradiografia e rilevamento dei traccianti radioattivi^24,25, microscopia di immunofluorescenza^26,27ed EB stravaso tecnica^{20, 23} sono stati usati per valutare il danno della barriera emato – encefalica. Tintura EB è fortemente in grado di legarsi all’albumina del siero e viene utilizzata come tracciante per la rilevaz…

Materials

Isoflurane	Piramal	AWN 34041100	20 – 25 °C
2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride (TTC)	Molekula	31216368	4 years
Sprague–Dawley rats	Pasture Institute (Tehran, Iran)		300-350g
Evans Blue	Sigma-Aldrich	314-13-6
Trichloroacetic acid	Sigma-Aldrich	76-03-9	2 years
Bupivacaine HCl (0.5%)	Delpharm Tours		below  25 °C
Bupernorphine	Exir (Iran)
Sodium Carbonate	Sigma-Aldrich	497-19-8
Sodium chloride	Sigma-Aldrich	7647-14-5
Di- Sodium hydrogen phosphate	EMD Millipore	231-448-7
Potassium chloride	Sigma-Aldrich	7447-40-7
Ethanol	Sigma-Aldrich	64-17-5
silicone(Xantopren)	Heraeus	EN ISO 4823
Activator universal plus	Heraeus	66037445
Micro-Dissecting forceps	Stoelting	52100-41
Spring Scisors	Stoelting	52130-00
Operating  Scissors	Roboz	52140-70
Brain matrix	Stoelting	51390
Anesthesia Machine for Small Animals |	Kent Scientific	SS-01
Power Lab system	AD Instruments	ML880
Laser Doppler flowmeter	AD Instruments	ML191
Heating feed back system	Harvard Appratus	72-7560
Vascular micro clamp	FineScience Tools	18055-03
Silk 5-0 suture thread	Ethicon	682G
Ethilon 4-0 suture thread	Ethicon	EH6740G