एक Syngeneic अग्नाशय के कैंसर माउस मॉडल अपरिवर्तनीय Electroporation के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए
Summary
अपरिवर्तनीय electroporation (गुस्सा) एक गैर थर्मल पृथक स्थानीय रूप से उन्नत अग्नाशय के कैंसर के उपचार के लिए इस्तेमाल किया तकनीक है । एक अपेक्षाकृत नई तकनीक होने के नाते, ट्यूमर के विकास पर गुस्सा के प्रभाव खराब समझ रहे हैं । हम एक syngeneic माउस मॉडल है कि अग्नाशय के कैंसर पर गुस्सा के प्रभाव का अध्ययन करने की सुविधा विकसित की है ।
Abstract
अग्नाशय के कैंसर (पीसी), एक रोग है जो अमेरिका में लगभग ४०,००० रोगियों को हर साल मारता है, सफलतापूर्वक होनहार immunotherapeutic रणनीतियों सहित कई चिकित्सकीय दृष्टिकोण से बच निकला है । अपरिवर्तनीय electroporation (गुस्सा) एक गैर थर्मल पृथक तकनीक है कि आसन्न कोलेजन संरचनाओं के विनाश के बिना ट्यूमर कोशिका मौत लाती है, इस प्रकार प्रक्रिया को सक्षम करने के लिए ट्यूमर में प्रदर्शन किया जा रक्त वाहिकाओं के लिए बहुत करीब है । थर्मल पृथक तकनीक के विपरीत, गुस्सा क्रमिक अपोप्तोटिक कोशिका मौत में परिणाम, तत्काल पृथक प्रेरित परिगलन के साथ, और स्थानीय रूप से उंनत पीसी के साथ चयनित रोगियों के लिए नैदानिक उपयोग में वर्तमान में है । एक पंचमी विभक्ति, गैर-लक्ष्य क्रोध की तरह विशिष्ट प्रक्रिया ट्यूमर microenvironment में प्रतिक्रियाओं के असंख्य प्रेरित कर सकते हैं । कुछ अध्ययनों से अन्य ट्यूमर प्रकार में ट्यूमर के विकास पर गुस्सा के प्रभाव को संबोधित किया है, लेकिन कोई भी पीसी पर ध्यान केंद्रित किया है. हम पीसी के एक syngeneic माउस मॉडल विकसित किया है जिसमें चमड़े के नीचे (वर्ग) और orthotopic ट्यूमर सफलतापूर्वक एक उच्च नियंत्रित सेटिंग में गुस्सा के साथ इलाज किया जा सकता है, विभिंन अनुदैर्ध्य अध्ययन पोस्ट प्रक्रिया की सुविधा । यह पशु मॉडल एक मजबूत प्रणाली के रूप में कार्य करता है के लिए गुस्सा और तरीके के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए गुस्सा की नैदानिक प्रभावकारिता में सुधार ।
Introduction
अग्नाशय डक्टर ग्रंथिकर्कटता (पीसी) २०२०1के आसपास अमेरिका में कैंसर से होने वाली मौतों का दूसरा प्रमुख कारण बनने का अनुमान है । रोगियों के विशाल बहुमत पीसी के साथ का निदान अंततः दूर मेटास्टेटिक रोग से मर जाएगा2. पीसी microenvironment कुख्यात immunosuppressive और chemoresistant है । इसके desmoplastic स्ट्रोमा में प्रभाव की कमी होती है (एंटी-ट्यूमर) टी कोशिकाओं और immunosuppressive ल्यूकोसाइट्स की एक प्रमुखता शामिल है, जिसमें ट्यूमर से जुड़े मैक्रोफेज (TAMs), माइलॉयड व्युत्पन्न दमन कोशिकाओं (MDSCs), और विनियामक टी कोशिकाओं (Tregs)3 . इन आबाद को microenvironment के इन प्रभावों को प्रभावहीन करने वाली multimodal कार्यनीतियों को विकसित करने की आवश्यकता है.
गुस्सा ट्यूमर पृथक के एक गैर थर्मल विधि के रूप में विकसित किया गया है । थर्मल पृथक तकनीक के विपरीत, गुस्सा तेजी से coagulative परिगलन का कारण नहीं है, लेकिन इसके बजाय क्रमिक अपोप्तोटिक कोशिका मृत्यु4में परिणाम है । अग्नाशय के ट्यूमर के लिए महत्वपूर्ण बात, गुस्सा “हीट सिंक” प्रभाव को कमजोर नहीं है और सही रक्त वाहिकाओं के बगल में किया जा सकता है5. इस प्रौद्योगिकी के एफडीए6 से 510 (कश्मीर) मंजूरी है और वर्तमान में नैदानिक रूप से इस्तेमाल किया जा रहा है, स्थानीय रूप से उन्नत या प्रतिच्छेदन अग्नाशय के कैंसर की सीमा रेखा के साथ चयनित रोगियों के लिए. 7पीसी के लिए गुस्सा का सबसे बड़ा प्रकाशित श्रृंखला में, गुस्सा के दौर से गुजर रोगियों के औसत जीवित रहने लगभग8,9के बिना अकेले आधुनिक कीमोथेरेपी के साथ इलाज रोगियों के अस्तित्व को दोगुना था ।
कई अध्ययनों से प्रदर्शन किया है कि थर्मल पृथक अंय ट्यूमर प्रकार में एक प्रणालीगत प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया लाती है (चू एट अल में समीक्षा की । 10). रेडियोफ्रीक्वेंसी पृथक (RFA) पशु ट्यूमर मॉडल में वृद्धि हुई टी सेल की ओर जाता है11,12, hepatocellular कैंसर रोगियों में सक्रिय प्राकृतिक हत्यारा (NK) कोशिकाओं में वृद्धि सहित13, 14, और फेफड़ों के कैंसर के रोगियों में immunosuppressive Tregs में कमी15। अध्ययन की एक बहुत छोटी संख्या प्रतिरक्षा, microenvironmental की जांच की है, और16गुस्सा को चोट की प्रतिक्रियाएं । गुस्सा असुरक्षित माउस मॉडल जिसमें माध्यमिक (contralateral) गुर्दे सेल allografts के विकास में कम या एक प्राथमिक ट्यूमर के गुस्से से दो सप्ताह पहले17से रोका गया था में एक प्रणालीगत प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को उत्तेजित करने के लिए दिखाया गया है । उंहोंने यह भी कहा कि असुरक्षित चूहों प्रतिरक्षा चूहों की तुलना में पूरा प्रतिगमन के लिए कम वोल्टेज की आवश्यकता है । यह कल्पना की गई है कि गुस्सा बेहतर प्रतिजन प्रस्तुति थर्मल पृथक के coagulative परिगलन की तुलना में परिणाम हो सकता है, लेकिन यह विशेष रूप से अध्ययन नहीं किया गया है ।
हम KPC-ल्यूक ४५८० सेल लाइन से पीसी के एक syngeneic माउस मॉडल विकसित किया है (उत्तरी कैरोलिना विश्वविद्यालय में जे जे ये से उपहार), जो एक ट्यूमर है कि एक पुरुष LSL में विकसित से व्युत्पंन किया गया था-KrasG12D/ LSL-Trp53R172H/+; PDX1Cre/+; LSL-ROSA26 ल्यूक/+ माउस, गुस्सा18,19के स्थानीय और प्रणालीगत प्रभाव का अध्ययन करने के लिए । यह luciferase-एक्सप्रेस सेल लाइन immunogenic है और यह भी असुरक्षित C57BL में tumorigenic/6 चूहों जब वर्ग या orthotopically इंजेक्शन और मज़बूती से जिगर मेटास्टेसिस जब तिल्ली में इंजेक्शन का उत्पादन । हम एक प्रोग्राम वर्ग तरंग पल्स जनरेटर का उपयोग किया है १००-बिजली की µs दालों को एक वोल्टेज/१,५०० V/एक दो सुई सरणी जांच का उपयोग कर (5 मिमी से अलग) या प्लेटिनम नोचना-trodes वर्ग या orthotopic ट्यूमर के लिए, क्रमशः में, चूहों एक छोटे जानवर में गुस्सा के प्रभाव मॉडल के लिए ।
Protocol
Representative Results
Discussion
इस अध्ययन में, हम पीसी के लिए एक असुरक्षित माउस मॉडल है कि ट्यूमर के विकास पर गुस्सा के प्रभाव का अध्ययन किया जा सकता है का प्रदर्शन किया है । वर्तमान में, गुस्सा एक गैर थर्मल पृथक तकनीक के रूप में ही उच्च …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
RRW एक सहयोगी शोधों अनुसंधान सैन डिएगो C3 Padres द्वारा वित्त पोषित अनुदान से इस काम के लिए समर्थन प्राप्त हुआ है कारण (#PTC2017) पेडल ।
Materials
| ECM 830 square wave electroporator | Harvard Apparatus | BTX # 45-0002 ( 58018-004 ) | |
| 2 needle array electrode | Harvard Apparatus | 45-0167 | |
| Safety foot switch | Harvard Apparatus | 45-0211 | |
| Platinum Tweezer-trode | Harvard Apparatus | 45-0486 | |
| DMEM-F12 media | ThermoFisher Scientific | 11320-033 | |
| Fetal Bovine Serum | ThermoFisher Scientific | 10437028 | |
| Trypsin | ThermoFisher Scientific | 25200056 | |
| Matrigel | Corning | 354230 | |
| Isoflurane | Sigma-Aldrich, Inc. | 792632 | |
| Lacrilube | Fisher Scientific | 19090646 | |
| Buprenorphine | Fisher Scientific | NC1292810 | |
| D-luciferrin | Perkin Elmer | 122799 | |
| IVIS Spectrum In Vivo Imaging System | Perkin Elmer | 124262 | |
| Mouse strain C57BL/6J | The Jackson Laboratory | 000664/Black 6 | |
| Cell line (KPC-Luc 4580) | J.J. Yeh Lab at University of North Carolina | ||
| BD Precisionglide syringe needles | Sigma-Aldrich, Inc. | Z192406 | |
| Alcohol Swab(70% isopropyl alcohol ) | BD | 326895 | |
| Digital calipers | ThermoFisher Scientific | 14-648-17 | |
| Disposable Scalpels, Sterile | VWR | 21909 | |
| Cotton Tipped Applicators | VWR | 89198 | |
| Suture Needle, 45 cm, Size 6-0 | Harvard Apparatus | 72-3308 | |
| Suture Needle, 45 cm, Size 4-0 | Harvard Apparatus | 72-3314 | |
| Povidone-iodine 10% | BD | 29900-404 | |
| Disposable Warming Pad | KENT SCIENTIFIC CORP. | TP-3E | |
| Mouse Hair Clipper | KENT SCIENTIFIC CORP. | CL8787 | |
| Surgical Drape | Harvard Apparatus | 59-7421 | |
| Phosphate-buffered Saline | ThermoFisher Scientific | 10010023 | |
Riferimenti
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