Summary

Trattamento con vancomicina caricato di solfato di calcio e dell'osso autogeno in un modello di coniglio migliorata dell'infezione dell'osso

Published: March 14, 2019
doi:

Summary

Questo studio presenta un coniglio migliorato modello infettato da Staphylococcus aureus bloccando la stessa quantità di batteri nel midollo osseo. Vancomicina caricato di solfato di calcio e dell’osso autogeno sono utilizzati per il trattamento di riparazione dell’osso e antibiotico. Il protocollo potrebbe essere utile per studiare l’infezione dell’osso e la rigenerazione.

Abstract

Risultati di infezione dell’osso dall’invasione batterica, che è estremamente difficile da trattare in chirurgia clinica, ortopedica e traumatica. L’infezione ossea può provocare l’infiammazione continua, osteomielite ed eventuale osso non-Unione. Istituzione di un modello animale fattibile, riproducibile è importante alle ossa ricerca di infezione e di trattamento antibiotico. Come un modello in vivo, il modello di coniglio è ampiamente usato nella ricerca di infezione dell’osso. Tuttavia, gli studi precedenti sul coniglio dell’osso ha mostrati che lo stato di infezione era incoerente, così come la quantità di batteri variabile di modelli di infezione. Questo studio presenta un metodo chirurgico migliore per indurre l’infezione dell’osso su un coniglio, bloccando i batteri nel midollo osseo. Quindi, valutazioni multi-livelli possono essere effettuate per verificare il metodo di modellazione.

In generale, sbrigliamento del tessuto necrotico e l’impianto di solfato di calcio di vancomicina-caricato (VCS) sono predominanti nel trattamento antibiotico. Sebbene il solfato di calcio in VCS benefici Osteocita strisciando e nuova crescita ossea, voluminosa dell’osso difetti si verificano dopo rimuovere il tessuto morto. L’osso autogeno (AB) è una strategia interessante per superare i difetti dell’osso per il trattamento di difetti ossei massiccia dopo rimuovere il tessuto morto osso necrotico.

In questo studio, abbiamo usato l’osso della coda come un osso autologo impiantato nel difetto osseo. Riparazione ossea è stata misurata utilizzando micro-computare-tomografia (micro-CT) e l’analisi istologica dopo sacrificio animale. Di conseguenza, nel gruppo VCS, non-Unione dell’osso è stata ottenuta costantemente. Al contrario, le zone di difetto dell’osso nel gruppo VCS-AB sono state diminuite significativamente. Il presente metodo di modellazione descritto un metodo riproducibile, fattibile, stabile per preparare un modello di infezione dell’osso. Il trattamento di VCS-AB è provocato da tassi più bassi di pseudoartrosi dell’osso dopo il trattamento antibiotico. Il modello di infezione migliore dell’osso e il trattamento di combinazione di VCS e osso autogeno potrebbe essere utile per studiare i meccanismi di fondo nella rigenerazione ossea dell’osso e infezione pertinente per applicazioni ortopediche di traumatologia.

Introduction

L’infezione dell’osso provoca solitamente da batteri o altri invasione microorganismo dopo traumi, fratture ossee o altre malattie di osso1. L’infezione dell’osso può indurre un alto livello di distruzione del tessuto dell’osso e l’infiammazione. Nella clinica, lo Staphylococcus aureus (Staphylococcus aureus) è l’agente causativo predominante di osso infezione2,3. L’infezione dell’osso è doloroso e debilitante e spesso assume un decorso cronico che è estremamente difficile da trattare4. Allo stato attuale, lo sbrigliamento del tessuto necrotico e impiantare dei branelli di vancomicina-caricati del calcio (VCS) sono stati confermati come una strategia efficace per il controllo di infezione locale5,6. Tuttavia, 10-15% dei pazienti ha avvertito un processo di riparazione dell’osso prolungato, ritardi di consolidazione o pseudoartrosi dopo trattamento anti-infezione7. Il grande segmento di un difetto dell’osso è la questione più difficile per i chirurghi ortopedici. Un innesto di osso autologo è considerato la sostituzione ottimale dell’osso nell’osso non sindacale trattamento8,9.

Ad oggi, la maggior parte degli studi sull’osso infezione e l’impianto di osso autologo sono stati condotti in vari tipi di modelli animali, come i ratti, conigli, cani, maiali e pecore10,11. Modelli di coniglio sono più comunemente utilizzati per studi di infezione dell’osso, come prima interpretata da Norden e Kennedy nel 197012,13. Nel nostro studio precedente, abbiamo utilizzato modelli di coniglio seguendo il metodo di Norden, e abbiamo trovato che la quantità di S. aureus iniettato nel midollo osseo non era possibile quantificare con precisione, come la fuoriuscita di sangue dal midollo osseo ha condotto all’overflow di soluzione di batteri.

Questo articolo presenta un metodo chirurgico migliore per indurre infezione ossea sui conigli. Al termine della procedura, un’analisi biochimica del sangue, un esame batteriologico e un esame istopatologico sono stati effettuati per verificare il modello di infezione dell’osso. Quindi, VCS è stata impiantata per inibire l’infezione e l’osso autogeno è stato impiantato per promuovere la rigenerazione ossea.

Protocol

I conigli utilizzati nel presente studio sono stati trattati in conformità con la guida per la cura e l’uso di animali da laboratorio. Tutte le procedure sperimentali sono state seguite dalle regole di bioetica Comitato di Zhejiang Accademia di medicina tradizionale cinese. 1. preparazione della sospensione batterica Sciogliere 0,5 mg di S. aureus liofilizzazione polvere (ATCC 6538) con 0,3 mL di terreno di coltura di Luria-Bertani. Mescolare la sospensione completamente.</…

Representative Results

Valutazione del modello di infezione dell’ossoDopo l’infezione con S. aureus, le manifestazioni patologiche dei conigli erano simili al sintomo rappresentativo di osteomielite cronica nella clinica. Nel nostro studio, 30 conigli sono stati infettati e sottomesso come un gruppo di modello, e 10 conigli sono stati sottoposti come animali di controllo. Tutti i conigli di modello hanno infettato i seni del sito locale di tibia, con pus bianco e giallo sul flusso …

Discussion

Negli studi precedenti, sono stati costruiti vari tipi di modelli animali per studiare sia l’infezione acuta e cronica dell’osso; Tuttavia, la ricerca per il modello ideale persiste ancora17,18. Inoltre, il modello di infezione ossea ideale è previsto per simulare le caratteristiche patologiche di infezione ossea in ambiente clinico, mentre i periodi di modellazione, rimanere basso costo e facile da realizzare. Finora, il modello di infezione dell’osso di conigl…

Divulgazioni

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Questo lavoro è stato supportato dal National Foundation Natural Science of China (81803808, 81873062), Zhejiang Provincial Medical Health Science e Technology Fund (2017KY271) e scienza e tecnologia progetto della provincia del Zhejiang (2017 37181).

Materials

absorbable surgical suture Jinghuan 18S0604A
asepsis injector Jinglong 20170501
bone wax ETHICON JH5CQLM
CCD camera Olympus DP72
EDTA-K2 anticoagulant blood vessel XINGE 20170802
Electric bone drill unit Bao Kang BKZ-1
Electric shaver Codos 3800
flexible silica gel mold  WRIGHT 1527745
Hematoxylin and Eosin Staining Kit Beyotime 20170523
Luria-Bertani culture medium Baisi Biothchnology 20170306
Medical-grade calcium sulphate WRIGHT 1527745
microcomputed tomography (micro-CT) Bruker SkyScan 1172 
Microscope Olympus CX41
New Zealand white rabbits Zhejiang Experimental Animal Center  SCXK 2014-0047
No. 11 scalpel  Yuanlikang 20170604
normal saline Mingsheng 20170903
PBS TBD(Jingyi) 20170703-0592
pentobarbital sodium Merk 2070124
povidone-iodinesolution Lierkang 20170114
S. aureus freeze drying powder China General Microbiological Culture Collection Center ATCC 6538
sheep blood agar HuanKai Microbial 3103210
tryptic soy agar plates HuanKai Microbial 3105697
tryptic soy broth tubes HuanKai Microbial 3104260
Vancomycin Lilly C599180

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Citazione di questo articolo
Zhang, Y., Shen, L., Wang, P., Xi, W., Yu, Z., Huang, X., Wang, X., Shou, D. Treatment with Vancomycin Loaded Calcium Sulphate and Autogenous Bone in an Improved Rabbit Model of Bone Infection. J. Vis. Exp. (145), e57294, doi:10.3791/57294 (2019).

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