यह विधि किसी भी द्विगुणित तनाव से tetraploid और triploid Caenorhabditis सूत्रकृमि की पीढ़ी के लिए अनुमति देता है । इस विधि द्वारा उत्पंन Polyploid उपभेदों meiotic दौर में गुणसूत्र बातचीत का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया गया है, और इस विधि सेल, विकास, विकासवादी, और कैंसर जीव विज्ञान में महत्वपूर्ण बुनियादी सवालों की जांच के लिए उपयोगी है ।
तंत्र है कि पूरे जीनोम polyploidy शामिल विकास में महत्वपूर्ण भूमिकाओं और विकास; इसके अलावा, tetraploid कोशिकाओं की एक असामांय पीढ़ी के दोनों कैंसर की प्रगति और दवा प्रतिरोध के विकास के साथ जुड़ा हुआ है । अब तक, यह संभव नहीं किया गया है आसानी से ज्यादातर बाँझ संतान पैदा करने के बिना एक कोशिकीय जानवर के ploidy में हेरफेर करने के लिए. यहां प्रस्तुत किसी भी द्विगुणित तनाव से tetraploid Caenorhabditis एलिगेंस पशुओं को पैदा करने के लिए एक सरल और तेजी से प्रोटोकॉल है । इस विधि अर्धसूत्रीविभाजन के दौरान गुणसूत्र अलगाव में एक पूर्वाग्रह बनाने के लिए उपयोगकर्ता की अनुमति देता है, अंततः सी. एलिगेंसमें ploidy बढ़ रही है । यह रणनीति आरईसी-8 जीन की अभिव्यक्ति के क्षणिक कमी को द्विगुणित gametes उत्पंन करने पर निर्भर करता है । एक आरईसी-8 उत्परिवर्ती कि संभावित निषेचन पर tetraploids उत्पादन कर सकते है द्विगुणित gametes पैदा करता है । इस योजना के लिए tetraploid उपभेदों उत्परिवर्तनों और गुणसूत्र पुनर्व्यवस्थाओं ले जाने के लिए गुणसूत्र गतिशीलता और अर्धसूत्रीविभाजन में synapsis के दौरान और बातचीत में अंतर्दृष्टि लाभ उत्पंन किया गया है । इस विधि आनुवंशिक मार्करों के बिना स्थिर tetraploid उपभेदों पैदा करने के लिए कुशल है, किसी भी द्विगुणित तनाव के लिए लागू किया जा सकता है, और triploid सी. एलिगेंसप्राप्त करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । यह सरल विधि जीनोम अस्थिरता, जीन खुराक, जैविक स्केलिंग, extracellular संकेतन, तनाव के लिए अनुकूलन, दवाओं के लिए प्रतिरोध के विकास के लिए प्रासंगिक अंय मौलिक जैविक प्रश्नों की जांच के लिए उपयोगी है, और speciation के तंत्र ।
पूरे जीनोम polyploidy प्रकृति भर में मौजूद है और अक्सर अनुकूलन, speciation, organogenesis, घाव भरने, और जैविक स्केलिंग में एक आवश्यक कदम है; यह भी ड्रग्स के लिए कैंसर और प्रतिरोध दोनों को बढ़ावा देने के लिए जाना जाता है1,2,3,4,5,6,7,8, 9 , 10 , 11 , 12. कृषि और मत्स्य उद्योग रासायनिक उपचार (जैसे, colchicine और orzalin) द्वारा polyploid पौधों, मछली, और शंख उत्पन्न करने के लिए तेजी से वृद्धि दर और bulkier फसलों और पशुधन13प्राप्त करने के लिए, 14,15. tetraploids के प्रायोगिक और अक्षम उत्पादन माउस और zebrafish मॉडल सिस्टम16,17के लिए मौजूद है । हालांकि, सबसे या सभी polyploid कोशिकीय पशुओं उत्पंन भ्रूण घातक या बाँझ है और इस प्रकार एक कोशिकीय जीव में polyploidy के प्रभाव पर प्रयोगशाला अध्ययन के लिए आदर्श नहीं है । नतीजतन, कोशिकीय जीवों में पूरे जीनोम polyploidization की किसी भी समझ को विकासवादी हाल के polyploidization घटनाओं से निकटता से संबंधित प्रजातियों तक ही सीमित कर दिया गया है18,19,20 . polyploidization की जैविक भूमिका या परिणामों की अग्रिम प्रश्नों के लिए एक मार्ग C. एलिगेंस मॉडल सिस्टम का उपयोग है । महत्वपूर्ण बात, सी. एलिगेंस एक परितंत्रीय आनुवंशिक प्रणाली है कि आम तौर पर एक द्विगुणित के रूप में मौजूद है, केवल पांच कुछ (एक) और एक सेक्स गुणसूत्र (जीनोम के प्रति एक्स), पारदर्शी है vivo में जैविक प्रक्रियाओं के अवलोकन के लिए अनुमति शामिल है, और 3-4 दिनों के एक छोटे से जीवन चक्र है (अंडे से यौन परिपक्व वयस्क के लिए) । C. एलिगेंस एक tetraploid, जो प्रकृति में पूरे जीनोम polyploidy का सबसे आम प्रकार है के रूप में पुन: पेश करने में सक्षम होने के लिए दिखाया गया है । Triploid पशुओं को diploids के साथ tetraploids पार करके उत्पन्न किया जा सकता है, लेकिन उनका ploidy स्थिर नहीं होता है, और तनावों से कुछ पीढ़ियों के भीतर द्विगुणित हो जाता है.
पिछले कुछ दशकों में ही व्यवहार्य और उपजाऊ सी एलिगेंस tetraploids उपभेदों के एक मुट्ठी भर प्रयोगशाला में अलग-थलग थे, एक रणनीति है कि श्रमसाध्य है और केवल सीमित प्रकार के उपभेदों उत्पंन का उपयोग कर21,22, 23. यह रणनीति गर्मी-सदमे उपचार, जो संभवतः gametes में गुणसूत्र अलगाव को प्रभावित करता है द्वारा सी. एलिगेंस tetraploids उत्पंन, ख्यात polyploid आनुवंशिक मार्कर का उपयोग पशुओं के लिए एक स्क्रीनिंग के बाद । ये tetraploids की पूछताछ में बेहद उपयोगी थे कि कैसे यह निमेटोड निर्धारित करती है कि पुरुष या द्विलिंग बनने के लिए. बाद में अध्ययन उपलब्ध उपभेदों के विकास, जीन खुराक की जांच करने के लिए इस्तेमाल किया, और इस निमेटोड में अर्धसूत्रीविभाजन के दौरान synapsis के विनियमन21,24,25,26। दुर्भाग्य से, इन अध्ययनों से नए tetraploid उपभेदों और पृष्ठभूमि आनुवंशिक मार्करों इन उपभेदों समाहित पैदा करने में कठिनाई द्वारा सीमित थे । यहां दिखाया गया है एक सरल और रैपिड प्रोटोकॉल स्थिर tetraploids, जो अर्धसूत्रीविभाजन के दौरान synapsis के विनियमन अध्ययन करने के लिए उत्पंन करने के लिए इस्तेमाल किया गया है उत्पंन करने के लिए27।
प्रकृति के रूप में, polyploidization अगुणित gametes के बजाय द्विगुणित के गठन से पैदा कर सकते हैं । हमारी खोज है कि एक अर्धसूत्रीविभाजन-विशिष्ट cohesin घटक उत्परिवर्ती आरईसी-8 द्विगुणित शुक्राणु उत्पन्न करता है और अंडाणुओं संकेत दिया कि नीचे दस्तक आरईसी-8 जीन tetraploid संतति के उत्पादन में परिणाम होगा (चित्रा 1)27, 28,29. सृजन tetraploid उपभेदों बस नीचे दस्तक आरईसी-8 आरएनए हस्तक्षेप (RNAi) द्वारा दो पीढ़ियों के लिए आरईसी-8 उत्परिवर्ती द्विगुणित gametes phenocopy करने के लिए शामिल है । ख्यात polyploids आसानी से उनके सामांय शरीर के आकार से अधिक की पहचान की जा सकती है । Polyploids नाभिक प्रति गुणसूत्रों की संख्या एक बार स्थिर लाइनें स्थापित कर रहे है गिनती द्वारा पूर्ण या आंशिक tetraploids के रूप में पुष्टि कर रहे हैं ।
यहां बताई गई रणनीति आनुवंशिक मार्कर के उपयोग के बिना किसी भी आरंभिक द्विगुणित आनुवंशिक पृष्ठभूमि या कैरयोटाइप से स्थिर tetraploid Caenorhabditis निमेटोड उपभेदों की पीढ़ी को सक्षम बनाती है । चूंकि इस प्रोटोकॉल और अधिक कुशल, बहुमुखी है, और पहले से इस्तेमाल किया योजना से सरल, यह विकास, जीनोम स्थिरता, और विकास की मौलिक प्रक्रियाओं में polyploidization की भूमिकाओं क्वेरी करने के लिए आवश्यक उपकरणों का विस्तार होगा कोशिकीय जीवों. इस प्रोटोकॉल के उपयोग में केवल निकट सीमा आनुवंशिक RNAi के लिए प्रतिरोधी पृष्ठभूमि में है ।
अगुणित का उत्पादन (n) gametes निषेचन में एक द्विगुणित (2n) युग्मनज पैदा करने के लिए महत्वपूर्ण है । जीनोम की यह कमी एक एकल जीनोम दोहराव के बाद लगातार दो सेल डिवीजनों के साथ अर्धसूत्रीविभाजन के दौरान पूरा किया है । अगुणित gametes, सी. एलिगेंसउत्पंन करने के लिए, के रूप में सबसे अंय metazoans के साथ, मातृ और अलग-पहले विभाजन में homologs-व्युत्पंन, जबकि बहन chromatids प्रत्येक homolog दूसरे विभाजन में अलग से । एक ही रास्ता है कि पूरे जीनोम polyploidy प्रकृति में उठता है gametes की पीढ़ी के माध्यम से है कि अर्धसूत्रीविभाजन के दौरान आधे उनके जीनोम आकार में विफल ।
यह 50 से अधिक वर्षों के लिए ज्ञात किया गया है कि tetraploid सी एलिगेंस सूत्रकृमि व्यवहार्य और उपजाऊ हैं । Nigon23, और बाद में Madl और हरमन22, उत्पन्न और meiotic गुणसूत्र अलगाव गर्मी शॉक उपचार का उपयोग कर और आनुवंशिक मार्कर का उपयोग कर, क्रमशः बाधित द्वारा सी. एलिगेंस tetraploids की एक मुट्ठी भर की पहचान की । एक एकल अतिरिक्त सी. briggsae tetraploid तनाव 30 साल बाद24पर इस प्रोटोकॉल का उपयोग कर व्युत्पंन किया गया । इन tetraploids की जांच करने के लिए उपयोग किया गया था कि कैसे सी एलिगेंस पुरुष या द्विलिंग, कैसे ploidy विकास और आकार को नियंत्रित करता है, और बाँधना और synapsis में अर्धसूत्रीविभाजन25,26का विश्लेषण करने के लिए, 38 , 39 , 40. फिर भी इन और अंय विशिष्ट tetraploids या triploid उपभेदों के उपयोग की आवश्यकता के अध्ययन इस विधि द्वारा tetraploid उपभेदों पैदा करने में कठिनाई द्वारा सीमित थे ।
प्रोटोकॉल यहां वर्णित स्थिर पूर्ण 4a, 4x और आंशिक 4a, 3x tetraploid Caenorhabditis किसी भी प्रारंभिक द्विगुणित आनुवंशिक पृष्ठभूमि या आनुवंशिक मार्करों के उपयोग के बिना कैरयोटाइप से निमेटोड उपभेदों की पीढ़ी में सक्षम बनाता है ।
Tetraploidy C. एलिगेंसमें एक से अधिक तंत्र द्वारा उत्पंन हो सकता है:
Madl और हरमन सुझाव दिया कि tetraploid उपभेदों वे एक triploid मध्यवर्ती राज्य से व्युत्पंन की संभावना उत्पंन । उनके उपभेदों एकाधिक पीढ़ियों से अधिक चयन के माध्यम से प्राप्त किया गया था या द्विगुणित नर22के साथ ख्यात triploid मध्यवर्ती पार करके । आरईसी-8 म्यूटेंट में गुणसूत्र विभाजन में दोष है कि द्विगुणित अंडाणुओं और शुक्राणु को जन्म देता है एक और संभव प्रणाली है जिसके द्वारा tetraploid जानवरों के आरईसी-8 RNAi योजना27के साथ पैदा हो सकता है सुझाव देते हैं ।
आरईसी-8 RNAi इलाज hermaphrodites द्विगुणित अंडाणुओं और spermatocytes है, जो निषेचन पर tetraploid पशुओं को जंम देना होगा उपज सकता है । इस संभावना के अनुरूप तथ्य यह है कि क्लोन f2 hermaphrodites के कुछ अगली पीढ़ी में स्थिर लंदन उपभेदों को जंम दिया है, जो पता चलता है कि क्लोन लंदन F2 hermaphrodites जहां पहले से ही tetraploid । पार योजना में, आरईसी-8 RNAi इलाज hermaphrodites की पहली पीढ़ी अनुपचारित पुरुषों के साथ पार कर रहा है । द्विगुणित spermatocytes अभी भी पुरुषों में पैदा हो सकता है क्योंकि क्रॉस आरईसी-8 dsRNA व्यक्त बैक्टीरिया की उपस्थिति में किया जाता है और इस प्रकार, पुरुषों आरईसी-8 RNAi के लिए संभोग के दौरान उजागर कर रहे है कम 3 दिनों के लिए । इसलिए, इस पार में लंदन polyploids-निषेचन योजना भी द्विगुणित शुक्राणु द्वारा द्विगुणित अंडाणुओं के निषेचन से गठन किया जा सकता है । स्थिर tetraploid उपभेदों या तो gametes के बीच निषेचन से या triploid ploidy शुक्राणु उत्पादन द्विगुणित पशुओं के साथ चर अगुणित के अंडाणुओं युक्त जानवरों को पार करने से उत्पंन हो सकती है ।
महत्वपूर्ण विचार:
स्व-बनाम क्रॉस-निषेचन योजनाएं:
स्व निषेचन की योजना आरईसी-8 RNAi इलाज F1 hermaphrodites और अनुपचारित पुरुषों के साथ इलाज hermaphrodites के पार शामिल योजना दोनों 4a, 4x और 4a, 3x tetraploid उपभेदों को जंम दिया । हालांकि अधिक polyploids शुरू में स्व-निषेचन योजना से अलग थे, इन polyploid पशुओं के और अधिक बाँझ थे और इस तरह दोनों योजनाओं को इसी तरह tetraploid स्थिर उपभेदों के उत्पादन में कुशल हैं । स्व-निषेचन योजना में बढ़ी हुई सफलता और बांझपन का कारण अज्ञात है । यद्यपि दोनों योजनाएँ इसी प्रकार दक्ष हैं, अतः स्व-निषेचन योजना आसान है क्योंकि इसमें सहवास के लिए पुरुषों के अलगाव की आवश्यकता नहीं है. इसके अलावा, जब ब्याज की तनाव संभोग में अक्षम या दोषपूर्ण है, स्व-निषेचन योजना बेहतर होगा । क्रॉस-निषेचन योजना एक एकल गुणसूत्र के दो से अधिक संस्करणों से युक्त जटिल tetraploids पैदा करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है ।
संशोधन और सीमाएं:
वर्तमान में, इस प्रोटोकॉल आरईसी-8 जीन के लिए dsRNA व्यक्त बैक्टीरिया खिलाने के द्वारा आरईसी-8 RNAi उपचार शामिल है । इस प्रकार, इस प्रोटोकॉल में काम नहीं करता है Caenorhabditis प्रजातियों को खिलाने, या म्यूटेंट में दोषपूर्ण या पर्यावरणीय या ऊतकों के बीच RNAi के प्रणालीगत प्रसार के द्वारा RNAi के लिए अप्रतिसादी में41,42,43। इस समस्या का संभावित germline में सीधे ब्याज की dsRNA के प्रत्यक्ष इंजेक्शन द्वारा RNAi उपचार शुरू करने से हल किया जा सकता है ।
Triploid पशुओं को एक tetraploid को पार करके एक द्विगुणित जानवर जो इसे प्राप्त किया गया था द्वारा उत्पंन किया जाना चाहिए, क्योंकि यह योजना स्थिर Triploid उपभेदों44,45उत्पंन नहीं करता है । triploids हैच द्वारा sired अंडे का केवल 15%, और उनकी संतति aneuploidy के कारण अधिकांशतः बाँझ संतति होती हैं. इसके अलावा, कुछ जीवित उपजाऊ संतान के लिए पूरी तरह या diploids के पास पीढ़ियों के एक जोड़े के भीतर हो जाते हैं । यह संभावना है, कम से भाग में, क्योंकि अंडाणुओं आंशिक रूप से पहले meiotic विभाजन में ध्रुवीय शरीर में तीसरे गुणसूत्र अलग करके trisomy सुधार कर रहे हैं ।
इस प्रोटोकॉल की एक अति कमी यह है कि यह म्यूटेंट के tetraploids बनाने कि RNAi मशीनरी के घटकों को प्रभावित क्योंकि वे RNAi उपचार के लिए प्रतिरोधी रहे है के लिए काम नहीं करता है46।
निवारण:
आरईसी-8 RNAi:
कुछ विचार इस प्रोटोकॉल सफल होने के लिए महत्वपूर्ण हैं । पहला आरईसी-8 (HT115 2.6) क्लोन ले जाने वाले बैक्टीरिया w02a बैक्टीरिया में आरईसी-8 dsRNA उत्पादन के प्रेरण के लिए ताजा IPTG और हौसले से बना IPTG NMG प्लेट का उपयोग करने के लिए है । IPTG प्रकाश संवेदनशील है और यह प्लेटों के लिए प्रकाश जोखिम को कम करने के लिए महत्वपूर्ण है । IPTG प्लेट्स को अंधेरे में 4 डिग्री सेल्सियस पर एक महीने तक स्टोर किया जा सकता है । दूसरा, आरईसी-8 (w02a 2.6) Ahringer लाइब्रेरी (कामथ और Ahringer 2003) से RNAi बैक्टीरियल HT115 उपभेदों अन्य उपलब्ध आरईसी-8 phenotype क्लोन की तुलना में एक मजबूत आरईसी-8 HT115 उपज ।
Tetraploid तनाव रखरखाव:
Tetraploid उपभेदों बहुत धीरे से बढ़ती है और उत्पादन के प्रति सबसे अधिक 50 जिन्नियों में47उपज । सभी की पहचान की tetraploid उपभेदों अपेक्षाकृत स्थिर हैं, लेकिन वे टूट सकता है और द्विगुणित हो जब (जोनाथन Hodgkin व्यक्तिगत संचार और हमारे अप्रकाशित टिप्पणियों) पर बल दिया । इसलिए, यह ध्यान रखें कि जब tetraploid उपभेदों 25 डिग्री सेल्सियस, गर्मी सदमे में हो रहे हैं, भूखे, या जमे हुए और स्थिर, वे तेजी से diploidy को वापस कर सकते हैं, तो यह महत्वपूर्ण है के लिए लंदन जानवरों लेने जब इन उपभेदों या जब ठंढ तनावपूर्ण स्थिति है कि उंहें वापस करने के लिए कारण हो सकता है इन उपभेदों को उजागर ।
संभावित अनुप्रयोग:
प्रभाव या विकास में पूरे जीनोम polyploidization की भूमिका की जांच, कोशिका चक्र, जीन अभिव्यक्ति, और कोशिकीय जीवों में विकास के बीच तुलना पर भरोसा किया है: एक जीव है कि विभिंन ploidy होते है में कोशिकाओं, एक ही सेल विभिंन ploidy, या प्रजातियों है कि evolutionarily हाल ही में polyploidization घटनाओं और शारीरिक अलगाव3,5,6,78 ,11,18,19,20,48,49,50. हालांकि tetraploids zebrafish और माउस मॉडल प्रणालियों से प्राप्त किया जा सकता है, उनकी संतान बाँझ या भ्रूण घातक हैं16,17. इसके अलावा, इन मॉडल सिस्टम सी. एलिगेंस की तुलना में लंबे जीवन चक्र है, और polyploid पशुओं उत्पंन करने के लिए उपलब्ध तरीकों जटिल और अक्षम हैं। इसलिए, इस विधि द्वारा व्युत्पंन सी एलिगेंस उपभेदों कोशिकीय जीवों में पूरे जीनोम polyploidy के प्रभाव और भूमिकाओं पर किसी भी जांच को आगे बढ़ाने के लिए महत्वपूर्ण भूमिका निभाई होगी ।
के बाद से एक triploid मूल द्विगुणित करने के लिए tetraploid पार करके एक tetraploid से प्राप्त किया जा सकता है, diploids, triploids के बीच एक तुलना, और tetraploids है कि केवल जीनोम प्रतियां की संख्या में अलग, एक अनूठा और अभूतपूर्व अवसर प्रदान करता है अलग जीनोम आकार (या जीन खुराक) के साथ समकक्ष जानवरों का मूल्यांकन/ यहाँ वर्णित योजना में लचीलापन और सुगमता ने हमें विभिन्न आनुवांशिक द्विगुणित पृष्ठभूमियों या karyotypes से tetraploid उपभेदों के दर्जनों उत्पन्न करने की अनुमति दी है. इनमें से कुछ उपभेदों पहले से ही मुताबिक़ गुणसूत्र बाँधना और synapsis के अर्धसूत्रीविभाजन27के दौरान क्वेरी तंत्र के लिए इस्तेमाल किया गया था ।
जंगली प्रकार और उत्परिवर्ती tetraploid फ्लोरोसेंट मार्करों ले जाने उपभेदों जांच के नए रास्ते जीनोम आकार और परमाणु/cytosol अनुपात के बीच संबंधों को समझने के लिए प्रदान करेगा intracellular/सेलुलर/अंग पर और पूरे पशु स्केलिंग, पूरे जीनोम अनुकूलन, speciation, जीन खुराक और अभिव्यक्ति पर polyploidization, और ऊतक और अंग विकास । जैविक स्केलिंग के अध्ययन के अलावा, tetraploid उपभेदों की पीढ़ी काफी आगे extracellular संकेतन, जीनोम अस्थिरता, endoreduplication, पूरे जीनोम के लिए प्रासंगिक मौलिक जैविक प्रश्नों के प्रश्नों होगा दोहराव, जीन खुराक, तनाव के लिए अनुकूलन, दवाओं के लिए प्रतिरोध के विकास, और तंत्र speciation ।
The authors have nothing to disclose.
हम Caenorhabditis आनुवंशिकी केंद्र (स्वास्थ्य संस्थान (NIH) अनुसंधान अवसंरचना कार्यक्रम P40 OD010440 के कार्यालय द्वारा वित्त पोषित) उपभेदों के लिए धंयवाद । लेखकों को बपतिस्मा देनेवाला Roelens और एली Lessman शुक्रिया अदा करना चाहते हैं, हमें रचनात्मक प्रतिक्रिया और CCNY में मनो लैब, फिल्म के भाग के लिए अपनी प्रयोगशाला के उपयोग के लिए और उनकी सहायता के लिए CUNY के साथ उपलब्ध कराने के लिए । इस कार्य को पीएससी-CUNY अवार्ड TRADB-46-113 और NIH ग्रांट 1SC2GM118275-01 के सहयोग से किया गया । M.S. आंशिक रूप से एक कनाडाई स्वास्थ्य संस्थान (CIHR) postdoctoral फैलोशिप द्वारा समर्थित किया गया था, और E.K. NIH/NIGMS वृद्धि अनुदान GM062981 द्वारा समर्थित किया गया था ।
Dissecting Microscope | Motic Microscopy | SMZ171 | |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
NGM agar plates | |||
60 mm x 15 mm Petri Dishes, Sterile | Tritech Research | T3305 | |
35 mm x 15 mm Petri Dishes, Sterile | Tritech Research | T3500 | |
Bacteriological Agar, 5 kg | VWR | 89140-850 | |
Sodium Chloride, Biotechnology Grade | VWR | 97061-278 | |
Peptone, BD Bacto | VWR | 90000-368 | |
Ampicillin Trihydrate | VWR | 97062-300 | |
IPTG, dioxane-free | Thermo Scientific | R0391 | |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Growth Culture | |||
LB Lennox Broth | IBI Scientific | 89126-176 | |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
LB Agar plates | |||
LB Agar Lennox | IBI Scientific | 89126-182 | |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Antibiotics | |||
Ampicillin Trihydrate | VWR | 97062-300 | |
Tetracycline Hydrochloride | Fisher Scientific | BP912-100 | |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Staining | |||
Hoechst 33258, Pentahydrate | Biotium | 40045 | |
DAPI | Biotium | 40011 | |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Ethanol Fixation | |||
Ethanol, Pure, 190 Proof (95%), USP | Koptec, VWR | 89125-166 | |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
M9 Buffer | |||
Sodium chloride, Biotechnology Grade | VWR | 97061-278 | |
Potassium phosphate, Monobasic Anhydrous Grade | VWR | 97062-346 | |
Sodium phosphate, monobasic dihydrate | Fisher Scientific | AC271750025 | |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
RNAi Clones | |||
HT115 bacteria expressing rec-8 dsRNA | Source Bioscience | W02A2.6 | |
HT115 bacteria expressing rec-8 dsRNA | Dharmacon | RCE1182-202299820 |