Diabetogenic पर्यावरणीय रसायनों के लिए एक Murine अग्नाशय टाप सेल आधारित स्क्रीनिंग
Summary
यहां हम xenobiotics द्वारा ROS प्रेरण स्क्रीनिंग के लिए माउस अग्नाशय टाप कोशिकाओं को अलग करने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत क्रम में संभावित diabetogenic xenobiotic रसायनों की पहचान करने के लिए ।
Abstract
मानव और पशुओं में कुछ पर्यावरणीय रसायनों के संपर्क में अग्नाशय β कोशिकाओं के सेलुलर नुकसान का कारण पाया गया है जो टाइप 2 मधुमेह (T2DM) के विकास के लिए नेतृत्व करेंगे । हालांकि रासायनिक के लिए तंत्र-प्रेरित β कोशिका क्षति अस्पष्ट और जटिल होने की संभावना थे, एक आवर्ती खोज है कि इन रसायनों ऑक्सीडेटिव तनाव अत्यधिक प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों (ROS) जो नुकसान के लिए प्रेरित की पीढ़ी के लिए अग्रणी प्रेरित β कक्ष. संभावित diabetogenic पर्यावरणीय रसायनों की पहचान करने के लिए, हम C57BL/6 चूहों और ९६-well सेल कल्चर प्लेटों में कल्चरल टाप सेल से अग्नाशय टाप कोशिकाओं अलग; इसके बाद, टाप कोशिकाओं को रसायनों से खुराक दी गई और ROS जनरेशन को 2 ‘, 7 ‘-dichlorofluorescein (DCFH-DA) फ्लोरोसेंट डाई का पता चला । इस विधि का प्रयोग, हमने पाया है कि bisphenol एक (BPA), Benzo [एक] pyrene (BaP), और polychlorinated biphenyls (पीसीबी), ROS के उच्च स्तर को प्रेरित कर सकता है, सुझाव है कि वे संभवतः टाप कोशिकाओं में नुकसान पैदा कर सकता है. यह विधि diabetogenic xenobiotics को परखने के लिए उपयोगी होनी चाहिए । इसके अलावा, संस्कृतिक टाप कोशिकाओं को भी इन विट्रो में अग्नाशय कोशिकाओं में रासायनिक प्रेरित विषाक्तता के विश्लेषण के लिए अनुकूलित किया जा सकता है ।
Introduction
T2DM की व्यापकता में वृद्धि हाल के वर्षों में एक वैश्विक स्वास्थ्य संकट बन गए है सार्वजनिक स्वास्थ्य1के लिए एक गंभीर खतरा खड़ी । कई कारकों के लिए कारण T2DM के विकास से जुड़ा हो पाया गया है, जो बीच में, आवर्ती निष्कर्षों का सुझाव है कि इन कारकों के लिए एक आम अभिसरण बिंदु ऑक्सीडेटिव तनाव की प्रेरण जो अत्यधिक ROS2 की पीढ़ी की ओर जाता है , 3.
पीसीबी, डाइअॉकॉ्सिन सहित पर्यावरणीय रसायनों की एक व्यापक स्पेक्ट्रम, और BaP ऑक्सीडेटिव तनाव पैदा करने के लिए पाया गया है, जो अग्नाशय β कोशिकाओं के समारोह ख़राब कर सकते हैं और इंसुलिन प्रतिरोध और T2DM4के लिए नेतृत्व. हालांकि ROS के शारीरिक स्तर सेलुलर कार्यों में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है, ROS कि कोशिकाओं को नुकसान में एंटीऑक्सीडेंट प्रणाली के परिणाम की क्षमता से अधिक है/ऊतकों और रोगों की ओर जाता है5. अग्नाशय β कोशिकाओं एंटीऑक्सीडेंट एंजाइम के एक निम्न स्तर व्यक्त, और इस प्रकार ऑक्सीडेटिव तनाव के लिए एक संवेदनशील लक्ष्य-6,7की मध्यस्थता नुकसान कर रहे हैं. ROS के उच्च स्तर के लिए पुरानी जोखिम तनाव प्रेरित अग्नाशय कोशिका रोग5 के रूप में के रूप में अच्छी तरह से जिगर और वसा ऊतक में इंसुलिन प्रतिरोध के कारण दिखाया गया है8.
इस परियोजना का समग्र लक्ष्य एक कोशिका को विकसित करने के लिए परख के लिए अपने diabetogenic अग्नाशय कोशिकाओं में ROS की प्रेरण के आधार पर क्षमता के लिए रसायनों स्क्रीन है । अग्ंयाशय चयापचय detoxification का अभाव है और xenobiotic प्रेरित नुकसान6,7के लिए एक संवेदनशील लक्ष्य है । इसलिए, सीधे अग्नाशय कोशिकाओं में उत्पन्न ROS को मापने के द्वारा, इस परख अग्न्याशय में रासायनिक प्रेरित चोट के एक प्रत्यक्ष सन्निकटन प्रदान करना चाहिए. इस विधि को विकसित करने के लिए, हम अलग माउस अग्नाशय के टाप, रसायन के साथ कोशिका संस्कृति हालत के तहत पृथक टाप कल्चरित, और readout के रूप में रासायनिक प्रेरित ROS पीढ़ी का उपयोग किया । इस प्रक्रिया को अलग टाप में ROS उत्प्रेरण रसायनों की पहचान करने में सरल और प्रभावी है; यह और विषाक्तता के तंत्र है कि इन विट्रो मेंअग्ंयाशय के लिए विशिष्ट है की जांच के लिए विकसित किया जा सकता है ।
Protocol
Representative Results
Discussion
सबूत जमा पता चलता है कि पर्यावरण रसायनों के लिए जोखिम T2DM के विकास में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है । Xenobiotics-प्रेरित ROS एक संभावित etiological T2DM के विकास में योगदान कारक के रूप में मांयता प्राप्त किया गया है । मान?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
यह काम CREH केंद्र से एक पायलट परियोजना अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था NIEHS द्वारा प्रायोजित और राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन द्वारा चीन (No. ३१५७२६२६) ।
Materials
| 10×Hank’s balanced salt solution | GIBCO | 14185-052 | |
| Collagenase Type 4 | Worthington Biochemical Corporation | CLS-4 | |
| polysucrose/sodium diatrizoate solution | Sigma | 10771 | |
| 2’,7’-dichlorofluorescein (DCFH-DA) | Sigma | D6883-50MG | |
| fluorescence microplate reader | Biotek | ||
| L-glutamine | Sigma | G8540-25G | |
| streptomycin | GIBCO | 15140148 | |
| FBS | GIBCO | 26140079 | |
| RPMI 1640 | GIBCO | 11875-085 | |
| avertin | Sigma | T48402-25G | |
| Rat/Mouse Insulin ELISA Kit | Millipore | EZRMI-13K | |
| Centrifuge | Sorval | Sorval RT7 | for 96-well plate centrifuge |
| Microplate reader | Biotek | Epoch 2 | for fluorescence reading |
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