Dual Effekte von Melanom Zelle abgeleitet Faktoren auf Knochenmark Adipozyten Differenzierung
Summary
Hier präsentieren wir Ihnen eine zuverlässige und einfache zweidimensionale (2D) Coculture-System für das Studium der Interaktion zwischen Tumorzellen und Knochenmark Adipozyten, die eine doppelte Wirkung von Melanom Zelle abgeleitet Faktoren auf das Knochenmark Adipozyten enthüllt Differenzierung und stellt auch eine klassische Methode für die mechanistischen Studie von Knochenmetastasen.
Abstract
Das Übersprechen zwischen dem Knochenmark Adipozyten und Tumorzellen kann eine entscheidende Rolle im Prozess der Knochenmetastasen. Eine Vielzahl von Methoden stehen zur Verfügung für das bedeutende Übersprechen zu studieren; ein zweidimensionales Transwell-System für die Coculture bleibt jedoch ein Klassiker, zuverlässig, und einfache Möglichkeit für diese Studie Übersprechen. Hier präsentieren wir Ihnen ein detailliertes Protokoll, das die Coculture von Knochenmark Adipozyten und Melanomzellen zeigt. Dennoch könnte ein solches Coculture System nicht nur einen Beitrag zur Erforschung der Zelle Signal Transductions von Krebszellen durch Knochenmark Adipozyten induziert, sondern auch in die Zukunft mechanistischen Studie von Knochenmetastasen die neue therapeutische Zielstrukturen für Knochen zeigen kann Metastasierung.
Introduction
Knochenmetastasen sind weit verbreitet bei fortgeschrittenem Krebs-Patienten, aber eine kurative Behandlung ist noch nicht verfügbar. Darüber hinaus spezialisiert auf Energie als Fett zu speichern, unterstützen Adipozyten Tumorwachstum und Metastasierung im Knochenmark und anderen Organen1,2,3,4,5,6. Darüber hinaus spielen Adipozyten eine wesentliche Rolle bei der Regulierung der Krebs Zelle Biologie7,8,9,10 und Stoffwechsel4,11,12 ,13,14,15,16, so gut wie in Knochen Metastasen1,4,12. In der Nische des Knochenmarks können Adipozyten auch Auswirkungen auf das biologische Verhalten von Krebs Zellen4,6,17. Das Zusammenspiel von Knochenmark Adipozyten und Krebszellen mit Osteotropism ist bedeutsam für das Verständnis von Knochenmetastasen. Jedoch ist wenig bekannt.
Basierend auf aktuellen Studien, werden verschiedene Methoden auf Adipozyten, einschließlich zwei- oder dreidimensionale (2/3D) und ex-Vivo Kulturen17,18,19,20,21angewendet. Vor kurzem, Herroon Et Al. entwickelt ein neues 3D-Kultur-Konzept für Interaktionen von Knochenmark Adipozyten mit Krebs Zellen22zu untersuchen. Obwohl die 3D Coculture ist optimal für die Nachahmung physiologischen Wechselwirkungen zwischen Adipozyten und Krebs-Zellen in Vivo, es leidet unter schlechten Reproduzierbarkeit22,23. Im Vergleich zu einem 2D Coculture System kann ein 3D Coculture System verschiedene zelluläre Phänotypen, wie Zelle Morphologie21,22,24,25,26vorsehen. Darüber hinaus kann die ex-Vivo -Kultur der isolierten Spongiosa gewebefragmente zu einer robusten Auswuchs der Adipozyten aus kultivierten Knochenmark Zellen17führen.
Im Gegensatz zu diesen früheren Modellen bleibt jedoch das 2D zellenmodell Kultur eine klassisch, zuverlässige und einfache Technik für schnell scannen Kandidat Moleküle und die Phänotypen verändert in Adipozyten oder Krebs in Vitro1Zellen, 4,6,12,15,27. Um das Übersprechen zwischen dem Knochenmark Adipozyten und Melanomzellen besser verstehen zu können, bieten wir ein detailliertes Protokoll für ein 2D Coculture Knochenmark Adipozyten mit Melanomzellen.
Protocol
Representative Results
Discussion
Kokulturen mit Einsätzen wurden weithin zur Zell-Zell-Interaktionen zu untersuchen. Das 2D Coculture System ist eine effektive Möglichkeit zu beobachten, wie die beiden Teile durch die zeigten wir hier zwei verschiedene Krebs Zelle-angetrieben Auswirkungen auf Knochenmark Adipozyten, Übersprechen in Vitro. Viele Labore haben diese Methode, um das Übersprechen zwischen Adipozyten und Krebs Zellen6,12,27,<s…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Wir danken Dov Zipori (Weizmann Institute of Science, Rehovot, Israel) freundlicherweise für das Bereitstellen der murinen Knochenmark Stromazellen Zelle Linie 14F1.1. Diese Studie wurde unterstützt durch Zuschüsse von der chinesischen National Natural Science Foundation (Nr. 81771729) und der Tropical Hospital von Chongqing Medical University (Nos. YJQN201330; YJZQN201527).
Materials
| DMEM | Invitrogen Inc. | 11965092 | |
| Fetal Bovine Serum | Invitrogen Inc. | 16000–044 | |
| Phosphate Buffered Saline | Invitrogen Inc. | 14190-144 | |
| Insulin | Sigma-Aldrich | 91077C | |
| 3-isobutyl-1-methyl-xanthine | Sigma-Aldrich | I5879 | |
| Dexamethasone | Sigma-Aldrich | D4902 | |
| Oil Red o | Sigma-Aldrich | O0625 | |
| 24-well plate | Corning | CLS3527 | |
| Transwell insert | Millipore | MCHT24H48 | |
| Penicillin/Streptomycin | Invitrogen | 15140-122 | |
| isopropanol | Sigma-Aldrich | I9516 | |
| 0.25% trypsin | Thermo Scientific | 25200056 | |
| hemocytometer | Bio-Rad | 1450016 | |
| Culture incubator | Thermo Scientific | ||
| 50ml falcon | Corning | CLS430828 | |
| Clean Bench | Thermo Scientific | – | |
| Microscopy | Olympus | – | |
| 200 μL pipet tips | BeyoGold | FTIP620 | |
| 1000 mL pipet tips | BeyoGold | FTIP628 |
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