Pilocarpine 자극 다음 통해 murine 침 기능 평가 분류 한 방사선
Summary
선물이 murine tracheostomy 등 3 개의 주요 침 샘의 침 컬렉션을 수행 하는 자세한 접근.
Abstract
Hyposalivation는 Sjögren의 증후군 또는 주요 침 샘을 다음 방사선 상해의 면역 반응에서 일반적으로 관찰 된다. 이러한 경우에 질문은 질병 병 인 및 효과적인 개입에 관한 남아 있다. 침 샘의 기능 평가 허용 하는 최적화 기법 조사 전 선 생물학, 부전, 및 치료제에 대 한 소중한 있다. 여기, 우리가 pilocarpine 수행 하는 단계 접근 방식을 제시 tracheostomy 등 세 가지 주요 murine 침 샘의 해 부, 타 액 분 비를 자극. 우리는 또한 적절 한 murine 머리와 목 해부학이이 기술 중 액세스를 선발. 이 방식은 확장성, 따라서 작업 흐름의 효율성을 향상 시키는 여러 마우스를 동시에 처리 될 수 있도록 합니다. 우리는 각각의 추가 필드 내에서 응용 프로그램은이 방법의 재현성을 향상을 목표로. 타 액 컬렉션, 이외에 우리는 메트릭을 측정 하 고이 조직의 기능 능력을 정상화 논의. 대표적인 데이터 분류 한 방사선 (6.85 Gy의 4 복용량) 다음 2 주 우울된 침 샘 기능 submandibular 동맥에서 포함 되어 있습니다.
Introduction
침 샘 장애 증후군 dysregulated 또는 장애인된 분 비 과잉 (sialorrhea) 또는 타 액1의 이용률 (xerostomia 및 hyposalivation)를 선도 포함 됩니다. 두 경우 모두에서 치료 개발2의 최종 목표를 향해 침 샘 생물학의 우리의 이해를 향상에 관심이 있다.
침 샘 매우 radiosensitive 기관, 그리고 종종 머리와 목 암 방사선 치료, 영구적인 구강 건조 증 (xerostomia)3,4로 이어지는 동안 손상 된. 그러나 달리 다른 radiosensitive 조직,, 침 샘 이직 률 상대적으로 낮은 이며 분 비 손실의 메커니즘은 불완전 하 게 이해5,6. 이 독특한 부상 설정에서 조직 재생과 radioprotection 전략 침 기능 평가 요구 한다. 실험적으로, murine 침 컬렉션은 방사선을 치료제 선 응답을 평가에 특히 유용한 도구입니다.
여기, 우리가 수행 및 pilocarpine, 강력한 muscarinic 주 작동 근7를 사용 하 여 자극된 타 액 분 비를 측정 하는 방법 제시. Pilocarpine 동맥 분 비8,9를 유도 하는 자율 신 경계를 자극. 이 테스트를 적절 하 게 완료 한 tracheostomy는 마우스는 절차를 통해 특허 기도 유지 하 고 질 식와 구강10에서 풀링된 분 비에서 소망의 위험을 줄이기 위해 필요 합니다.
이것은 3 개의 주요 침 샘의 제거에 culminating 터미널 절차: 귀 밑 (PG), submandibular (서울시), 그리고 삶의 (SLG). 기능 연구에 대 한 선 무게 기록 됩니다 하 고 타 액 측정11,,1213정상화에 자주 사용 됩니다. 이 데이터는 어떤 점에서 선 위축 예상된 결과14,15 는 방사선 연구에서 특히 중요 하다
어떻게 자극된 타 액 분 비에 관하여 문학에 있는 가변성 수행 되 고16보고 있다. 예를 들어 문학 범위 적어도 3 개의 크기 순서17,18,19,20,,2122,23내 pilocarpine 복용량. 여기, 메서드 실행, 뿐만 아니라 기술 (tracheostomy, 타 액, 수집과 동맥 해 부)으로 적응 될 수 있는 모듈형 플랫폼을 제공 하는 향상 된 재현성의 목적으로 최적화 된 높은 복용량 pilocarpine 프로토콜 선물이 필요합니다.
프로토콜 데모, 뿐만 아니라 우리는 서울시 지역에 분류 한 방사선 (6.85 Gy의 4 복용량) 다음 2 주에 타 액 흐름의 대표 기능 데이터를 포함 합니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
우리 동맥 상해 및 치료제 연구에 적용 될 수 있는 침 샘 기능을 평가 하기 위해 다단계 방법 제시. 우리의 절차 tracheostomy, 타 액, 수집과 동맥 해 부, 각각의 침 샘 생물학의 통합된 연구를 지원할 수 있는 실험적인 응용 프로그램은 포함 한다. 예를 들어 murine tracheostomy 구강 방해 절차 동안 일반 기도 관리를 위해 사용 되었습니다.
Pilocarpine에 필요한 적절 한 해 부 및 tracheal 절 …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 간행물에 보고 된 연구는 국립 연구소의 치과 Craniofacial 연구 (NIDCR)와 보너스 번호 R56 DE025098, UG3 DE027695, 및 CA206296 F30 국립 보건원의 국립 암 연구소 (NCI)에 의해 지원 되었다. 내용은 전적으로 저자의 책임 이며 반드시 국립 보건원의 공식 의견을 대표 하지 않는다. 이 작품 또한 NSF DMR 1206219와 IADR 혁신 구강 케어 상 (2016)에 의해 지원 되었다.
우리는 박사에 리 마루야마와 앤드류 Hollomon 타 액 컬렉션과 함께 그들의 도움에 감사 하 고 싶습니다. 우리는 동맥 해 부와 그의 지원에 대 한 페이 Lun Weng 감사 하 고 싶습니다. 우리는 매튜 잉 그림 준비에 그의 원조에 대 한 감사 하 고 싶습니다. 우리는이 논문의 중요 한 읽기 박사 Elaine Smolock, 에밀리 우 감사 하 고 싶습니다.
Materials
| Pilocarpine hydrochloride | Sigma Aldrich | P6503 | Pilocarpine |
| Student Vannas Spring Scissors | Fine Science Tools | 91500-9 | Spring Scissors for Tracheostomy |
| Sterile Saline Solution | Medline | RDI30296H | Saline |
| Dumont #7 Forceps | Fine Science Tools | 11274-20 | Curved Forceps |
| Dumont #5 Forceps | Fine Science Tools | 11251-10 | Straight Forceps |
| Standard Pattern Forceps | Fine Science Tools | 11000-12 | Blunt Forceps |
| Fine Scissors- Tungsten Carbide | Fine Science Tools | 14568-09 | Dissection Scissors |
| Microhematocrit Heparinized Capillary Tubes | Fisher Scientific | 22362566 | Capillary tubes |
| Lubricant Eye Ointment | Refresh | N/A | Refresh Lacri-Lube |
| Goat polyclonal anti-Nkcc1 | Santa Cruz Biotech | SC-21545 | Nkcc1 Antibody |
| DAPI (4',6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride) | Thermo Fisher Scientific | D1306 | DAPI |
| GraphPad Prism | GraphPad | ver6.0 | Statistical Software |
| Cotton tipped applicator | Medline | MDS202000 | Applicator for eye ointment |
| 0.5cc Insulin Syringe, 29G x 1/2" | BD | 7629 | Syringe for intraperitoneal injection |
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