Le ferite croniche sono sviluppate da ferite acute su un modello di topo diabetico inducendo alti livelli di stress ossidativo dopo una ferita cutanea a tutto spessore. La ferita viene trattata con inibitori per catalasi e glutathione peroxidasi, con conseguente alterazione della guarigione e sviluppo di biofilm da parte di batteri presenti nel microbioma cutaneo.
È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo metodologico
Protocollo per creare ferite croniche nei topi diabetici
In questo articolo
Sommario
Abstract
Le ferite croniche si sviluppano a seguito di una regolazione difettosa in uno o più processi cellulari e molecolari complessi coinvolti in una corretta guarigione. Hanno un impatto sulle persone di 6,5 milioni di dollari e costano 40 miliardi di dollari all'anno solo negli Stati Uniti. Anche se è stato investito uno sforzo significativo per capire come si sviluppano le ferite croniche negli esseri umani, le domande fondamentali rimangono senza risposta. Recentemente, abbiamo sviluppato un nuovo modello murino per le ferite croniche diabetiche che hanno molte caratteristiche delle ferite croniche umane. Utilizzando topi db/db-/-, possiamo generare ferite croniche inducendo alti livelli di stress ossidativo (OS) nel tessuto della ferita immediatamente dopo la ferita, utilizzando un trattamento una tantum con inibitori specifici per gli enzimi antiossidanti catalasi e perossidasi glutathione. Queste ferite hanno alti livelli di OS, sviluppano biofilm naturalmente, diventano completamente croniche entro 20 giorni dal trattamento e possono rimanere aperte per più di 60 giorni. Questo nuovo modello ha molte caratteristiche delle ferite croniche diabetiche negli esseri umani e quindi può contribuire in modo significativo ad far progredire la comprensione fondamentale di come le ferite diventano croniche. Questo è un importante passo avanti perché le ferite croniche negli esseri umani causano dolore significativo e angoscia ai pazienti e provocano l'amputazione se irrisolto. Inoltre, queste ferite sono molto costose e dispendiose in termini di tempo per il trattamento e portano a una significativa perdita di reddito personale per i pazienti. I progressi in questo campo di studio attraverso l'uso del nostro modello di ferita cronica possono migliorare significativamente l'assistenza sanitaria per milioni di persone che soffrono in questa condizione debilitante. In questo protocollo, descriviamo in dettaglio la procedura per far sì che le ferite acute diventino croniche, cosa che non è mai stata fatta prima.
Introduzione
La guarigione delle ferite comporta complessi processi cellulari e molecolari regolati temporalmente e spazialmente, organizzati in fasi sequenziali e sovrapposte che coinvolgono molti tipi di cellule diverse, tra cui, ma non solo, alla risposta immunitaria e alla vascolare sistema1. Immediatamente dopo che la pelle subisce una lesione, fattori e cellule del sangue si aggregano al sito della ferita e avviano la cascata di coagulazione per formare un coagulo. Dopo l'omeostasi raggiunta, i vasi sanguigni si dilatano per far entrare nel sito della ferita ossigeno, sostanze nutritiche, enzimi, anticorpi e fattori chemiotattici che chemoattrale poli....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Protocollo
Tutti gli esperimenti sono stati completati in conformità e il rispetto delle normative federali e la politica e le procedure dell'Università della California sono state approvate dall'Università della California, Riverside IACUC.
1. Animale
- Utilizzare diabetico e obesi B6. BKS(D)-Mouse Leprdb/J per il modello di ferita cronica. Le opzioni di acquisto includono eterozigoti per l'allevamento o omozigoti direttamente per esperimenti.
- Alleva maschi e donne eterozigoti per produrre prole. Solo un quarto dei rifiuti abbandonati, statisticamente, crescerà fino a diventare diabetico e obeso (db/db
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Risultati
La figura 5 illustra un esempio di una ferita senza trattamento degli inibitori che progrediscono verso la chiusura della ferita e una ferita con trattamento degli inibitori che progrediscono verso la cronicità. La medicazione trasparente è stata lasciata in posizione sulla ferita cronica in modo da poter vedere il biofilm e l'accumulo di liquidi.
L'avvio cronico della ferita avviene in meno di 6 or.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Discussione
Una volta che le ferite croniche vengono create sui topi, il modello può essere utilizzato per studiare i processi di guarigione delle ferite alterate coinvolti nell'avvio della cronicità. Il modello può anche essere utilizzato per testare l'efficacia di una vasta gamma di sostanze chimiche e farmaci che possono invertire lo sviluppo cronico delle ferite e la guarigione compromessa e portare alla chiusura e alla guarigione delle ferite. È possibile studiare diversi punti temporali dopo l'inizio della cronicità: ad es.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Dichiarazioni
Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti.
Ringraziamenti
Gli autori non hanno riconoscimenti.
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| B6. BKS(D)-Leprdb/J | Il Laboratorio Jackson | 00697 | Omozigoti ed eterozigoti disponibili |
| Nair Lozione Depilante con Aloe Lenitiva e Lanolina | Nair | un depilatorio chimico | |
| Buprenex (buprenorfina HCl) | Henry Stein Animal Health | 059122 | 0,3 mg/ml, Classe 3 |
| 3-Ammino-1,2,4-triazolo (ATZ) | TCI | A0432 | |
| Acido mercaptosuccinico (MSA) | Aldrich | 88460 | |
| Soluzione tampone fosfato (PBS) | autoclave sterile | ||
| serbatoio | |||
| deve essere compatibile con il sistema di vaporizzazione | |||
| Associati | |||
| Tagliacapelli Wahl Wahl | Lithium Ion Pro | ||
| Acu Punch 7mm punzoni per biopsia cutanea | Acuderm Inc. | P750 | |
| Tegaderm | Rif. 3M | : 1624W | Medicazione in pellicola trasparente (6 cm x 7 cm) |
| Pad riscaldante | Conair | Moist Dry Heating Pad | |
| Siringhe per insulina | BD | 329461 | 0,35 mm (28G) x 12,7 mm (1/2") |
| 70% etanolo | |||
| Pinzette Kimwipes | |||
| Forbici | chirurgiche affilate | ||
| Sottile spatola | |||
| Tubi | |||
| Mouse cono di | |||
| Guanti | |||
| piccoli contenitori |
Riferimenti
- Singer, A. J., Clark, R. A. F. Cutaneous wound healing. New England Journal of Medicine. 341 (10), 738-746 (1999).
- Nouvong, A., Ambrus, A. M., Zhang, E. R., Hultman, L., Coller, H. A. Reactive oxygen species and bacterial biofilms in diabetic wound healing. Physiological Genomics....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Ristampe e permessi
