Modèle murin Aspiration oropharyngée de pneumonie bactérienne associée à et nosocomiales

Summary

La pneumonie infectieuse est parmi les infections les plus courantes chez l’homme. Un modèle approprié en vivo est essentiel pour comprendre la pathogenèse de la maladie et de tester l’efficacité de nouveaux médicaments. Avec ce modèle de pneumonie murine aspiration oropharyngée, on peut examiner la pathogénie et nouveaux traitements contre ces infections mortelles.

Abstract

Modèles murins d’infection sont essentielles pour comprendre la pathogenèse de la maladie et de tester l’efficacité de nouveaux médicaments visant à lutter contre les agents pathogènes causatifs. Pneumonies infectieuses est parmi les infections les plus communes présentées par les patients à la clinique et garantit ainsi un modèle approprié en vivo . Les modèles de pneumonie typique utilisent l’inoculation intranasale, qui dépose des organismes excessives en dehors du poumon, provoquant des complications hors cible et symptômes, tels que la sinusite, gastrite, entérite, traumatismes physiques ou au moyen de microparticules brumisation pour imiter les aérosols diffusion plus typique d’une pneumonie virale, tuberculeuse ou fongique. Ces modèles ne reflètent pas exactement la pathogenèse de la pneumonie bactérienne typique ou soins de santé-extra-hospitalière. En revanche, ce modèle murin de pneumonie par aspiration oropharyngée imite l’itinéraire de gouttelettes en pneumonie soins de santé. Inoculant 50 µL de la bactérie suspension dans l’oropharynx de souris anesthésiés entraîne l’aspiration réflexive, qui se traduit par une pneumonie. Avec ce modèle, on peut examiner la pathogenèse des pathogènes qui causent la pneumonie et de nouveaux traitements pour lutter contre ces maladies.

Introduction

Infection des voies respiratoire inférieures est des maladies transmissibles au plus meurtrier du monde et la cause la plus fréquente de décès dans les pays en développement¹. Globalement, ces infections représentent plus de 3,2 millions de décès¹. En outre, la pneumonie nosocomiale est parmi les formes les plus courantes et les plus meurtrières des soins de santé infections contractées et est causée par des agents pathogènes plus résistantes aux antibiotiques^2,3. Le parcours typique d’acquisition de la pneumonie bactérienne pour les deux extra-hospitalière et pneumonie nosocomiale est l’aspiration oropharyngée contenu dans les alvéoles. Les modèles murins utilisés pour étudier ces maladies souvent utilisent inoculation intranasale⁴, déposer une grande partie des bactéries à l’extérieur du poumon, provoquant des complications hors cible et symptômes tels que la sinusite et les traumatismes physiques, qui sont incompatibles avec la maladie progression dans l’homme que les modèles ont été conçus pour émuler. Autres modèles peuvent utiliser des chambres d’inhalation et dispositifs de micromisting, qui avec plus de précision miment les pneumonies virales, fongiques et tuberculeuses, mais récapituler pas avec précision la voie normale d’acquisition pour les pneumonies bactériennes typiques.

Le modèle de pneumonie murine aspiration oropharyngée peut être utilisé pour simuler la voie naturelle et la pathogenèse de la pneumonie bactérienne. Par inoculation 50 µL de la suspension bactérienne dans l’oropharynx de souris anesthésiés à l’aide d’une pipette, aspiration réflexive s’ensuit, qui se traduit par une pneumonie infectieuse. En utilisant ce modèle, on peut examiner la pathogenèse des pathogènes qui causent la pneumonie et de nouveaux traitements pour lutter contre ces maladies avec un modèle de fidélité plus élevé, plus analogue aux infections de pneumonie d’aspiration observées chez l’homme. En outre, à la différence des modèles similaires qui infectent par l’intermédiaire de la cavité buccale^5,6, ce modèle garantit que l’inoculum complet atteint les poumons au lieu de l’intestin, où il peut causer une inflammation hors site et infections, telles que la gastrite et l’entérite. Enfin, contrairement à un autre modèle publié qui nécessite un laryngoscope et inocule à travers la trachée⁷, ce modèle n’obstrue pas les voies respiratoires avec une aiguille de gavage et ne nécessite pas d’injection pour la livraison de l’inoculum. Au lieu de cela, l’inoculation s’appuie sur le réflexe d’aspiration naturelle de la souris.

Protocol

Toutes les procédures impliquant des animaux doivent être approuvés par le chercheur animalier institutionnel et utilisation Comité (IACUC). 1. préparation de l’Inoculum bactérien Isoler les colonies bactériennes. Ensemencer une souche bactérienne (par exemple, a. baumannii « HUMC1 ») sur un milieu approprié agar stérile (p. ex., la gélose trypticase soja), en veillant à ne générer des colonies isolées. Incuber à des…

Representative Results

En suivant scrupuleusement le protocole, reproductibles et fiable de données peuvent être facilement obtenues. Il est essentiel de se conformer strictement au protocole de préparation inoculum sur mesure pour des expériences à comparer à un autre. Il est également important gérer correctement les souris au cours de la procédure de l’infection. N’oubliez pas de placer la souris dans une chambre d’anesthésie dépourvu isoflurane. Souris vont paniquer si elles sont placées d…

Discussion

Pour être sûr, souris ne sont pas les humains miniatures. Résultats obtenus à partir des modèles de souris doivent être pris en considération dans le contexte et interprétés par la suite pour l’applicabilité aux humains, basée sur les différences et les similitudes entre les deux espèces de⁶. Il est également important de choisir la souche de souris approprié comme certains sont plus sensibles à certaines infections que d’autres ; Il en va de même pour la souche pathogène de…

Materials

Agar	BD	214530	Combine with TSB to make TSA
Beads, Borosilicate Glass	Kimble	135003	Sterilize by baking or autoclaving before each use
Beaker, 250 mL	Pyrex	1003	Used during precise aliquoting of concentrated bacterial inocula
Centrifuge	Sorvall	ST 40R	Capable of 4,000×g at 4°C
Chamber for Anesthesia	Kent Scientific Corporation	VetFlo-0720	Accommodates up to 5 mice
Cryomold, Intermediate Size	Sakura Tissue-Tek	4566	Disposable vinyl specimen molds, 15×15×5 mm
Dental Floss	Oral-B	37000469537	Tie to stable post approx. 6" above table height
Forceps	VWR	82027-440	Used to gently pull tongue out of mouse's mouth
Homogenizer for Lung Tissue	Omni International	TM125-115	Autoclave before first use; rinse between samples
Isoflurane for Anesthesia	Abbott	10015516	Alternative drug can be used; modify procedure accordingly
iSTAT Cartridge	Abbott	03P79-25	Various cartridges are available to suit your needs
Ketamine, 100 mg/mL	Western Medical Supply	4165	Dilute 1:10 in PBS to 1 mg/mL and combine with Xylazine at 1 mg/mL
Ointment for Eyes	Akorn	Tears Renewed	Avoid touching eye with tip of dispenser
Optimal Cutting Temperature (O.C.T.) Compound	Fisher Scientific	23-730-571	Used to freeze lung samples at -80 °C to prepare for pathology sectioning
Petri Dish	VWR	25384-302	Polystyrene, disposable, sterilized, 100×15 mm
Phosphate-Buffered Saline (PBS)	Corning	21-031-CM	Dulbecco's PBS without calcium and magnesium
Pipette Tips, 200-μL	VWR	10017-044	Autoclave before use
Pipetter, 200-μL	Gilson	Pipetman P200	Autoclave and calibrate before use
Spreader, Bacterial Cell	Bel-Art	F377360006	Sterilize by baking or autoclaving before each use
Stir Bar, Magnetic, 7.9 mm Diameter × 38.1 mm Length	VWR	58948-150	Used for stiring concentrated bacterial inocula during aliquoting
Stir Plate, Magnetic	Corning	PC-620D	Used for stiring concentrated bacterial inocula during aliquoting
Tryptic Soy Broth (TSB)	BD	211822	Combine with Agar to make TSA
Vial, Conical, Sterile, 50 mL	Corning	431720	Used for preparing bacterial inocula
Vial, Conical, Sterile, 500 mL	Corning	431123	Used to concentrate inocula for preparing frozen inocula
Vial, Cryogenic, 2.0 mL	Corning	430659	Used for cryogenic storage of concentrated bacterial inocula
Xylazine, 20 mg/mL	Akorn	AnaSed Injection	Dilute 1:20 in PBS to 1 mg/mL and combine with Ketamine at 1 mg/mL