Questo protocollo descrive la registrazione dei potenziali di campo locale con Multi-Tibia punte in silicio lineare. Conversione dei segnali mediante analisi di densità di corrente sorgente consente la ricostruzione dell'attività elettrica locale nell'ippocampo del mouse. Con questa tecnica, le oscillazioni nello spazio limitato del cervello possono essere studiate in topi liberi di muoversi.
È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo metodologico
Registrazione spazialmente limitate oscillazioni nell'ippocampo dei topi di comportarsi
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il potenziale di campo locale (LFP) emerge dai movimenti di ioni attraverso le membrane neurali. Poiché la tensione registrata dagli elettrodi LFP riflette il campo elettrico sommato di un grande volume di tessuto cerebrale, l'estrazione di informazioni sulle attività locali è impegnativo. Studiare un neurone microcircuiti, tuttavia, richiede una distinzione certa tra eventi veramente locali e volume-condotto segnali provenienti da zone lontane del cervello. Analisi di densità (CSD) di origine corrente offre una soluzione per questo problema fornendo informazioni sulle origini in prossimità degli elettrodi e i sink corrente. Nelle aree del cervello con laminare cytoarchitecture quale l'ippocampo, CSD unidimensionale può essere ottenuto calcolando la derivata seconda spaziale della LFP. Qui, descriviamo un metodo per registrare multilaminare LFPs usando le sonde lineari silicio impiantati nell'ippocampo dorsale. CSD tracce vengono calcolate lungo singoli steli della sonda. Questo protocollo descrive così una procedura per risolvere oscillazioni spazialmente limitata rete neuronale nell'ippocampo dei topi liberi di muoversi.
Introduzione
Oscillazioni in LFP sono criticamente coinvolti nell'elaborazione di circuiti neuronali dell'informazione. Essi coprono un ampio spettro di frequenze, che vanno da onde lente (~ 1 Hz) a ripple veloce oscillazioni (~ 200 Hz)1. Bande di frequenza distinte sono associati con funzioni cognitive tra cui memoria, elaborazione emotiva e navigazione2,3,4,5,6,7. Flusso di corrente attraverso le membrane neuronali costituisce la più grande parte del segnale L....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Protocollo
Tutti i metodi che coinvolgono animali viventi sono stati approvati dal Friburgo Regierungspräsidium secondo il tedesco Animal Welfare Act.
1. preparati
- Progettare e costruire lo strumento di inserimento appropriato transitoriamente portando la sonda di silicio e il connettore elettrodo durante il processo dell'impianto. Vedere la Figura 1 per un utensile costruito di esempio personalizzato.
- Rilasciare con attenzione il connettore sonda e l'elettrodo di silicio dalla confezione usando il forcipe con punta in ceramica.
- Sollevare la scheda connettore e fissare saldamente con una pinz....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Risultati
La figura 1 illustra l'utensile utilizzato per l'impianto di silicio. Registrazioni dal silicio cronicamente impiantato sonde come target l'area CA1 e lo strato delle cellule del granello di circonvoluzione dentata sono mostrati nella Figura 2. Abbiamo registrato LFPs dalla tibia sonda durante la libera circolazione nella homecage. Per minimizzare l'effetto della conduzione di volume, i segnali ottenuti sono stati convertiti alla.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Discussione
Crescenti evidenze indicano che le oscillazioni del cervello in circuiti neuronali ippocampali si presentano in domini spaziali discreti10,11,16. Analisi CSD riduce drasticamente l'influenza della conduzione di volume, un presupposto fondamentale per lo studio degli eventi di oscillazione locale. Con questo video, forniamo una guida per impiantare punte in silicio nell'ippocampo del mouse per l'analisi dei dati CSD. Vi mostriamo.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Ringraziamenti
Siamo grati a Karin Winterhalter e Kerstin Semmler per assistenza tecnica. Questo lavoro è stato supportato dal cluster di eccellenza BrainLinks - BrainTools (EXC 1086) della Fondazione di ricerca tedesca.
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Morsetto a coccodrillo con supporto | Reichelt Elektronik | HALTER ZD-10D | |
| Sonda in silicone | Cambridge Neurotech | serie P 32 | |
| Stereoscopio | Olympus | SZ51 | |
| Filo di rame isolato con vernice | Bü rklin Elektronik | 89 F 232 | |
| Viti di messa a terra | Viti & GmbH (screwsandmore.de) | DIN 84 A2 M1x2 | |
| Flux Stannol | 114018 | ||
| Pinze con punta in ceramica | Fine Science Tools | 11210-60 | |
| Cera paraffina | Sigma-Aldrich | 327204 | |
| Cauterizzatore | Fine Science Tools | 18010-00 | |
| Saldatore | Kurtz Ersa | OIC1300 | |
| Multimetro | Uni-T | UT61C | |
| Etanolo | Carl Roth | 9065.1 | |
| Pipette Pasteur | Carl Roth | EA65.1 | |
| Sterilizzatore a caldo | Fine Science Tools | 18000-45 | |
| Telaio stereotassico | David Kopf | Modello 1900 | |
| Portaelettrodo stereotassico | David Kopf | Modello 1900 | |
| Isoflurano | Abbvie | B506 | |
| Concentratore di ossigeno | Respironix | 1020007 | |
| Buprenorfina | Indivior UK Limited | ||
| Rasoio elettrico | Tondeo | Eco-XS | |
| Termoforo | Thermolux | 463265/-67 | |
| Morsetti chirurgici | Fine Science Tools | 18050-28 | |
| Perossido di idrogeno | Sigma-Aldrich | H1009 | |
| Salviette di cotone sterili | Carl Roth | EH12.1 | |
| Drill | Proxxon | Micromot 230/E | |
| 21G ago per iniezione | B. Braun | 4657527 | |
| Soluzione salina tampone fosfato/soluzione salina | |||
| Atlante stereotassico | Elsevier | 9.78012E+12 | |
| Forbici chirurgiche | Strumenti per le scienze fini | 14094-11 | |
| Pinze chirurgiche Strumenti per | le scienze fini | 11272-40 | |
| Aghi per iniezione 27G | B. Braun | 4657705 | |
| Vaselina | |||
| Cemento dentale | Sun Medical | SuperBond T& M | |
| Carprofen | Zoetis | Rimadyl 50mg/ml | |
| Amplificatore di registrazione | Intan Technologies | C3323 | |
| Scheda di acquisizione USB | Intan Technologies | C3004 | |
| Cavi di registrazione | Intan Technologies | C3216 | |
| Commutatore elettrico | Lenti doriche | HRJ-OE_FC_12_HARW | |
| Software di acquisizione | OpenEphys (www.open-ephys.org) | L'interfaccia grafica | consente l'acquisizione dei dati indipendente dalla piattaforma |
| Computer per l'acquisizione | |||
| Ambiente di analisi | Python (www.python.org) | consente l'analisi dei dati indipendente dalla piattaforma | |
| Uretano | Sigma-Aldrich | ||
| Vibratomo | Leica | VT1000 | |
| Vetrini per microscopio | Carl Roth | H868.1 | |
| Vetrini coprioggetti | Carl Roth | H878.2 | |
| Mezzo di inclusione | Sigma-Aldrich | 81381-50G | |
| Acqua distillata | Millipore | Milli Q | Macchina da tavolo per la produzione di acqua distillata |
| Tergazyme | Alconox | Tergazyme |
Riferimenti
- Buzsáki, G., Draguhn, A. Neuronal oscillations in cortical networks. Science. 304 (5679), 1926-1929 (2004).
- Keefe, J., Recce, M. L. Phase relationship between hippocampal place units and the EEG theta rhythm. Hippocampus. 3 (3), 317-330 (1993).
- Benchenane, K., et....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Ristampe e permessi
