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Articolo metodologico

Generazione di un modello di cancro al seno metastatico murino ortotopico ed eseguendo murino mastectomia radicale

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DOI:

10.3791/57849

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29 novembre 2018

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In questo articolo

Sommario

Vi presentiamo un modello murino ortotopico di cancro del seno e mastectomia radicale modello con tecnologia di bioluminescenza per quantificare il carico del tumore per simulare la progressione del cancro al seno umano.

Abstract

Modelli di topo in vivo per valutare la progressione del cancro al seno sono essenziali per la ricerca sul cancro, compresi gli sviluppi preclinici droga. Tuttavia, la maggior parte dei dettagli pratici e tecnici comunemente è omessi nei manoscritti pubblicati che, pertanto, rende difficili da riprodurre i modelli, in particolare quando si tratta di tecniche chirurgiche. Bioluminescenza tecnologia consente la valutazione delle piccole quantità di cellule tumorali anche quando un tumore non è palpabile. Utilizzando le cellule tumorali che esprimono luciferasi, stabiliamo una tecnica di inoculazione ortotopico cancro al seno con un tasso alto tumorigenesi. Metastasi del polmone è stato concluso utilizzando una tecnica di ex vivo . Abbiamo, quindi, stabilire un modello di mastectomia con un tasso basso di ricorrenza locale per valutare l'onere di tumore metastatico. Qui, descriviamo, in dettaglio, le tecniche chirurgiche di impianto ortotopico e mastectomia per cancro al seno con un tasso di tumorigenesi alta e bassa percentuale di recidiva locale, rispettivamente, per migliorare l'efficienza del modello di cancro al seno.

Introduzione

Modelli animali svolgono un ruolo chiave nella ricerca sul cancro. Quando un'ipotesi è dimostrata in vitro, devono essere testato in vivo per valutare la sua rilevanza clinica. Metastasi e progressione del cancro sono spesso meglio catturati dai modelli animali rispetto ai modelli in vitro, ed è essenziale per testare un nuovo farmaco in un modello animale come uno studio preclinico per droga sviluppo1,2. Tuttavia, i dettagli tecnici degli esperimenti sugli animali spesso non sono ben descritti in articoli pubblicati, che lo rende difficile da riprodurre con successo il modello. Infatti, gli autori che hanno s....

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Protocollo

Approvazione da parte del Comitato di uso e Roswell Park Cancer completa centro animale istituzionale Care è stata ottenuta per tutti gli esperimenti.

Nota: Nove a dodici settimane-vecchi topi BALB/c femminili sono ottenuti. 4T1-luc2 cellule, una linea di cellule di adenocarcinoma mammario di topo derivata da topi BALB/c è stata studiata per esprimere luciferasi, vengono utilizzate. Queste cellule sono coltivate in mezzo 1640 Roswell Park Memorial Institute (RPMI) con 10% siero bovino fetale (FBS).

1. preparazione degli strumenti

  1. Scongelare una miscela di proteina gelatinoso congelati (....

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Risultati

Lo scopo del modello ortotopico è quello di imitare la progressione del cancro umano (cioè, la crescita del tumore primario seguita da metastasi linfonodali e metastasi del polmone quindi distanti)15. Dopo l'inoculazione delle cellule di cancro, la bioluminescenza è quantificata regolarmente (due o tre volte / settimana) (Figura 1A). La bioluminescenza nei polmoni è più profondo e più piccolo della lesione primaria. La biolumi.......

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Discussione

Per l'ultimo decennio, abbiamo stabilito più modelli murini cancro, compresi seno cancro modelli3,7,13,16,20,21. Precedentemente, abbiamo dimostrato che inoculazione di orthotopic seno cancro delle cellule nel tessuto della ghiandola mammaria sotto visione diretta prodotto un tumore più grande con minore variabilità di dimens.......

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Ringraziamenti

Questo lavoro è stato supportato da grant NIH R01CA160688 e Susan G. Komen Foundation investigatore avviata ricerca grant (IIR12222224) ai topi K.T. bioluminescenza immagini sono state acquisite da risorsa condivisa traslazionale Imaging risorsa condivisa a Roswell Park Comprehensive Cancer Center, che è stato sostenuto dal cancro centro assistenza Grant (P30CA01656) e la strumentazione ha condiviso grant (S10OD016450).

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Forbici per micro dissezioneRobozRS-5983Per l'inoculazione di cellule tumorali e la masstectomia
PinzaAdson RobozRS-5233Per l'inoculazione di cellule tumorali e la masstectomia
Porta agoRobozRS-7830Per l'inoculazione e la masstectomia di cellule tumorali
MayoRobozRS-6873Per
suturedi seta ex vivo 5-0Look774BPer l'inoculazione e la masstectomia delle cellule tumorali
Sterilizzante a secco (Germinator 500)Braintree ScientificGER 5287-120VPer l'inoculazione delle cellule tumorali e la masstectomia
ClipperWahl9908-717Per l'inoculazione delle cellule tumorali e la masstectomia
MatrigelCorning354234Per l'inoculazione delle cellule tumorali
D-Luciferina, saledi potassioGOLD-BioLUCK-1KPer la quantificazione della bioluminescenza
Roswell Park Memorial Insitute 1640Gibco11875093Per colture cellulari
Fetale Bovino SerubGibco10437028Per colture cellulari
Tripsina-EDTA (0,25%)Gibco25200056Per colture cellulari

Riferimenti

  1. Rashid, O. M., Takabe, K. Animal models for exploring the pharmacokinetics of breast cancer therapies. Expert Opinion on Drug Metabolism & Toxicology. 11 (2), 221-230 (2015).
  2. Schuh, J. C. Trials, tribulations, and trends in tumor model....

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Ristampe e permessi

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