Vi præsenterer her, de ændringer, der er nødvendige til en vel karakteriseret og almindeligt anvendte små ferrichloridopløsning-induceret (FeCl3) halspulsåren skade dyremodel til brug i en stor animalsk vaskulære skade model. Den resulterende model kan udnyttes til prækliniske forsøg vurdering af både forebyggende og trombolytisk farmakologiske og mekaniske interventioner.
Okklusiv arteriel trombose fører til cerebral iskæmisk slagtilfælde og myokardieinfarkt bidrager til ~ 13 millioner dødsfald hvert år globalt. Her, har vi oversat vaskulære skade model fra en lille dyr i et stort dyr (hunde), med mindre ændringer, der kan bruges til præklinisk screening af profylaktisk og trombolytisk agenter. Udover de kirurgiske metoder beskriver den ændrede protokol de trinvise metoder til at vurdere halspulsåren kanalisering af angiografi, detaljerede instruktioner til at behandle både hjernen og halspulsåren for histologiske analyse at kontrollere carotis kanalisering og hjerneblødning og specifikke parametre til at gennemføre en vurdering af downstream thromboemboliske hændelser ved at udnytte magnetisk resonans imaging (MR). Derudover behandles bestemte proceduremæssige ændringer fra den tidligere veletableret lille dyr model nødvendigt at oversætte til en stor dyr (hunde) vaskulære skade.
Slagtilfælde terapi er i vid udstrækning modelleret efter koronararterie sygdom behandling, hovedsagelig fordi interventioner i hjerte-kar-sygdom har reageret godt på medicin terapi og endovaskulære indgreb1. Disse behandlinger, men oversat ikke korrekt til cerebral infarkt. Vanskeligheder med den nuværende slagtilfælde behandling er at den rekombinante væv plasminogen aktivator (rTPA) ikke kan vendes, og at administrationen indebærer en betydelig 6,4% risiko for hæmoragisk konvertering2,3, 4. den resulterende sygelighed og dødelighed begrænser dets anvendelse til en lille, ofte uopnåeligt vindue5. Også, restenose og okklusion opstår ofte efter indledende trombolyse, tilbageføre oprindelige neurologiske forbedring. I sammendrag er der en smal tidsmæssige vindue til at administrere rTPA, der udelukker det store flertal (~ 90%) af patienter, der lider iskæmisk cerebrovaskulær fornærmelser.
Rollen som intravenøs antitrombotiske behandling har vist lovende i behandling af iskæmisk slagtilfælde med forbedret fartøj recanalization, overlevelse og resultatet2. Desværre, disse stoffer har en forudsigelig bivirkning af intra kraniel og ekstra kraniel blødning, hovedsagelig fordi der er ingen måde at tilstrækkeligt vende eller styre deres aktivitet2. Mens effektiv i forebyggelsen af trombocytaggregation, risikoen for blødning og manglende evne til at vende deres aktivitet har udelukket anvendelsen heraf i rutinemæssige pleje af apopleksi patienter. Behov, findes derfor for potent antitrombotisk narkotika, der fungerer alene eller i kombinationer for at forhindre og lyse blodpropper endnu har en sikkerhedsprofil, der giver mulighed for brug i en lukket, lav volumen plads som hjernen, hvor blødning er dårligt tolereret.
Forstå mekanisme af arteriel trombose og re-stenose, og evaluering af trombolytika og stoffer, der forhindrer re-stenose, kræver både små og store dyr modeller som en del af prækliniske stof udvikling. Ferrichloridopløsning-induceret vaskulære skade er en bredt udnyttede teknik til hurtigt og præcist inducere dannelse af trombi i udsatte blodkar af mus, rotter, marsvin, og kaniner6,7,8, 9 , 10 , 11 , 12. disse mindre arter tilbyder flere fordele, herunder brugervenlighed genmanipulation, billig animalske køb og lav dagpenge boligudgifter. Desværre, små dyreforsøg negere flere blod trækker under operationen til adgang trombocyt reaktivitet, blod gas analyse og inflammatorisk respons. Endnu vigtigere, efterligne store dyr langt mere nøje menneskelige trombocyt fysiologi6,13. FeCl3 halspulsåren skade model har spillet en fremtrædende rolle i studiet af Patofysiologi af trombose, validering af roman anti-trombocyttal og antikoagulerende medicin og opdagelsen af potentielle Trombolytika6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12. forrige modeller i mus, rotter, marsvin, og kaniner har givet lethed og fleksibilitet for genmanipulation, men oversætbare prækliniske modeller er afgørende for patient dosering og toksikologiske studier af potentielle therapeutics6 ,13. Selv om flere modeller af trombotiske lidelser er blevet udviklet i mus, store dyremodeller for trombose, der gælder for den Perifer vaskulær sygdom, er slagtilfælde og myokardieinfarkt få og langt. De første trombose modeller i aber, hunde og svin fokuseret på stenose, anvendelsen af hemostats og senere cylindre til fartøjer, ofte resulterer i cykliske flow reduktioner14,15,16. I stedet for en okklusiv blodprop i stedet for i endothelial skader som ferrichloridopløsning model, blodprop i disse modeller resulterede i cykliske trombose, distal embolisering og vende tilbage til normal blodgennemstrømning. I sammenligning, er ferrichloridopløsning model ændret her i et stort dyr, resulterer i en okklusiv blodprop på skaden site og stabiliseret og verificeret af angiografi før trombolytisk behandling. Forudsat at investigator har rigelig midler for per diem og køb af hjørnetænder og passende kirurgisk ekspertise, vi detalje her en stor canine model af vaskulære skade at tillade laboratorier til at studere trombose udnytter kirurgisk, billedbehandling og histologiske teknikker.
FeCl3 induceret vaskulære skade model er almindeligt anvendt til at studere trombose i små dyr og er let at oversætte til et stort dyr, prækliniske model med et væld af fordele. Mindre ændringer at tilpasse protokollen til en canine tillade udnyttelse af begge magnetisk resonans at vurdere slagtilfælde og blødning mængder efter en farmakologisk intervention og angiografi til at vurdere fartøj kanalbygning før, under, og efter behandling. Andre trombotiske store dyremodeller har ikke studeret stabili…
The authors have nothing to disclose.
Vi vil gerne takke centeret for kognitive og adfærdsmæssige Brain Imaging ved The Ohio State University for deres finansielle og videnskabelig støtte til at udvikle og udføre canine magnetisk resonans.
1/8” umbilical tape | Jorgensen Laboratories Inc., | #J0025UA | for ferric chloride application |
4% paraformaldehyde in PBS | Alfa Aesar | AAJ61899AP | |
10% neutral buffered formalin | Richard-Allan Scientific | 5701 | |
2% 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC in PBS, pH 7.4) | Sigma Aldrich | T8877 | |
ADP/Collagen cartridges | Siemens Diagnostics | B417021A | |
4.5 ml 3.2% sodium citrate blood vacutainer | Becton Dickinson | BD 369714 | |
4.5 ml lithium heparin vacutainer | Becton Dickinson | BD 368056 | |
EDTA K3 vacutainers | Becton Dickinson | BD455036 | |
Doppler flow probe | Transonic Systems Inc | MA2.5PSL | |
Hematoxylin 560 | Surgipath | 3801570 | |
Eosin | Surgipath | 3801602 | |
LabChart Software | ADInstruments Inc. | ||
Prisma Fit 3 tesla (3T) magnet | Siemen's Diagnostics | ||
Sodium heparin for injection (to coat blood gas syringe) | NovaPlus | 402525D | |
HUG-U-VAC positioning system | DRE Veterinary | 1320 |