Здесь мы используем биолюминесцентных, рентген и позитрон выбросов/компьютерная томография томография изображений изучить как ингибирующих активность mTOR воздействия опухолей костного мозга-прижившимися миеломы в ксенотрансплантата модели. Это позволяет для анализа физиологически соответствующих, неинвазивная и смешанных эффекта анти миеломе терапии миеломы костный мозг прижившимися опухоли в естественных условиях.
Множественная миелома (мм) опухоли привито в костном мозге (БМ) и их выживание и прогрессирования зависят от сложных молекулярных и клеточных взаимодействий, которые существуют в рамках этой микроокружения. Тем не менее BM микроокружения не может быть легко реплицируемых в пробирке, что потенциально ограничивает физиологическая значимость многих экспериментальных моделях in vitro и ex vivo . Эти проблемы могут быть преодолены путем использования ксенотрансплантата модель, в которой Люцифераза (Люк)-transfected клеток 8226 мм будет специально привито в мыши скелета. Когда эти мыши даны соответствующие субстрата, D-люциферин, эффекты терапии опухолевого роста и выживания могут быть проанализированы путем измерения изменений в биолюминесцентных изображения (BLI) производимые опухоли в естественных условиях. Этот BLI данных в сочетании с позитронный выбросов томография/вычислительной томографии (ПЭТ/КТ) анализ с использованием метаболических маркер 2-deoxy – 2 – (18F) фтор D-глюкоза (18F-ФДГ) используется для мониторинга изменений в метаболизме опухоль со временем. Эти изображения платформы позволяют несколько неинвазивного измерения в пределах микроокружения опухоли/BM.
ММ является неизлечимой болезни состоит из плазмы злокачественное B-клетки, которые проникают BM и вызвать разрушение кости, анемии, почечной недостаточностью и инфекции. ММ составляет 10% – 15% всех гемобластозами1 и является наиболее часто рак привлечь скелет2. Разработка мм проистекает из онкогенных трансформации долгоживущих плазматические клетки, которые устанавливаются в зародышевых центров лимфоидных тканей прежде чем в конечном итоге самонаведения для БМ3. BM характеризуется весьма разнородных ниши; включая разнообразных и критических клеточных компонентов, регионы низкой Ро2 (гипоксии), обширные васкуляризации, сложных внеклеточной матрицы и цитокинов и фактор роста сети, все из которых способствуют мм tumorgenesis4. Таким образом развитие рассеянного мм гранулы ксенотрансплантата модель характеризуется опухолей, которые являются строго прижившимися, в BM бы очень мощный и клинически значимых инструмент для изучения мм патологии в vivo5,6. Однако многочисленные технические препятствия может ограничить эффективность большинства ксенотрансплантата моделей, что делает их дорогостоящим и трудным применять. Это включает в себя проблемы, связанные с последовательной и воспроизводимые опухоли приживления в нише, БМ, длительное время для развития опухоли и ограничения в возможность непосредственно наблюдать и измерять изменения роста/выживания опухоли без необходимости Пожертвуйте мышей в ходе эксперимента7,8.
Этот протокол использует изменение ксенотрансплантата модель, которая была первоначально разработана Миякава et al. 9, в котором внутривенно (IV) проблема с миеломой клетки приводит к «распространение» опухоли, которые последовательно и герметизации привито в БМ NOD/SCID/IL-2γ(null) (Нагель) мышах10. Визуализация на месте этих опухолей достигается стабильная трансфекции 8226 человека мм клеточной линии с люк аллелей и серийно измерения изменений в BLI производства эти прижившимися опухолевых клеток6. Важно отметить, что эта модель может быть расширена для использования различных других Люк выражая человеческие мм клеточных линий (например, U266 и OPM2) с аналогичные склонности специально привить в скелет NOG мышей. Выявление опухолей у биолюминесцентных Вообразимый мышей следуют измерения поглощения радиофармацевтические зонды (например 18F-ФДГ), ПЭТ/КТ вместе, это позволяет дополнительные характеристики важнейших биохимических пути (то есть, изменения в метаболизме, изменения в гипоксии и индукции апоптоза) в пределах микроокружения опухоли/BM. Основные преимущества этой модели можно выделить наличие широкого круга radiolabeled, биолюминесцентных и флуоресцентных зондов и маркеры, которые могут быть использованы для изучения мм прогрессии и патологии в естественных условиях.
Несмотря на разнообразие моделей доклинических ксенотрансплантата мм6,9,11,12,13возможность изучить взаимодействия опухоли/BM в BM микроокружения остается сложной 14. описанные здесь метод…
The authors have nothing to disclose.
Эта работа была поддержана ва ЗАСЛУГИ grant1I01BX001532 из Соединенных Штатов Америки Отдел ветеранов дел биомедицинских лабораторных исследований и развития службы (BLRDS) п.ф., и ЕС признает поддержки от ва клинические науки R & D службы ( Заслуживают награды I01CX001388) и реабилитации ва R & D службы (заслуга премии I01RX002604). Дальнейшая поддержка пришли из Грант Seed факультет UCLA в ж.к. Это содержание не обязательно отражают взгляды нас Департамент по делам ветеранов или правительства США.
8226 human myeloma cell line | ATCC | CCL-155 | |
NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ Mice (NOG) | Jackson Labs | 5557 | |
VivoGlo Luciferin substrate | Promega | P1041 | |
Hypoxyprobe-1Kit | HPL | HP1-100 | |
PE-CD45 (clone H130) | BD Biosciences | 555483 | Used for flow cytometry to identify human CD45+ tumor cells in BM exudate |
rabbit anti-human CD45 (clone D3F8Q) | Cell Signaling Technology | 70527 | Primary antibody used for Immunohistochemistry of excised bone |
Goat Anti-rabbit IgG (HRP conjugated) | ABCAM | ab205718 | Seconday antibody used for Immunohistochemistry of excised bone |
Dual-Luciferase Reporter Assay System | Promega | E1910 | |
pGL4.5 Luciferase Reporter Vector | Promega | E1310 | |
IVIS Lumina XRMS In Vivo Imaging System | Perkin Elmer | ||
Sofie G8 PET/CT Imaging System | Perkin Elmer |