Con 22 3 anticuerpos Anti-PD-L1 concentrarse en biopsia y muestras citológicas de pacientes con cáncer pulmonar de células no pequeñas
Summary
Para ampliar la capacidad de los laboratorios en todo el mundo para evaluar la elegibilidad de los pacientes con cáncer de pulmón para el tratamiento con pembrolizumab, de una manera confiable y reproducible, hemos desarrollado un análisis que utiliza el concentrado 22 3 anticuerpo ampliamente disponible immunohistochemical autostainer, para muestras de biopsia y citología.
Abstract
Pembrolizumab monoterapia ha sido aprobado para el tratamiento de primera y segunda línea de pacientes con PD-L1-expresando avanzado cáncer de pulmón de células no pequeñas (CPCNP). Pruebas para la expresión de PD-L1 con el ensayo diagnóstico PD-L1 immunohistochemistry (IHC) 22 3 acompañante, que da una proporción de tumor puntuación (TPS), ha sido validado en tejido tumoral. Hemos desarrollado una optimizado desarrollado por el laboratorio prueba (LDT) que utiliza el concentrado 22 3 anticuerpo (Ab) en un autostainer IHC ampliamente disponible para las muestras de biopsia y citología. El TPS PD-L1 fue evaluado con 120 secciones de pares todo tumor del tejido y las muestras de biopsia y con 70 emparejado muestras de biopsia y citología (lavado bronquial, n = 40; derrames pleurales, n = 30). El 22 3 que LDT basada en concentrado mostró una alta tasa de concordancia entre (~ 100%) la biopsia y citología de muestras (~ 95%) en comparación con la expresión de PD-L1 IHC determinada mediante el ensayo del compañero 3 22 PD-L1 IHC en ambos TPS cortar puntos (≥1%, ≥ 50%). La LDT optimizada presentada aquí, usando el concentrado de Ab 22 3 para determinar la expresión de PD-L1 en tanto tejido del tumor y en muestras de citología, ampliará la capacidad de los laboratorios en todo el mundo para evaluar la elegibilidad de los pacientes con NSCLC para tratamiento con monoterapia de pembrolizumab de una manera confiable y reproducible.
Introduction
Recientes ensayos clínicos han demostrado la eficacia de la pembrolizumab, un humanizado IgG4 kappa isotipo anticuerpo monoclonal que bloquea la interacción entre la muerte celular programada 1 (PD-1) y sus ligandos, PD-L1 y PD-L2, en el tratamiento de pacientes con 2,1,de avanzado NSCLC del3,4.
Actualmente, pembrolizumab está aprobada para el tratamiento de NSCLC PD-L1-expresión en ambos pacientes de tratamiento con una expresión de PD-L1 TPS de ≥50% y no del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) o aberraciones de genomic tumor linfoma anaplásico kinasa (ALK)3 y para previamente tratado a pacientes con un TPS de PD-L1 de ≥1%1.
PD-L1 expresión de la proteína detectada por IHC ha sido ampliamente utilizada como un ensayo de biomarcadores predictivos para las terapias anti-PD-1/PD-L1. En ensayos clínicos de pembrolizumab, el TPS de PD-L1 obtenidos con muestras de tejido de formalina-fijo de parafina-encajado (FFPE) se determinó utilizando la PD-L1 IHC 3 22 compañero ensayo5. Este ensayo ha sido aprobado por la US Food y Drug Administration (FDA) y ha marcado CE en Europa para la determinación del tumor TPS PD-L15.
Adicionales opciones globales a través de las instituciones para las evaluaciones confiables y de alta calidad de los TPS de PD-L1 con LDTs que utilizan el concentrado 22 3 anticuerpo son esenciales para apoyar las decisiones clínicas sobre paciente elegibilidad para pembrolizumab tratamiento. Un gran número de laboratorios de patología no tienen acceso al ensayo de PD-L1 IHC 3 22 diagnóstico de compañero. Por lo tanto, es esencial el desarrollo de LDTs confiables y coherentes compatibles con plataformas de reactivos autostainer IHC adicionales, ampliamente disponibles.
Por otra parte, es necesario establecer LDTs utilizando muestras citológicas que son el tipo de muestra sólo disponible con frecuencia en pacientes de CPCNP. El ensayo del compañero PD-L1 IHC 3 22 está validado para resecciones, biopsias de aguja de núcleo y estructura sólo si la broncoscopía rinde 100 células del tumor. Aunque con frecuencia se obtienen los tipos anteriores de la muestra, muestras citológicas son recogidas más fácilmente y el tipo de muestra más comúnmente disponibles en algunas instituciones6,7. Sin embargo, existe actualmente ningún ensayo diagnóstico validado para la evaluación de la expresión de PD-L1 en muestras de citología; confiables LDTs compatibles con muestras citológicas facilitaría aún más calidad PD-L1 prueba.
Además, al establecer la validación clínica de un LDT, la IHC debe realizarse de una manera similar a la correspondiente prueba comercial clínicamente validado8. Por ejemplo, varios pasos críticos deben ser verificadas para obtener la misma señal en secciones seriadas como titulación de anticuerpos, retrasos del tratamiento previo, tiempo de incubación y sistemas de amplificación9.
Recientemente desarrollamos un LDT optimizado que utiliza el concentrado 22 3 anticuerpos para evaluar la expresión de PD-L1 en biopsias del tumor y las muestras de citología10,11. Se encontró una alta concordancia con la LDT versus el “gold standard” PD-L1 IHC 3 22 ensayo10,11. Este protocolo clínico validado apoyo confiable y de alta calidad PD-L1 prueba en todas las regiones a nivel mundial.
Protocol
Representative Results
Discussion
Hemos validado una LDT optimizado usando el concentrado de anticuerpo 22 3 PD-L1, comparando con el validados clínicamente prueba comercial correspondiente10,11. 3 22 concentrados basados en anticuerpos LDT mostró una alta tasa de concordancia entre (~ 100%) la biopsia y muestras citológicas (~ 95%) en comparación con la expresión de PD-L1 IHC determinada usando el análisis de PD-L1 IHC 3 de 22 en ≥1% TPS y el ≥50% TPS puntos de corte. Como recientement…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este estudio fue patrocinado por Merck & Co., Inc., Kenilworth, NJ, USA. Los patrocinadores no desempeñó ningún papel en el diseño del estudio recolección de datos y análisis, publicación y preparación del manuscrito.
Materials
| NovaPrep HQ1 | Novacyt | NA | Preservative solution for cytology specimens |
| Novaprep® HQ+ B | Novacyt | NA | Mucolytic solution |
| Tissue-Tek VIP 6 | Sakura | 6042 VIP 6 | |
| Tissue-Tek TEC 5 Tissue Embedding Console System | Sakura | 5229 TEC 5 | |
| microscope glass slide SuperFrost Plus | Thermo Fisher Scientific | 4951PLUS4 | |
| DL-Dithiothreitol powder | Sigma-Aldrich | D3801 | |
| Heidolph Multi Reax Vortex Shaker | Thermo Fisher Scientific | 13-889-410 | |
| Shandon Cytoblock | Thermo Fisher Scientific | 7401150 | |
| 22C3 anti-PD-L1 concentrate antibody | Agilent Dako | #M365329 | |
| PD-L1 IHC 22C3 pharmDx | Agilent Dako | SK006 | |
| Autostainer Link 48 | Agilent Dako | AS480 | |
| BenchMark ULTRA autostainer | Ventana | #750-600 | |
| OptiView HQ Universal Linker | Ventana | #760-700 | |
| OptiView HRP Multimer | Ventana | #760-700 | |
| OptiView Amplification H2O2 | Ventana | #760-099 | |
| OptiView Amplifier | Ventana | #760-099 | |
| OptiView Amplification Multimer | Ventana | #760-100 | |
| OptiView DAB | Ventana | #760-700 | |
| OptiView Copper | Ventana | #760-700 | |
| Hematoxylin II | Ventana | #790-2208 | |
| Bluing Reagent | Ventana | #760-2037 | |
| Cell Conditioning 1 (CC1) | Ventana | #950-124 | |
| Tissue-Tek Film Coverslipper | Sakura | 4742 |
Riferimenti
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