JoVE Journal > Genetics
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Risultati
Discussion
Divulgazioni
Acknowledgements
Materials
Riferimenti
Traduzione automatica
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.
Genetica

Yalıtım, karakterizasyonu ve insan diş kökü kök hücrelerin genetik değişiklik mikroRNA tabanlı

Published: November 16, 2018
doi:
10.3791/58089
, , , , ,
1Reference and Translation Center for Cardiac Stem Cell Therapy (RTC), Department of Cardiac Surgery,Rostock University Medical Center, 2Department Life,Light and Matter of the Interdisciplinary Faculty at Rostock University, 3Department of Operative Dentistry and Periodontology,Rostock University Medical Center

Summary

Bu iletişim kuralı insan diş kökü çıkarılan diş kök hücrelerin geçici genetik mühendisliği açıklar. Uygulanan non-viral değişiklik strateji tedavi kök hücre ürünlerin geliştirilmesi için bir temel olabilir.

Abstract

Bugüne kadar odak dejeneratif hastalıkların tedavisi için farklı gelişim aşamalarında birkaç kök hücre türü vardır. Henüz, ilk büyük hücre ölümü ve düşük tedavi edici etkileri, gibi belirli özellikleri onların geniş klinik çeviri bozulmuş. Genetik Mühendisliği kök hücre nakli öncesinde tedavi kök hücre efektleri optimize etmek için umut verici bir yöntemi olarak ortaya çıktı. Ancak, güvenli ve verimli gen vasıtalarının hala eksik. Bu nedenle, uygun yöntem geliştirme kök hücre tabanlı tedaviler mevcut sorunları çözmek için bir yaklaşım sağlayabilir.

Mevcut Protokolü çıkarma ve karakterizasyonu insan diş kökü kök hücre (hDFSCs) yanı sıra kendi viral genetik değişiklik açıklar. Doğum sonrası diş kökü yüksek yayılma potansiyeli haiz yetişkin multipotent kök hücre hasat için umut verici ve kolayca erişilebilir bir kaynak olarak açıkladı. Açıklanan yalıtım yordamı hDFSCs gömülü yirmi yaş dişleri üzerinden hasat için basit ve güvenilir bir yöntem sunuyor. Ayrıca bu iletişim kuralı izole hücreler kök hücre özelliklerini tanımlamak için yöntem oluşmaktadır. Genetik mühendisliği için hDFSCs, bir en iyi duruma getirilmiş katyonik lipit tabanlı transfection strateji sitotoksik efekt neden olmadan sağlayan yüksek verimli mikroRNA giriş sunulmaktadır. Bu küçük translasyonel düzenleyiciler kader ve kök hücre istikrarlı genom tümleştirme tehlike olmadan davranışını kontrol mikroRNA’lar geçici hücre düzenleme, uygun adayları şunlardır. Böylece, bu iletişim kuralını onların tedavi edici etkinliği optimize etmek için önemli hale gelebilir hDFSCs Mühendisliği için güvenli ve verimli yordamı temsil eder.

Introduction

İnsan diş kökü bir gevşek ectomesenchymally kaynaklı bag gelişmekte olan diş1,2çevreleyen doku var. Işlevini koordinat osteoclastogenesis ve osteogenesis diş Erüpsiyonu işleminin, özellikle periodontium3,4,5geliştirilmesi için kök ve progenitör hücrelerin bu doku liman. Bu nedenle, diş kökü insan yetişkin kök hücreleri6,7hasat için alternatif bir kaynak olarak kabul edilir.

Çeşitli çalışmalarda insan diş kökü kök hücreler (hDFSCs) dokusunu, bağ fibroblastlar ve cementoblasts8,9,10 da dahil olmak üzere periodontal lineage ayırt yetenekli olduğunu gösterdi . Ayrıca, bu hücreler kendini yenileyerek kapasitesi, plastik bağlılık, ifade belirli yüzey işaretleri de dahil olmak üzere tüm özellikleri mezenkimal stromal hücre (MSCs) Maç gösterilmiştir (örneğin, CD73, CD90, CD105) olarak osteojenik de, Adipojenik ve chondrogenic farklılaşma potansiyeli11,12,13. Diğer çalışmalar da hDFSCs2,14,15,16,17,18bir sinirsel farklılaşma potansiyeli ortaya koydu.

Umut verici özellikleri ve kolay erişim nedeniyle, hDFSCs doku mühendisliği19,20,21için son zamanlarda ilgili oldu. İlk çalışmalar DFSCs potansiyeli kemik, periodontal yeniden üzerinde yoğunlaştı ve19,22,23,24,25,26Diş kökleri, 27,28,29,30. HDFSCs nörojenik yeteneğini bilen beri onların uygulama nörodejeneratif hastalıklar için olası tedavi olarak incelenen31,32,33olmuştur. HDFSCs da ile mineral için önem kazandı diğer dokulara (Örneğin, kornea epitel)34,35rejenerasyon. HDFSC tedavi edici potansiyel sadece onların doğrudan farklılaşma potansiyeli aynı zamanda parakrin faaliyetlerini dayalı değildir. Son zamanlarda, hDFSCs bir servet matriks metalloproteinazların (MMPs), insülin benzeri büyüme faktörü (IGF), vasküler endotelyal büyüme faktörü (VEGF), temel fibroblast büyüme faktörü (bFGF) ve Hepatosit büyüme gibi biyoaktif faktörlerin salgılar gösterilmiştir faktör (HGF), anjiogenez, immunomodulation, ekstra hücresel matris remodeling ve onarıcı süreçleri36için çok önemli bir rol oynamaktadır.

Ancak, kök hücre tedavisinin geniş klinik çeviri hala büyük ilk hücre ölümü ve düşük faydalı kök hücre etkileri37,38gibi çeşitli sorunlar tarafından Engelli. Genetik Mühendisliği bu sorunları ele almak üzere bir umut verici strateji sağlar ve bu nedenle kök hücre38,39,40tedavi edici etkinliği büyük ölçüde geliştirebilirsiniz. Bu küçük translasyonel düzenleyiciler kader ve kök hücre istikrarlı genom tümleştirme41,42, tehlike olmadan davranışını kontrol uygun adaylar, mikroRNA (miRs) geçici hücre manipülasyon için şunlardır 43. bugüne kadar birkaç yararlı miRs kök hücre çoğalması, hayatta kalma, posta, parakrin aktivite yanı sıra kendi farklılaşma içine birkaç soy44teşvik tespit edilmiştir. Örneğin, miR-133a hazır sıçan kalpler değiştirilmemiş MSCs45ile karşılaştırıldığında geliştirilmiş bir kardiyak fonksiyon sonuçlanan bir artan hayatta kalma ve engraftment gösterdi MSCs mühendislik. Aynı şekilde, miR-146a overexpressing MSCs iskemik doku46gelişmiş bir terapötik verimliliği için sırayla açan VEGF daha yüksek miktarda salgılaması için gösterildi.

Bu el yazması seçici ayıklama ve hDFSCs genetik mühendisliği için detaylı bir Protokolü sunar. Bu amaçla, biz insan diş köklerinin hasat ve enzimatik sindirim yanı sıra hDFSCs sonraki yalıtım nitelendirdi. İzole hücreleri ayırdetmek için MSC özellikleri doğrulanması için önemli talimatlar için hücresel tedavi13uluslararası toplumun kurallarına uygun olarak dahil edilmiştir. Buna ek olarak, biz katyonik lipit tabanlı transfection strateji ve transfection verimliliği ve sitotoksisite değerlendirilmesi uygulayarak hDFSCs miR-modified nesil için ayrıntılı bir açıklama sağlar.

Protocol

HDFSCs çıkarılan yirmilik dişler bölümü Oral ve Maksillofasiyal Cerrahi plastik cerrahi Rostock Üniversitesi Tıp Merkezi tarafından sağlanan diş köklerinin etkilenmezsiniz. Aydınlatılmış onam ve yazılı onayı elde edilen tüm hastalar. Bu çalışmada Rostock Üniversitesi (izni Hayır ‘ 2017-0158) Yerel Etik Komitesi tarafından yetkilendirilmiştir. 1. hDFSCs yalıtım Not: Bakteriyel kontaminasyonu önlemek için yirmilik dişler…

Representative Results

Burada, hDFSCs insan diş kökü dokusundan hasat için detaylı yalıtım talimat mevcut. Rutin bir ameliyat sırasında diş kökü kolay erişim nedeniyle, bu yetişkin kök hücreleri çıkarım için umut verici bir kaynaktır. İzole hDFSCs MSCs13tanımı için açıklanan tüm özellikleri gösterdi. Aslında, plastik-yapışık hücreleri küçük kültür koşulları açıklanan ve fibroblast ben…

Discussion

Erişkin kök hücrelerin şu anda birçok dejeneratif hastalıkların tedavisi için odak vardır. Özellikle, kemik iliği (BM)-hematopoetik kök hücre (HSCs) de dahil olmak üzere, kök hücre elde edilen ve MSCs, yoğun klinik soruşturma47altında. Ancak, BM hasat bağış yerinde ağrı neden invaziv bir işlemdir ve istenmeyen olaylar48olarak yol açabilir. Son zamanlarda, Doğum sonrası diş dokusu bir roman ve kök hücre için kolayca erişilebilir kaynak olarak…

Divulgazioni

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Bu eser Rostock Üniversitesi Tıp Merkezi (889018) ve nemli Vakfı (2016-11) FORUN Program tarafından desteklenmiştir. Buna ek olarak,’da ve R.D. BMBF (VIP + 00240) tarafından desteklenmektedir.

Materials

Mouse anti Human CD105 Antibody: Alexa Fluor 488 Bio-Rad MCA1557A488 Clone SN6, monoclonal
Mouse IgG1 Negative Control Antibody: Alexa Fluor 488 Bio-Rad MCA928A488 monoclonal
APC Mouse Anti-Human CD29 Antibody BD Biosciences 559883 Clone MAR4, monoclonal
APC Mouse IgG1, κ Isotype Control Antibody BD Biosciences 555751 Clone MOPC-21, monoclonal
PE Mouse Anti-Human CD73 Antibody BD Biosciences 550257 Clone AD2, monoclonal
PE Mouse IgG1, κ Isotype Control Antibody BD Biosciences 555749 Clone MOPC-21, monoclonal
PE-Cy7 Mouse Anti-Human CD117 Antibody BD Biosciences 339217 Clone 104D2, monoclonal
PE-Cy7 Mouse IgG1, κ Isotype Control Antibody BD Biosciences 557872 Clone MOPC-21, monoclonal
PerCP-Cy5.5 Mouse Anti-Human CD44 Antibody BD Biosciences 560531 Clone G44-26, monoclonal
PerCP-Cy5.5 Mouse IgG2b, κ Isotype Control Antibody BD Biosciences 558304 Clone 27-35, monoclonal
PerCP-Cy5.5 Mouse Anti-Human CD90 Antibody BD Biosciences 561557 Clone 5E10, monoclonal
PerCP-Cy5.5 Mouse IgG1, κ Isotype Control Antibody BD Biosciences 55095 Clone MOPC-21, monoclonal
V500 Mouse Anti-Human CD45 Antibody BD Biosciences 560777 Clone HI30, monoclonal
V500 Mouse IgG1, κ Isotype Control Antibody BD Biosciences 560787 Clone X40, monoclonal
FcR Blocking Reagent, human Miltenyi Biotec 130-059-901
UltraPure EDTA Thermo Fisher Scientific 15575-020 0.5M, pH 8.0
Steritop Merck Millipore SCGPT05RE 0.22 µm, radio-sterilized, polyethersulfone
BSA Sigma-Aldrich A7906
PFA Merck Millipore 1040051000
Human Mesenchymal Stem Cell Functional Identification Kit R&D Systems SC006
RNase decontamination solution; RNaseZap RNase Decontamination Solution Thermo Fisher Scientific AM9780
Cy3-labelled precursor miR; Cy3 Dye-Labeled Pre-miR Negative Control #1 Thermo Fisher Scientific AM17120 5 nmol
Pre-miR miRNA Precursor Negative Control #1 Thermo Fisher Scientific AM17110 5nmol
Cationic lipid-based transfection reagent; Lipofectamine 2000 Transfection Reagent Thermo Fisher Scientific 11668019
Reduced serum medium; Opti-MEM I Reduced Serum Medium Thermo Fisher Scientific 31985070
Donkey anti-Goat IgG (H+L) Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 488 Thermo Fisher Scientific A-11055 polyclonal
Donkey anti-Mouse IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 488 Thermo Fisher Scientific A-21202 polyclonal
Mounting medium; Fluoroshield with DAPI Sigma-Aldrich F6057-20ML histology mounting medium
ELYRA PS.1 LSM 780 confocal microscope Zeiss
BD FACS LSRII flow cytometer BD Biosciences
BD FACSDiva Software 6.1.2 BD Biosciences
ZEN2011 software Zeiss
Trypsin/EDTA solution (0.05%/ 0.02%) Biochrom L2143 in PBS, w/o: Ca2+, Mg2+
Amine reactive dye; LIVE/DEAD™ Fixable Near-IR Dead Cell Stain Kit Thermo Fisher Scientific L10119
PBS (1x) Thermo Fisher Scientific 10010023 pH: 7.4; w/o: Ca and Mg
P-S-G (100x) Thermo Fisher Scientific 10378016
Basal medium; Dulbecco's Modified Eagle Medium/Nutrient Mixture F-12 Thermo Fisher Scientific 11039021
Antibiotic, ZellShield Biochrom W 13-0050
FBS Thermo Fisher Scientific 10500064
Collagenase type I Thermo Fisher Scientific 17100017
Dispase II Thermo Fisher Scientific 17105041
Filter, Sterifix syringe filter 0.2 µm Braun 4099206
50 mL conical centrifuge tube Sarstedt 62,547,254
15 mL conical centrifuge tube Sarstedt 62,554,502
Cell culture flask 75 cm2 Sarstedt 833,910,002
Cell culture flask, 25 cm2 Sarstedt 833,911,002
Freezing medium, Biofreeze Biochrom F 2270
Cryotubes Thermo Fisher Scientific 377267 1.8 mL
Trypan blue solution Sigma-Aldrich T8154 0.4 %
Counting chamber Paul Marienfeld
Local anesthetic, Xylocitin (lidocaine hydrochloride) 2% with epinephrine (adrenaline) 0.001% Mibe
NaCl solution Braun 0.9 %
Vicryl satures, Vicryl rapide Ethicon 3 – 0
DOWNLOAD MATERIALS LIST

Riferimenti

  1. Potdar, P. D., Jethmalani, Y. D. Human dental pulp stem cells: Applications in future regenerative medicine. World journal of stem cells. 7 (5), 839-851 (2015).
  2. Lima, R. L., et al. Human dental follicle cells express embryonic, mesenchymal and neural stem cells markers. Archives of oral biology. 73, 121-128 (2017).
  3. Wise, G. E. Cellular and molecular basis of tooth eruption. Orthodontics & craniofacial research. 12 (2), 67-73 (2009).
  4. Baykul, T., Saglam, A. A., Aydin, U., Başak, K. Incidence of cystic changes in radiographically normal impacted lower third molar follicles. Oral surgery, oral medicine, oral pathology, oral radiology, and endodontics. 99 (5), 542-545 (2005).
  5. Wise, G. E., Frazier-Bowers, S., D’Souza, R. N. Cellular, molecular, and genetic determinants of tooth eruption. Critical reviews in oral biology and medicine : an official publication of the American Association of Oral Biologists. 13 (4), 323-334 (2002).
  6. Ten Cate, A. R. The development of the periodontium: A largely ectomesenchymally derived unit. Periodontology 2000. 13 (1), 9-19 (1997).
  7. Park, B. -. W., et al. In vitro and in vivo osteogenesis of human mesenchymal stem cells derived from skin, bone marrow and dental follicle tissues. Differentiation; research in biological diversity. 83 (5), 249-259 (2012).
  8. Sowmya, S., et al. Periodontal Specific Differentiation of Dental Follicle Stem Cells into Osteoblast, Fibroblast, and Cementoblast. Tissue engineering. Part C, Methods. 21 (10), 1044-1058 (2015).
  9. Kémoun, P., et al. Human dental follicle cells acquire cementoblast features under stimulation by BMP-2/-7 and enamel matrix derivatives (EMD) in vitro. Cell and tissue research. 329 (2), 283-294 (2007).
  10. Morsczeck, C., et al. Isolation of precursor cells (PCs) from human dental follicle of wisdom teeth. Matrix biology: Journal of the International Society for Matrix Biology. 24 (2), 155-165 (2005).
  11. Hieke, C., et al. Human dental stem cells suppress PMN activity after infection with the periodontopathogens Prevotella intermedia and Tannerella forsythia. Scientific reports. 6, 39096 (2016).
  12. Kumar, A., et al. Molecular spectrum of secretome regulates the relative hepatogenic potential of mesenchymal stem cells from bone marrow and dental tissue. Scientific reports. 7 (1), 15015 (2017).
  13. Dominici, M., et al. Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement. Cytotherapy. 8 (4), 315-317 (2006).
  14. Ullah, I., et al. In vitro comparative analysis of human dental stem cells from a single donor and its neuronal differentiation potential evaluated by electrophysiology. Life sciences. 154, 39-51 (2016).
  15. Völlner, F., Ernst, W., Driemel, O., Morsczeck, C. A two-step strategy for neuronal differentiation in vitro of human dental follicle cells. Differentiation; research in biological diversity. 77 (5), 433-441 (2009).
  16. Morsczeck, C., et al. Comparison of human dental follicle cells (DFCs) and stem cells from human exfoliated deciduous teeth (SHED) after neural differentiation in vitro. Clinical oral investigations. 14 (4), 433-440 (2010).
  17. Kadar, K., et al. Differentiation potential of stem cells from human dental origin – promise for tissue engineering. Journal of physiology and pharmacology: An official journal of the Polish Physiological Society. 60, 167-175 (2009).
  18. Heng, B. C., et al. Decellularized Matrix Derived from Neural Differentiation of Embryonic Stem Cells Enhances the Neurogenic Potential of Dental Follicle Stem Cells. Journal of endodontics. 43 (3), 409-416 (2017).
  19. Honda, M. J., Imaizumi, M., Tsuchiya, S., Morsczeck, C. Dental follicle stem cells and tissue engineering. Journal of Oral Science. 52 (4), 541-552 (2010).
  20. Liu, J., et al. Concise reviews: Characteristics and potential applications of human dental tissue-derived mesenchymal stem cells. Stem cells. 33 (3), 627-638 (2015).
  21. Morsczeck, C., Reichert, T. E. Dental stem cells in tooth regeneration and repair in the future. Expert opinion on biological therapy. 18 (2), 187-196 (2018).
  22. Rezai-Rad, M., et al. Evaluation of bone regeneration potential of dental follicle stem cells for treatment of craniofacial defects. Cytotherapy. 17 (11), 1572-1581 (2015).
  23. Handa, K., et al. Progenitor Cells From Dental Follicle Are Able to Form Cementum Matrix In Vivo. Connective Tissue Research. (2-3), 406-408 (2009).
  24. Tsuchiya, S., Ohshima, S., Yamakoshi, Y., Simmer, J. P., Honda, M. J. Osteogenic Differentiation Capacity of Porcine Dental Follicle Progenitor Cells. Connective Tissue Research. 51 (3), 197-207 (2010).
  25. Honda, M. J., et al. Stem cells isolated from human dental follicles have osteogenic potential. Oral surgery, oral medicine, oral pathology, oral radiology, and endodontics. 111 (6), 700-708 (2011).
  26. Guo, W., et al. Dental follicle cells and treated dentin matrix scaffold for tissue engineering the tooth root. Biomaterials. 33 (5), 1291-1302 (2012).
  27. Yang, B., et al. Tooth root regeneration using dental follicle cell sheets in combination with a dentin matrix – based scaffold. Biomaterials. 33 (8), 2449-2461 (2012).
  28. Bai, Y., et al. Cementum- and periodontal ligament-like tissue formation by dental follicle cell sheets co-cultured with Hertwig’s epithelial root sheath cells. Bone. 48 (6), 1417-1426 (2011).
  29. Guo, S., et al. Comparative study of human dental follicle cell sheets and periodontal ligament cell sheets for periodontal tissue regeneration. Cell transplantation. 22 (6), 1061-1073 (2013).
  30. Lucaciu, O., et al. Dental follicle stem cells in bone regeneration on titanium implants. BMC biotechnology. 15, 114 (2015).
  31. Li, X., et al. A therapeutic strategy for spinal cord defect: Human dental follicle cells combined with aligned PCL/PLGA electrospun material. BioMed research international. , 197183 (2015).
  32. Yang, C., Li, X., Sun, L., Guo, W., Tian, W. Potential of human dental stem cells in repairing the complete transection of rat spinal cord. Journal of neural engineering. 14 (2), 26005 (2017).
  33. Kanao, S., et al. Capacity of Human Dental Follicle Cells to Differentiate into Neural Cells In Vitro. Stem Cells International. 2017, 8371326 (2017).
  34. Sung, I. -. Y., et al. Cardiomyogenic Differentiation of Human Dental Follicle-derived Stem Cells by Suberoylanilide Hydroxamic Acid and Their In Vivo Homing Property. International journal of medical sciences. 13 (11), 841-852 (2016).
  35. Botelho, J., Cavacas, M. A., Machado, V., Mendes, J. J. Dental stem cells: Recent progresses in tissue engineering and regenerative medicine. Annals of medicine. 49 (8), 644-651 (2017).
  36. Dou, L., et al. Secretome profiles of immortalized dental follicle cells using iTRAQ-based proteomic analysis. Scientific reports. 7 (1), 7300 (2017).
  37. Lee, S., Choi, E., Cha, M. -. J., Hwang, K. -. C. Cell adhesion and long-term survival of transplanted mesenchymal stem cells: A prerequisite for cell therapy. Oxidative medicine and cellular longevity. 2015, 632902 (2015).
  38. Lemcke, H., Voronina, N., Steinhoff, G., David, R. Recent Progress in Stem Cell Modification for Cardiac Regeneration. Stem Cells International. 2018 (2), 1-22 (2018).
  39. Nowakowski, A., Walczak, P., Janowski, M., Lukomska, B. Genetic Engineering of Mesenchymal Stem Cells for Regenerative Medicine. Stem cells and development. 24 (19), 2219-2242 (2015).
  40. Nowakowski, A., Walczak, P., Lukomska, B., Janowski, M. Genetic Engineering of Mesenchymal Stem Cells to Induce Their Migration and Survival. Stem Cells International. 2016, 4956063 (2016).
  41. Gulluoglu, S., Tuysuz, E. C., Bayrak, O. F., #350;ahin, F., Doğan, A., Demirci, S. miRNA Regulation in Dental Stem Cells: From Development to Terminal Differentiation. Dental Stem Cells. Stem Cell Biology and Regenerative Medicine. , (2016).
  42. Hammond, S. M. An overview of microRNAs. Advanced drug delivery reviews. 87, 3-14 (2015).
  43. Jakob, P., Landmesser, U. Role of microRNAs in stem/progenitor cells and cardiovascular repair. Cardiovascular research. 93 (4), 614-622 (2012).
  44. Clark, E. A., Kalomoiris, S., Nolta, J. A., Fierro, F. A. Concise Review: MicroRNA Function in Multipotent Mesenchymal Stromal Cells. Stem cells. 32 (5), 1074-1082 (2014).
  45. Dakhlallah, D., et al. MicroRNA-133a engineered mesenchymal stem cells augment cardiac function and cell survival in the infarct heart. Journal of cardiovascular pharmacology. 65 (3), 241-251 (2015).
  46. Seo, H. -. H., et al. Exogenous miRNA-146a Enhances the Therapeutic Efficacy of Human Mesenchymal Stem Cells by Increasing Vascular Endothelial Growth Factor Secretion in the Ischemia/Reperfusion-Injured Heart. Journal of vascular research. 54 (2), 100-108 (2017).
  47. Trounson, A., McDonald, C. Stem Cell Therapies in Clinical Trials: Progress and Challenges. Cell stem cell. 17 (1), 11-22 (2015).
  48. Siddiq, S., et al. Bone marrow harvest versus peripheral stem cell collection for haemopoietic stem cell donation in healthy donors. The Cochrane database of systematic reviews. (1), CD006406 (2009).
  49. Karamzadeh, R., Eslaminejad, M. B., Andrades, J. A. Dental-Related Stem Cells and Their Potential in Regenerative Medicine. Regenerative Medicine and Tissue Engineering. , (2013).
  50. Gronthos, S., Mankani, M., Brahim, J., Robey, P. G., Shi, S. Postnatal human dental pulp stem cells (DPSCs) in vitro and in vivo. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (25), 13625-13630 (2000).
  51. Honda, M. J., et al. Side population cells expressing ABCG2 in human adult dental pulp tissue. International endodontic journal. 40 (12), 949-958 (2007).
  52. Seo, B. -. M., et al. Investigation of multipotent postnatal stem cells from human periodontal ligament. The Lancet. 364 (9429), 149-155 (2004).
  53. Miura, M., et al. SHED: stem cells from human exfoliated deciduous teeth. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 100 (10), 5807-5812 (2003).
  54. Sonoyama, W., et al. Characterization of the apical papilla and its residing stem cells from human immature permanent teeth: a pilot study. Journal of endodontics. 34 (2), 166-171 (2008).
  55. Nollet, E., Hoymans, V. Y., van Craenenbroeck, A. H., Vrints, C. J., van Craenenbroeck, E. M. Improving stem cell therapy in cardiovascular diseases: the potential role of microRNA. American journal of physiology. Heart and circulatory physiology. 311 (1), H207-H218 (2016).
  56. Müller, P., et al. Magnet-Bead Based MicroRNA Delivery System to Modify CD133+ Stem Cells. Stem cells international. 2016, 7152761 (2016).
  57. Schade, A., et al. Magnetic Nanoparticle Based Nonviral MicroRNA Delivery into Freshly Isolated CD105(+) hMSCs. Stem cells international. 2014, 197154 (2014).
  58. Bulbake, U., Doppalapudi, S., Kommineni, N., Khan, W. Liposomal Formulations in Clinical Use: An Updated Review. Pharmaceutics. 9 (2), (2017).
  59. Xue, H. Y., Liu, S., Wong, H. L. Nanotoxicity: a key obstacle to clinical translation of siRNA-based nanomedicine. Nanomedicine. 9 (2), 295-312 (2014).
  60. Nguyen, L. T., Atobe, K., Barichello, J. M., Ishida, T., Kiwada, H. Complex formation with plasmid DNA increases the cytotoxicity of cationic liposomes. Biological & pharmaceutical bulletin. 30 (4), 751-757 (2007).
  61. Omidi, Y., Barar, J., Akhtar, S. Toxicogenomics of cationic lipid-based vectors for gene therapy: impact of microarray technology. Current drug delivery. 2 (4), 429-441 (2005).
  62. Hausburg, F., et al. Defining optimized properties of modified mRNA to enhance virus- and DNA- independent protein expression in adult stem cells and fibroblasts. Cellular physiology and biochemistry: International journal of experimental cellular physiology, biochemistry, and pharmacology. 35 (4), 1360-1371 (2015).
  63. Cardarelli, F., et al. The intracellular trafficking mechanism of Lipofectamine-based transfection reagents and its implication for gene delivery. Scientific reports. 6, 25879 (2016).
  64. Kirschman, J. L., et al. Characterizing exogenous mRNA delivery, trafficking, cytoplasmic release and RNA-protein correlations at the level of single cells. Nucleic acids research. 45 (12), e113 (2017).
  65. Li, L., Nie, Y., Ye, D., Cai, G. An easy protocol for on-chip transfection of COS-7 cells with a cationic lipid-based reagent. Lab on a chip. 9 (15), 2230-2233 (2009).
  66. Chang, K., Marran, K., Valentine, A., Hannon, G. J. RNAi in cultured mammalian cells using synthetic siRNAs. Cold Spring Harbor protocols. 2012 (9), 957-961 (2012).
  67. Sakurai, K., Chomchan, P., Rossi, J. J. Silencing of gene expression in cultured cells using small interfering RNAs. Current protocols in cell biology. , (2010).
  68. Hoelters, J., et al. Nonviral genetic modification mediates effective transgene expression and functional RNA interference in human mesenchymal stem cells. The journal of gene medicine. 7 (6), 718-728 (2005).

Tags

Dental Follicle Stem CellsHDFSCsEnzymatic DigestionCollagenaseDispaseMicroRNAGenetic ModificationRegenerative MedicineCell IsolationCell Characterization
check_url/it/58089?article_type=t

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Citazione di questo articolo
Müller, P., Ekat, K., Brosemann, A., Köntges, A., David, R., Lang, H. Isolation, Characterization and MicroRNA-based Genetic Modification of Human Dental Follicle Stem Cells. J. Vis. Exp. (141), e58089, doi:10.3791/58089 (2018).
Scarica citazione
Ristampe e autorizzazioni

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image