Method Article

Uso del trapianto di cellule staminali ematopoietiche per valutare l'origine della sindrome Myelodysplastic

DOI:

10.3791/58140

⸱

October 3rd, 2018

 ,  ,  , 
1Genetics Branch, Center for Cancer Research, National Cancer Institute, National Institutes of Health, 2LGI Flow Cytometry Core Facility, Center for Cancer Research, National Cancer Institute, National Institutes of Health

In This Article

Summary

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Descriviamo l'uso del trapianto di cellule staminali ematopoietiche (HSCT) per valutare il potenziale maligno delle cellule emopoietiche geneticamente. HSCT è utile per valutare varie cellule ematopoietiche maligne in vivo , nonché generando un'ampia coorte di topi con sindromi mielodisplastiche (MDS) o leucemia per valutare nuove terapie.

Abstract

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Sindromi mielodisplastiche (SMD) sono un gruppo eterogeneo di disordini di cellule staminali ematopoietiche che sono definiti da ematopoiesi inefficace, sangue periferico citopenie, displasia e una propensione per la trasformazione in leucemia acuta. Topi transgenici NUP98-HOXD13 (NHD13) ricapitolano MDS umano in termini di sangue periferico citopenie, displasia e trasformazione in leucemia acuta. Precedentemente abbiamo dimostrato che MDS può essere trasferito da un topo geneticamente ingegnerizzato con MDS ai destinatari di selvaggio-tipo di trapianto di cellule di midollo osseo nucleata MDS (BMNC). Più chiaramente capire la cella MDS di origine, abbiamo sviluppato approcci di trapiantare specifici, immunophenotypically definito sottoinsiemi ematopoietici. In questo articolo, descriviamo il processo di isolamento e di trapianto di specifiche popolazioni di staminali ematopoietiche e cellule progenitrici. A seguito di trapianto, descriviamo gli approcci per valutare l'efficacia del trapianto e la persistenza delle cellule MDS del donatore.

Introduction

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Le sindromi mielodisplastiche (MDS) rappresentano un gruppo eterogeneo di disordini clonali sangue caratterizzati da ematopoiesi inefficace, prova morfologica della displasia e una propensione per la trasformazione in leucemia mieloide acuta (AML)1,2 ,3,4. Ematopoiesi inefficace è riconosciuto come un arresto di maturazione nel midollo osseo e risultati nel sangue periferico citopenie nonostante un1,di midollo osseo ipercellulare3. L'incidenza di MDS è stato variamente stimato di 2-....

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Protocol

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Le procedure animale descritte in questo articolo sono state approvate dal National Cancer Institute a Bethesda Animal Care e Comitato di uso e sono conformi alle politiche contenute all'interno, la politica di servizio di sanità pubblica su cura umanitaria e uso di animali da laboratorio, il Animal Welfare Act e la guida per la cura e l'uso degli animali da laboratorio.

1. cella preparazione

  1. Raccolta del midollo osseo cellule nucleate (BMNC)
    1. Utilizzare solo materiali sterili. Sterilizzare gli strumenti riutilizzabili usando un autoclave a vapore. Acquisto di aghi, siringhe e oggetti in plastica in contenitori sterili mono....

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Results

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Vi mostriamo le figure rappresentative per risultati di molti esperimenti. La figura 1 Mostra un rappresentante flusso cytometry ordinamento esperimento. Durante il differenziamento ematopoietico normale, come le cellule diventano impegna un specifico lineage ematopoietico, acquisiscono lignaggio-definizione di indicatori di superficie delle cellule e perdere il potenziale di auto-rinnovamento. Pertanto, in topi wild-type, autorinnovamento delle cellule stami.......

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Discussion

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Anche se MDS sono un disordine clonale di cellule staminali ematopoietiche, il MDS "gambo", o cellule di origine, non sono ancora state caratterizzate. Precedentemente abbiamo dimostrato che MDS possono essere transplantable ai topi WT usando il midollo osseo dai topi NHD13 di HSCT, caratterizzata da anemia macrocitica, leucopenia, neutropenia e prova morfologica della displasia15. Inoltre, analisi competitiva ripopolamento identificato un vantaggio di crescita delle cellule dal midollo osseo NHD1.......

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Disclosures

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Non abbiamo nulla di divulgare.

Acknowledgements

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Questo lavoro è stato supportato dal programma di ricerca intramurale del National Cancer Institute, National Institutes of Health (concedere numeri ZIA SC 010378 e BC 010983).

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Provetta a fondo tondo da 14 mLFalcon352057
Soluzione salina bilanciata di HankAnticorpo Lonza10-527F
Anti-CD45.2Southern Biotech1800-15LOT# A077-T044O
Siringa da 3 mLMonoject8881513934
Ago da 27 GBD305109
Ago da 20 GBD
Lineage CocktailMiltenyi130-090-858LOT# 5170418221
Anticorpi anti-biotinaMiltenyi130-113-288LOT# 5171109046
Siringa da 1 mlExcelint26027Siringa da insulina
Lampada riscaldanteThermo Fisher ScientificE70001901
macchina FACSCytecFACScan2 laser, 5 rivelatori di colore Strumento
di selezione FACSBeckman CoulterMOFLO ASTRIOS5 laser, 23 parametri, 6 smistamento simultaneo
della popolazione Ioduro di propidioThermo Fisher ScientificP3566
Gamma IrradiatorBest TheratronicsGammacell 40
Provetta per prelievo del sangueRAM scientific76011
Ricevente topiCharles RiverB6-LY5.1/Cr, CD45.1
NUP98-HOXD13 topin/a C57Bl/6, CD45.2Colonia mantenuta presso NIH
5 mL tubo a fondo tondoFalcon352058
305176

References

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  1. Corey, S. J., et al. Myelodysplastic syndromes: the complexity of stem-cell diseases. Nature Reviews Cancer. 7 (2), 118-129 (2007).
  2. Garcia-Manero, G. Myelodysplastic syndromes: 2015 Update on diagnosis, risk-stratification an....

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Hematopoietic Stem Cell TransplantationMyelodysplastic SyndromeBone Marrow Nucleated CellsFlow CytometryTotal Body IrradiationCell SortingAdoptive TransferCD45 2 MarkerLineage Negative CellsPeripheral Blood Analysis

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