باراكريني وجوكستاكريني من التفاعلات الخلوية دوراً هاما في العديد من العمليات البيولوجية، بما في ذلك تطور الورم والاستجابات المناعية، والأوعية، والتنمية. هنا، يستخدم أسلوب ثقافة الدانية لدراسة الإشارات paracrine حيث يتم الاحتفاظ تركيزات مترجمة من العوامل التي يفرزها مع منع الاتصال الخلوية مباشرة.
التفاعلات بين الخلايا دوراً هاما في العديد من العمليات البيولوجية، بما في ذلك تطور الورم والاستجابات المناعية، والأوعية، والتنمية. باراكريني أو إشارات جوكستاكريني يتوسط هذه التفاعلات. استخدام وسيلة مكيفة ودراسات كوكولتوري هي الأساليب الأكثر شيوعاً للتمييز بين هذين النوعين من التفاعلات. ومع ذلك، أثر المترجمة تركيزات عالية من عوامل المكروية يفرزها أثناء التفاعلات paracrine لا موجز لها بدقة بواسطة مكيفة، وبالتالي، قد يؤدي إلى نتائج غير دقيقة. للتغلب على هذه المشكلة، وضعنا أسلوب ثقافة الدانية لدراسة الإشارات باراكريني. وتزرع أنواع الخلايا اثنين على السطح أما لغشاء البولي ميكرومتر سميكة 10 مع 0.4 ميكرومتر المسام. المسام يسمح بتبادل العوامل يفرزها، وتمنع في نفس الوقت، مما يشير إلى جوكستاكريني. ويمكن جمع الخلايا وتفكيك في نقطة النهاية تحديد الآثار المترتبة إشارات paracrine. بالإضافة إلى السماح للتدرجات تركيز مترجمة من العوامل يفرزها، هذا الأسلوب قابلة للتجارب التي تنطوي على فترات طويلة للثقافة، وكذلك استعمال مثبطات. بينما يمكننا استخدام هذا الأسلوب لدراسة التفاعلات بين الخلايا mesothelial التي يواجهونها في موقع خبيث وخلايا سرطان المبيض، يمكن تكييفها لأي خلية ملتصقة نوعين للباحثين لدراسة paracrine الإشارات في مختلف المجالات، بما في ذلك ورم المكروية وعلم المناعة، والتنمية.
وقد أنشئ أيضا دور الإنتاجية التفاعلات المتبادلة بين الخلايا السرطانية وورم المكروية في تطور الورم وأصبحت محورا أساسيا للبحث في سرطان علم الأحياء1. حالات مماثلة للإشارات ثنائية الاتجاه حاسمة خلال الجرح تضميد الجراح، والاستجابات المناعية، والأوعية، ومنافذ الخلايا الجذعية، والتنمية2،،من34،،من56 , 7 , 8-هو سمة مشتركة في جميع هذه العمليات البيولوجية أن الخلايا تستجيب بطرق مختلفة إلى خارج الخلية العظة من بهم المكروية التي تحدد مصير الخلايا والأنسجة فسيولوجيا وتطور المرض. ولذلك تحولت التركيز متزايد نحو تطوير فهم أفضل للآليات التي تشارك في هذه الاتصالات خلية خلية. تشمل غالبية هذه التفاعلات باراكريني أو جوكستاكريني الإشارات بين الخلايا. إشارات Paracrine ينطوي على إفراز عوامل إشارات محددة بمقدار خلية واحدة حيث يعتبرها المستقبلات المقابلة في خلية أخرى في المنطقة المجاورة، مما آثار ردا في ذلك10من9،، في حين جوكستاكريني الإشارات يتطلب اتصال مباشر بين المكونات الخلوية من خليتين تشارك11،12.
هذه الإشارات عنصر حاسم في التوازن الأنسجة، وكذلك في ورم المكروية. الخلايا السرطانية الاستفادة من عوامل باراكريني وجوكستاكريني من الخلايا في ستروما الورم، بما في ذلك المرتبط بسرطان الخلايا الليفية (اجواءه) والخلايا المناعية adipocytes13،14،،من1516. باراكريني إشارات يمكن أن توسط عوامل النمو، السيتوكينات، المستقطبات، إلخ، بينما يشير جوكستاكريني ينطوي على يغاندس جنبا إلى جنب والمستقبلات كما هو الحال في الشق الإشارات، أو التفاعلات بين إينتيجرينس ومنها المصفوفة خارج الخلية البروتينات. لقد أظهرنا أهمية التفاعلات المتبادلة بين خلايا سرطان المبيض واجواءه في استئصال ورم خبيث وتطور14. وبالمثل، تنظيم التفاعلات بين خلايا سرطان المبيض metastasizing مع الخلايا mesothelial تغطي موقع خبيث ميكرورناس الرئيسية وعوامل النسخ في الخلايا السرطانية التي تروج للاستعمار المنتشر17، 18.
معظم الدراسات على إشارات paracrine تنطوي على استخدام وسيلة المكيفة التي تم جمعها من نوع خلية واحدة لعلاج نوع الخلية الثانية مع. بينما تم استخدام هذا النهج على نطاق واسع، فإنه لا نسخ فعالية مستويات عالية التركيز المترجمة عامل يفرز في المكروية الخلية المستقبلة. كما فشل استنساخ الحركية التدفق المستمر للعامل الذي يفرز يجري إنتاجها بمقدار خلية واحدة وتتلقاها الخلية المجاورة. باراكريني الإشارات هي فعالة عبر مسافات قصيرة كما العوامل التي يفرزها في التركيزات المطلوبة فقط محيط الخلية المصدر وتميل إلى منتشر وتضعف بزيادة المسافة. هذا التركيز العالي مترجمة يفرز عامل ضروري لتؤدي إلى استجابة في الخلية المستقبلة. وعلاوة على ذلك، أيضا استجابة الخلايا المتلقية تعتمد على التوازن بين العوامل يفرز حديثا وعلى استنزاف مستمر من خلال تدهور، وملزمة، واستيعاب في الخلايا المتلقية ونشرها بعيداً عن الخلية المصدر. يمكن أن تكون وسيطة مكيفة مركزة لحساب أعلى تركيزات المترجمة موجودة في المكروية، ولكن دقة لا يمكن النسخ المتماثل التركيزات الدقيقة. وعلاوة على ذلك، فإنه لا يمكن تقليد الحركية الطبيعية للإنتاج ونضوب عامل بالمشاركة. أكثر دقة تكرار الإشارات باراكريني وفصله من جوكستاكريني مما يشير إلى آليات، وضعنا أسلوب رواية ثقافة الدانية، الذي ينطوي على زراعة أنواع الخلايا اثنين على السطح أما لغشاء يسهل اختراقها. المسام صغيرة بما يكفي لمنع التفاعلات جوكستاكريني ويسمح بتبادل العوامل يفرز بتركيزات عالية مترجمة. وبهذه الطريقة، يحتفظ هذا النظام حركية الإنتاج ونضوب العوامل باراكريني.
فهم إليه باراكريني وجوكستاكريني الإشارات بين الخلايا أمر ضروري لتطوير معرفة أفضل بأنسجة طبيعية التوازن والمرض ظروف7،8. باراكريني معظم الإشارات وتجري دراسات عن طريق جمع مكيفة المتوسطة من نوع خلية واحدة واستخدامه لعلاج نوع الخلية الأخرى. يحتوي هذا الأسلوب م…
The authors have nothing to disclose.
ونحن مدينون للمرضى للمشاركة في جمع الأنسجة لهذه التجارب. “وزارة الدفاع أوكرب المبيض السرطان جائزة الأوسكار” (W81XWH-15-0253) وجائزة تجريبية من “مؤسسة حلم” كولين في إلى Anirban ك. ميترا يؤيد هذا البحث.
24 mm Transwell permeable support with 0.4 µm Pore Polycarbonate Membrane Insert | Corning (Costar) | 3412 | • 10 µm thick translucent polycarbonate membrane • Treated for optimal cell attachment • Packaged 6 inserts in a 6 well plate, 4 plates per case • Membrane must be stained for cell visibility • Sterilized by gamma radiation |
6 well plate | Corning (Falcon) | 353046 | Flat Bottom, TC-treated, sterile, with Lid |
15 cm culture dish | Corning (Falcon) | 353025 | Sterile, TC-treated Cell Culture Dish |
DMEM | Corning (Cellgro) | 10-013-CV | |
Penicillin Streptomycin | Corning | 30-002-CI | |
MEM Nonessential amino acids | Corning (Cellgro) | 25-025-CI | |
MEM Vitamins | Corning (Cellgro) | 25-020-CI | |
0.25% Trypsin, 2.21 mM EDTA | Corning | 25-053-CI | |
Fetal bovine serum | Atlanta Biologicals | S11150 | |
Pipets | Any make is fine | ||
CO2 Incubator | Any make is fine | ||
Biosafety level II cabinet | Any make is fine | ||
FN1 TaqMan Gene Expression Assay | ThermoFisher Scientific | Hs01549976_m1 | |
TGFB1 TaqMan Gene Expression Assay | ThermoFisher Scientific | Hs00998133_m1 | |
CDH1 TaqMan Gene Expression Assay | ThermoFisher Scientific | Hs01023895_m1 | |
GAPDH TaqMan Gene Expression Assay | ThermoFisher Scientific | Hs99999905_m1 | |
miRNeasy mini RNA isolation Kit | Qiagen | 217004 | |
High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kit | ThermoFisher Scientific | 43-688-13 | |
HeyA8 ovarian cancer cells | Obtained from Ernst Lengyel Lab, University of Chicago | ||
TGFβ Neutralizing Antibody | R&D Systems | MAB1835-100 |