Modello del polmone acellulare e cellulari per lo studio di metastasi del tumore

Sommario

Qui, presentiamo un protocollo per un ex vivo del polmone cancro modello che imita le fasi della progressione del tumore e aiuta a isolare un tumore primario, fare circolare le cellule del tumore e le lesioni metastatiche.

Abstract

È difficile isolare le cellule del tumore in diversi punti della progressione del tumore. Abbiamo creato un ex vivo modello del polmone che può mostrare l'interazione delle cellule del tumore con una matrice naturale e continuo flusso di sostanze nutritive, così come un modello che mostra l'interazione delle cellule del tumore con componenti cellulari normali e una matrice naturale. Isolando un blocco cuore-polmoni del ratto e rimuovendo tutte le celle utilizzando il processo di decellularizzazione viene creato il modello di polmone acellulare ex vivo . Il bronco principale destro è legato al largo e le cellule del tumore sono collocate nella trachea di una siringa. Le cellule muovono e popolano il polmone di sinistra. Il polmone viene poi collocato in un bioreattore dove l'arteria polmonare riceve un flusso continuo di media in un circuito chiuso. Il tumore cresciuto il polmone di sinistra è il tumore primario. Le cellule del tumore che sono isolate nei mezzi circolanti sono in circolazione le cellule del tumore e le cellule del tumore nel polmone di destra sono lesioni metastatiche. Saltando il processo di decellularizzazione viene creato il modello di polmone cellulare ex vivo . Ogni modello consente di rispondere alle domande di ricerca differenti.

Introduzione

Metastasi del cancro è il colpevole dietro la maggior parte delle morti legate al cancro e la sfida finale nel tentativo di combattere il cancro. L'obiettivo generale di questo metodo è quello di progettare un protocollo per una coltura quadridimensionale (4D) cellulare che ha una dimensione di flusso, oltre alla crescita di cellula tridimensionale (3D). Rappresenta le tre fasi del processo di metastasi [cioè, il tumore primario, fare circolare le cellule del tumore (CTCs) e le lesioni metastatiche].

Negli ultimi tre decenni, gli scienziati di tutto il mondo hanno reso un'ineguagliabile ricchezza di informazioni per comprendere i m....

Protocollo

I protocolli per gli esperimenti sugli animali sono stati approvati dal comitato di utilizzo presso il Methodist Research Institute di Houston e istituzionali Animal Care ed effettuati secondo tutte le norme, leggi, linee guida e politiche.

1. ratto polmone Harvest

1. Anestetizzare un ratto Sprague-Dawley maschio a 6-week-old 4 tramite un'iniezione intraperitoneale (IP) di ketamina (100 mg/kg) e xilazina (10 mg/kg) nel suo fianco. Garantire l'anestesia controllando per un'assenza di movimento quando la punta dell'arto viene pizzicata con il forcipe.
2. Dopo 10 min, radere il torace e l'addome e pulire la pelle con un batuffolo....

Risultati

Il polmone raccolto da rat mantiene intatto sistema vascolare e gli alveoli¹¹ (Figura 3A e 3B). Al momento di decellularizzazione, i componenti della matrice extracellulare di un polmone acellulare, quali collagene, fibronectina ed elastina, sono conservati¹¹ (Figura 3, 3D, 3Ee 3F). Il decellularizzazione conduce ad.......

Discussione

Il polmone di 4D ex vivo fornisce un'opportunità per studiare la crescita del tumore e metastasi in un setup del laboratorio. Una matrice di polmone nativo è un sistema complesso che fornisce il supporto al tessuto normale e mantiene le interazioni cellula-cellula, interazioni cellula-matrice, differenziazione cellulare e organizzazione del tessuto. Fornisce l'opportunità di aggiungere qualsiasi componente del microambiente del tumore per studiare gli effetti sulla crescita del tumore e l'interazione con altre c.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Sprague Dowley rat	Harlan	206M	tampone di
clorexidina	Prevantics, NY, USA	NDC 10819-1080-1
agente di eparina	Pharmaceuticals, Schaumburg, IL, USA	NDC 25021-400-10
ago calibro 18	McMaster Carr, USA	75165A249
2-0 cravatta di seta	Ethicon, San Angelo, TX, USA	A305H
Pompa Masterflex L/S	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	EW-07554-80
Testa della pompa Masterflex L/S	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	EW-07519-05
Cartuccia della pompa Masterflex L/S	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	EW-07519-70
Tygon Tube	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	14171211
Tubo della pompa MasterFlex	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	06598-16
Connettori luer lock femmina	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	45508-34	75165A249
Connettori luer lock maschio	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	45513-04
anello in nylon nero	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	EW-45509-04
Set endovenoso	CareFusion	41134E
Sodio Dodecil Solfato (SDS)	Fisher Scientific	CAS151-21-3
Triton X-100	Sigma-Aldrich	X100-1L
Antibiotici	Gibco	15240-062
Ossigenatore siliconico	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	ABW00011	Saint-GoBain-Rete
metallica	1164610105	Lowes	New York Filo
femmina luer Lug Style TEE	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	45508-56
Maschio luer anello di bloccaggio integrale a 200series Barb	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	45518-08
Femmina luer stile filettatura accoppiatore	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	45508-22
Connettore clave	ICU Medical	11956
Hi-Flo & commercio; Rubinetto a 4 vie con luer lock maschio girevole	smith Medical	MX9341L
MasterFlex Pump tube	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	06598-13	per cannula

maschile