Qui, descriviamo un metodo per l'isolamento, espansione e differenziazione delle cellule staminali mesenchimali da tessuto ovarico canino.
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Articolo metodologico
Derivazione e differenziazione delle cellule mesenchimali ovarico canini
In questo articolo
Sommario
Abstract
Interesse in cellule staminali mesenchimali (MSCs) è aumentato nell'ultimo decennio grazie alla loro facilità di isolamento, espansione e cultura. Recentemente, gli studi hanno dimostrato la capacità di vasta differenziazione che queste cellule possiedono. Ovaia rappresenta un candidato di promessa per le terapie basate sulle cellule dovuto al fatto che è ricco di MSCs e che viene spesso ignorata dopo interventi chirurgici ovariectomia come rifiuti biologici. Questo articolo vengono descritte le procedure per l'isolamento, espansione e differenziazione di cellule staminali mesenchimali derivate dall'ovaia canino, senza la necessità di ordinamento delle cellule tecniche. Questo protocollo rappresenta un importante strumento per la medicina rigenerativa a causa l'ampia applicabilità di queste cellule altamente differenziabile in studi clinici e usi terapeutici.
Introduzione
Il numero degli studi pubblicati che lo stato attivo sulle cellule staminali è aumentato notevolmente nell'ultimo decennio, uno sforzo di ricerca che è stato alimentato dall'obiettivo collettivo di scoprire terapie potente medicina rigenerativa. Le cellule staminali hanno due marcatori definizione primari: auto - rinnovamento e differenziazione. Cellule staminali mesenchimali sono responsabili del suo fatturato regolare del tessuto e hanno una più limitata capacità di differenziazione rispetto alle cellule staminali embrionali1. Recentemente, molti studi hanno dimostrato una vasta gamma di differenziazione di cellule staminali mesenchimali, e u....
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Protocollo
Questo esperimento è stato effettuato con le ovaie di quattro cani femminili ibridi ha donati dopo chirurgia elettiva in un programma di sterilizzazione canini. Questo esperimento è stato approvato dal comitato etico sull'uso degli animali di UNESP-FCAV (protocollo n. 026991/13).
1. preparazione sperimentale
- Preparare o acquistare 500 mL di soluzione tampone fosfato sterile di Dulbecco (DPBS) senza calcio o magnesio.
- Preparare una collagenasi stock soluzione mescolando 40 µ g di enzima in 1 mL di DPBS. Filtrare usando un filtro di siringa 0,2 µm e conservare le 2 mL aliquote a-20 ° C.
- Preparare i terreni di col....
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Risultati
Isolamento di cellule staminali mesenchimali da ovaio canino:
La procedura di isolamento MSC ovarica è riassunto nella Figura 1. Dopo chirurgia, tessuto tritacarne, digestione della collagenosi e un cambiamento di media 3 h dopo l'inizio della cultura, una popolazione di MSC putativa con rapida plastica-adesivo proprietà era correttamente isolata da tessuto ovarico .......
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Discussione
Qui forniamo la prova che MSCs possono essere isolate da tessuto ovarico canino, che è considerato un rifiuto biologico dopo l'ovariectomia. Dovuto al fatto che molti tipi di cellule possono essere trovati nell'ovaia, abbiamo proposto un protocollo per selezionare MSCs basato sulla loro aderenza rapida alla plastica, che ha selezionato correttamente le cellule che si è sviluppato in un monostrato con una morfologia di fibroblasto-come.
Il primo rapporto della derivazione di cellule staminali m.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Ringraziamenti
Gli autori riconoscono il programma di sterilizzazione canina a UNESP-FCAV per aver gentilmente fornito le ovaie. Questo lavoro è stato sostenuto da sovvenzioni da FAPESP (processo n. 2013/14293-0) e mantelle.
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| DPBS | Thermo Fisher | 14190144 | |
| Collagenase I | Thermo Fisher | 17100017 | |
| Pallone per fazzoletti | Corning | CLS3056 | |
| DMEM a basso contenuto di glucosio | Thermo Fisher | 11054020 | |
| FBS | Thermo Fisher | 12484-010 | |
| TrypLE express | Thermo Fisher | 12604021 | |
| StemPro Kit di differenziazione per l'adipogenesi | Thermo Fisher | A1007001 | |
| StemPro Kit per la differenziazione della condrogenesi | Thermo Fisher | A1007101 | |
| StemPro Kit per la differenziazione dell'osteogenesi | Thermo Fisher | A1007201 | |
| STEMdiff Kit per endoderma definitivo | StemCell | 5110 | |
| Penicillina-Streptomicina | Thermo Fisher | 15070063 | |
| CD45 | AbD Serotec | MCA 2035S | |
| CD34 | AbD Serotec | MCA 2411GA | |
| CD90 | AbD Serotec | MCA 1036G | |
| CD44 | AbD Serotec | MCA 1041 | |
| Nestin | Milipore | MAB353 | |
| β-Tubulina | Milipore | MAB1637 | |
| DDX4 | Invitrogen | PA5 -23378 | |
| IgG- FITC | AbD Serotec | STAR80F | |
| IgG- FITC | AbD Serotec | STAR120F |
Riferimenti
- Gazit, Z., Pelled, G., Sheyn, D., Kimelman, N., Gazit, D. Mesenchymal stem cells. Handbook of Stem Cells (2nd Edition). Atala, A., Lanza, R. , Academic Press. 513-527 (2013).
- Zipori, D. The nature of stem cells: state rather than entity. Nature Reviews Genetics. 5 (11), 873-878 (2004).
- Auersperg, N., Wong....
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Ristampe e permessi
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