pT3N0M0 गैस्ट्रिक कैंसर ऊतक के पैराफिन-एम्बेडेड स्लाइड पर लोचदार दाग
Summary
यहाँ, हम लोचदार धुंधला का एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करने के लिए pT3N0M0 गैस्ट्रिक कैंसर के ऊतकों में लोचदार फाइबर की पहचान formalin-फिक्स्ड, पैराफिन-एम्बेडेड वर्गों पर. बाद में, हम यह निर्धारित करने के लिए एक विधि का वर्णन करते हैं कि ट्यूमर कोशिकाएं लोचदार पटल से परे आक्रमण करती हैं या नहीं।
Abstract
लोचदार पटल, जो आमतौर पर उप-मेसोथेलियल परत में स्थित है, peritoneum mesothelial कोशिकाओं के निकट, हेमाटॉक्सिलिन और ईओसिन (एच एंड ई) धुंधला पर उभयरागी है, लेकिन लोचदार धुंधला के माध्यम से कल्पना की जा सकती है। लोचदार धुंधला के महत्वपूर्ण लाभों में से एक यह है कि यह निर्धारित करने के लिए आसान बनाता है कि ट्यूमर कोशिकाओं लोचदार पटल से परे हमला किया है या नहीं। यह peritoneal सतह आक्रमण की हद तक की जांच में मदद करता है, जिससे जठरांत्र कैंसर में pT3 और pT4 चरणों भेद. इस अध्ययन में, हम एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करने के लिए formalin में लोचदार फाइबर की पहचान तय, पैराफिन-एम्बेडेड pT3N0M0 गैस्ट्रिक कैंसर ऊतक वर्गों. हम स्लाइड पर तय 5-m पैराफ़िन वर्गों तैयार करते हैं, और फिर सभी स्लाइड्स को दाग प्रक्रिया के दौरान deparaffinated और rehydrated कर रहे हैं। बाद में, सभी वर्गों पोटेशियम permanganate द्वारा ऑक्सीकरण कर रहे हैं, oxalic एसिड द्वारा विरंजन, लोचदार धुंधला द्वारा दाग, और वान Gieson द्वारा counterstained. अंत में, हम धुंधला के प्रभाव की जांच; लोचदार पटल नीले काले रंग का दाग है और कोलेजन फाइबर लाल दाग रहे हैं, जबकि कैंसर की कोशिकाओं पीले रंग के अलग अलग रंगों में दाग रहे हैं. हम भी विस्तार से कैंसर की कोशिकाओं और लोचदार पटल के बीच स्थितिपरक संबंध निर्धारित करने के लिए इस्तेमाल किया तरीकों का वर्णन. इस विधि सरल है, कम लागत, और लोचदार फाइबर और प्रामाणिक परिणाम के लिए अपनी बकाया चयनात्मकता की वजह से जठरांत्र कैंसर में peritoneal सतह आक्रमण की पहचान में व्यापक रूप से लागू है.
Introduction
ट्यूमर, नोड, और मेटास्टेसिस (टीएनएम) कैंसर स्टेजिंग प्रणाली के अनुसार, पैथोलॉजिकल चरण पीटी 4 में गैस्ट्रिक कैंसर का पूर्वानुमान पीटी3 (8वीं यूआईसीसी/एजेसीसी)1से भी बदतर है। गैस्ट्रिक कैंसर के साथ, प्राथमिक ट्यूमर (पीटी) का वर्गीकरण आमतौर पर ट्यूमर आक्रमण2की गहराई पर निर्भर करता है। पैथोलॉजिकल चरण पीटी 3 गैस्ट्रिक कैंसर को पेशी प्रोपेरिया के माध्यम से सब्सरोसल ऊतकों में कैंसर के हमले के रूप में परिभाषित किया गया है, जबकि पीटी 4 गैस्ट्रिक कैंसर को आंत की सतह के लिए मर्मज्ञ कैंसर के रूप में परिभाषित किया गया है। पर्णामूलक सतह आक्रामकता की उपस्थिति दो अवस्थाओं2में अंतर करने की कुंजी है . हालांकि, क्योंकि peritoneal mesothelial सेल परत बहुत पतली है, यह सर्जरी के दौरान क्षतिग्रस्त हो सकता है, पश्चात उपचार, और निर्धारण3. इसके अलावा, ट्यूमर से संबंधित भड़काऊ परिवर्तन और फाइब्रोसिस peritoneum के सामान्य शरीर रचना विज्ञान को नुकसान पहुंचा सकता है, जो यह बहुत मुश्किल केवल एच एंड ई धुंधला4का उपयोग कर peritoneal सतह आक्रमण का न्याय करने के लिए बनाता है। वर्तमान सहायक निदान विधियों जैसे साइटोलॉजी और इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री सीमित नैदानिक मूल्य5,6 के हैं क्योंकि वे गलत सकारात्मक हैं या कम लागत-प्रभावीता है।
सीरोसल झिल्ली में पेरिटोनम, फुफ्फुस और पेरिकार्डियम शामिल हैं, और यह मेसोथेलियम, बेसमेंट झिल्ली, और एक उप-मेसोथेलियल परत7से बना है। सीरोसल झिल्ली की एक सामान्य हिस्टोलॉजिकल विशेषता मध्यश्लेय कोशिकाओं8,9के निकट उप-मेसोथेलियल परत में एक प्रत्यास्थ पटल की उपस्थिति है। लोचदार पटल एक मजबूत विरोधी हानिकारक क्षमता है और एक वैकल्पिक पूर्वानुमान मार्कर के रूप में सेवा कर सकते हैं अगर mesothelial कोशिकाओं गंभीर ट्यूमर से संबंधित सूजन या फाइब्रोसिस3द्वारा नष्ट कर रहे हैं. लोचदार पटल मुख्य रूप से इलैस्टिन और माइक्रोफाइब्रिल10शामिल हैं, जिन्हें लोचदार दाग द्वारा कल्पना की जा सकती है। लोचदार दाग के उपयोग के पीछे मुख्य कारण यह है कि इलैस्टिन इलैस्टिन समाधान में रेसोर्सिनोल के फेनोलिक समूह के साथ हाइड्रोजन आबंध बनाता है, जिससे लोचदार फाइबर नीले-काले रंग के होते हैं। वान गिसन (वीजी) के बाद दाग के विपरीत , कोलेजन फाइबर लाल और मांसपेशी फाइबर दाग जा सकता है और लाल रक्त कोशिकाओं पीले8दाग जा सकता है,11,12,13.
फेफड़ों के कैंसर के TNM मचान के आठवें संस्करण लोचदार पटल या आंत pleura2की सतह पर एक आक्रमण से परे एक ट्यूमर आक्रमण के रूप में आंत फुफ्फुस आक्रमण (T2) को परिभाषित करता है। कोलोरेक्टल कैंसर पर अध्ययन से पता चला है कि pT3 कोलोरेक्टल कैंसर में लोचदार पटल आक्रमण गरीब prognoses के लिए कारण हो सकता है. कोलोरेक्टल कैंसर के 5 साल के रोग मुक्त और समग्र जीवित रहने की दर भी pT4a13,14,15की तरह साबित हो गया है. लोचदार धुंधला पर हमारे पिछले अध्ययनों के आधार पर, लोचदार पटल आक्रमण pT3 गैस्ट्रिक कैंसर के रोग का पूर्वानुमान पर एक महत्वपूर्ण नकारात्मक प्रभाव पाया गया है और pT4a गैस्ट्रिक कैंसर12के रूप में उसी तरह से इलाज किया जाना चाहिए. इसलिए, इस सरल और लागत प्रभावी विधि एच एंड ई धुंधला के माध्यम से प्राप्त परिणामों में अनिश्चितता को खत्म करने में मदद कर सकते हैं, और अन्य सहायक निदान विधियों के साथ जुड़े अन्य आम सीमाओं, साइटोलॉजी और इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री सहित, के बीच दूसरों. इस विधि कुशलता पूर्वक जठरांत्र कैंसर के peritoneal सतह हमलों का निदान करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, विशेष रूप से कुछ अस्पष्ट मामलों में. यह सुविधाजनक है क्योंकि एच एंड ई दाग और अन्य दाग आमतौर पर इस तरह के हमलों की पहचान करने के लिए मुश्किल बनाते हैं। यह विधि भी परिणामकी विश्वसनीयता सुनिश्चित करता है क्योंकि यह बहुत ही चयनात्मक है, विशेष रूप से लोचदार फाइबर के लिए. यहाँ, हम लोचदार धुंधला आचरण निर्धारित करने के लिए कि क्या ट्यूमर कोशिकाओं pT3N0M0 गैस्ट्रिक कैंसर12में लोचदार पटल पर हमला किया है.
इस विधि formalin-फिक्स्ड, पैराफिन-एम्बेडेड वर्गों पर ऊतकों में लोचदार फाइबर की पहचान करने के लिए प्रयोग किया जाता है, और जमे हुए वर्गों के लिए भी इस्तेमाल किया जा सकता है। यहाँ, हम सेलुलर और ऊतक आकारिकी का सबसे अच्छा रखरखाव के लिए पैराफिन-एम्बेडेड वर्गों का चयन करें। इस प्रोटोकॉल में सभी कदम कमरे के तापमान पर जगह ले. एक वाणिज्यिक धुंधला किट जिसमें पोटेशियम परमैंगनेट समाधान, ऑक्सालिक एसिड समाधान, एक इलैस्टिन समाधान, और एक वान गिसन के समाधान का उपयोग प्रस्तुत अध्ययन में किया जाता है।
Protocol
Representative Results
Discussion
यहाँ प्रस्तावित इस विधि subserosal लोचदार पटल की पहचान करने के लिए एक सटीक दृष्टिकोण प्रदान करता है. विधि का मूल्यांकन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है कि क्या ट्यूमर कोशिकाओं pT3N0M0 गैस्ट्रिक कैंसर12</s…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
लेखकों राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (NO.81401902 और NO.81501992) और हुनान प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (NO.2017SK2134, NO.2018JJ2238) से भाग में समर्थन धन्यवाद. पांडुलिपि गुआंग लेई द्वारा लिखा गया है। पूरा प्रयोग गुआंग लेई और हैयान यांग द्वारा किया जाता है। लेखक पैथोलॉजिस्ट और रोगियों के डेटा का पालन करने वाले साथियों की सहायता का धन्यवाद करते हैं।
Materials
| Elastin-Van Gieson staining kit | Baso | BA4083B | Used for staining of elastic fibers, collagen fibers and myofibers |
| Permount TM Mounting Medium | MXB Biotechnologies | DAB-0033 | Used for mounting |
| Ethanol | LMAI Bio | LM64-17-5 | 100% |
| Xylene | LMAI Bio | LX820585 |
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