Staining élastique sur les diapositives intégrées à la paraffine du tissu du cancer gastrique pT3N0M0
Summary
Ici, nous présentons un protocole de coloration élastique pour identifier les fibres élastiques dans les tissus gastriques de cancer pT3N0M0 sur les sections formalin-fixes et paraffines-incorporées. Par la suite, nous décrivons une méthode pour déterminer si les cellules de tumeur envahissent au-delà de la lame élastique.
Abstract
La lame élastique, qui est habituellement située dans la couche sous-mésothéliale, adjacente aux cellules méthéliales du péritoine, est amphiphile sur l’hématoxylin et l’éosine (H et E) coloration, mais peut être visualisé par coloration élastique. Un des avantages importants de la coloration élastique est qu’il est facile de déterminer si les cellules tumorales ont envahi au-delà de la lame élastique. Ceci aide en examinant l’ampleur de l’invasion de surface péritonéale, distinguant de ce fait les étapes de pT3 et de pT4 dans le cancer gastro-intestinal. Dans cette étude, nous présentons un protocole pour identifier les fibres élastiques dans les sections de tissu gastrique de cancer pT3N0M0 formalin-fixes et paraffin-incorporées. Nous préparons des sections de paraffine de 5 m fixées sur des diapositives, puis toutes les diapositives sont déparaffinées et réhydratées pendant la procédure de coloration. Par la suite, toutes les sections sont oxydées par le permanganate de potassium, blanchies par l’acide oxalique, tachées par des taches élastiques, et contre-tachées par Van Gieson. Enfin, nous examinons l’effet de la coloration; la lame élastique est teintée bleu-noir et les fibres de collagène sont tachées en rouge, tandis que les cellules cancéreuses sont tachées dans différentes nuances de jaune. Nous décrivons également en détail les méthodes utilisées pour déterminer la relation positionnelle entre les cellules cancéreuses et les lames élastiques. Cette méthode est simple, peu coûteuse, et largement applicable dans l’identification de l’invasion de surface péritonéale dans le cancer gastro-intestinal en raison de sa sélectivité exceptionnelle pour des fibres élastiques et des résultats authentiques.
Introduction
Selon le système de stadification du cancer de la tumeur, du nœud et de la métastase (TNM), le pronostic du cancer gastrique au stade pathologique pT4 est nettement pire que celui du pT3 (8e UICC/AJCC)1. Avec le cancer gastrique, la classification de la tumeur primaire(pT) dépend habituellement de la profondeur de l’invasion de tumeur 2. Le cancer gastrique pathologique de stade pT3 est défini comme le cancer envahissant par le propria de muscularis dans les tissus subserosal, alors que le cancer gastrique de pT4 est défini comme cancer pénétrant à la surface du péritoine viscéral. La présence de l’invasivité péritonéale de surface est la clé pour distinguer les deux étapes2. Cependant, parce que la couche mésothéliale péritonéale de cellules est très mince,elle pourrait être endommagée pendant la chirurgie, le traitement postopératoire, et la fixation 3. En outre, les changements inflammatoires liés aux tumeurs et la fibrose peuvent endommager l’anatomie normale du péritoine, ce qui rend très difficile de juger avec précision l’invasion de surface péritonéale en utilisant seulement la coloration de H et E4. Les méthodes actuelles de diagnostic auxiliaire telles que la cytologie et l’immunohistochimie sont d’une valeur diagnostique limitée5,6 parce qu’elles sont faussement positives ou ont un faible rapport coût-efficacité.
La membrane sérosale comprend le péritoine, la pleuréson et le péricarde, et est composée du mésothélium, d’une membrane de sous-sol et d’une couche sous-mésothéliale7. Une caractéristique histologique commune de la membrane sérosale est la présence d’une lame élastique dans la couche sous-mésothéliale, adjacente aux cellules mésothéliales8,9. La lame élastique a une forte capacité anti-damaging et peut servir de marqueur pronostique alternatif si les cellules mésothéliales sont détruites par l’inflammation ou la fibrose liée à la tumeur grave3. Lalame élastique se compose principalement d’élastine et de microfibril10, qui peut être visualisé par coloration élastique. La principale raison derrière l’utilisation de la coloration élastique est que l’élastine forme une liaison d’hydrogène avec le groupe phénolique de résorcinol dans la solution d’élastine, causant des fibres élastiques d’être taché bleu-noir. Après Van Gieson (VG) coloration contrastante, fibres de collagène peuvent être tachées rouges et les fibres musculaires et les globules rouges peuvent être tachés jaune8,11,12,13.
La huitième édition de la mise en scène TNM du cancer du poumon définit l’invasion pleurale viscérale (T2) comme une invasion tumorale au-delà de la lame élastique ou une invasion à la surface de la pleura viscérale2. Des études sur le cancer colorectal ont montré que l’invasion élastique de lalame dans le cancer colorectal pT3 peut être la raison de pronostics pauvres. Le taux de survie de 5 ans sans maladie et de survie globale du cancer colorectal ont également été prouvés comme pT4a13,14,15. Basé sur nos études précédentes sur la coloration élastique, l’invasion élastique de lame s’est avérée pour avoir une influence négative significative sur le pronostic du cancer gastrique de pT3 et devrait être traitée de la même manière que le cancer gastrique de pT4a12. Par conséquent, cette méthode simple et rentable peut aider à éliminer l’incertitude dans les résultats obtenus par la coloration de H et E, et d’autres limitations communes liées à d’autres méthodes auxiliaires de diagnostic, y compris la cytologie et l’immunohistochimie, parmi autres. Cette méthode peut être utilisée efficacement pour diagnostiquer les invasions péritonéales de cancer gastro-intestinal, en particulier dans certains cas ambigus. Il est commode puisque la tache de H et E et d’autres taches rendent habituellement difficile d’identifier de telles invasions. Cette méthode assure également une fiabilité des résultats car elle est très sélective, en particulier pour les fibres élastiques. Ici, nous effectuons la coloration élastique pour déterminer si les cellules de tumeur ont envahi la lame élastique dans le cancer gastrique pT3N0M012.
Cette méthode est utilisée pour identifier les fibres élastiques dans les tissus sur les sections fixées parlaine et paraffines, et peut également être utilisée pour les sections congelées. Ici, nous choisissons des sections intégrées à la paraffine pour le meilleur entretien de la morphologie cellulaire et tissulaire. Toutes les étapes de ce protocole se déroulent à température ambiante. Un kit de coloration commerciale qui comprend une solution de permanganate de potassium, une solution d’acide oxalique, une solution d’élastine, et une solution de Van Gieson est utilisé dans l’étude présentée.
Protocol
Representative Results
Discussion
Cette méthode proposée ici fournit une approche précise pour identifier la lame élastique subserosal. La méthode peut être utilisée pour évaluer si les cellules tumorales ont envahi la lame élastique dans le cancer gastrique pT3N0M012. La lame élastique est rougeâtre dans les sections tachées de H et E, qui ne pourraient pas être facilement distinguées des fibres de collagène, et d’autres méthodes auxiliaires existantes de diagnostic, telles que la cytologie et l’immunohistochimie,…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Les auteurs remercient en partie le soutien de la National Natural Science Foundation (NO.81401902 et NO.81501992) et de la Hunan Natural Science Foundation (NO.2017SK2134, NO.2018JJ2238). Le manuscrit est écrit par Guang Lei. L’expérience entière est réalisée par Guang Lei et Haiyan Yang. Les auteurs remercient l’aide des pathologistes et des boursiers qui suivent les données des patients.
Materials
| Elastin-Van Gieson staining kit | Baso | BA4083B | Used for staining of elastic fibers, collagen fibers and myofibers |
| Permount TM Mounting Medium | MXB Biotechnologies | DAB-0033 | Used for mounting |
| Ethanol | LMAI Bio | LM64-17-5 | 100% |
| Xylene | LMAI Bio | LX820585 |
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