Burada bir iletişim kuralı yerel böbrek hücre dışı matriks (ECM) yapısal ve biyokimyasal kompozisyonu tutulacağı bir böbrek korteks ekstraselüler matrisi elde edilen hidrojel imal etmek mevcut. İmalat süreci ve uygulamaları açıklanmıştır. Son olarak, böbrek özel cep ve doku rejenerasyonu ve Biyomühendislik desteklemek için bu hidrojel kullanarak bir bakış açısı ele alınmıştır.
Hücre dışı matriks (ECM) doku homeostazı korumak için önemli biyofiziksel ve biyokimyasal ipuçları sağlar. Vitro kültür hücre ama fizyolojik davranış hücrelerden temin için gerekli protein ve ligand kompozisyon eksikliği için geçerli sentetik hydrogels güçlü mekanik destek sunuyoruz. Bu el yazması için bir böbrek korteks hidrojel ECM kaynaklı imalat yöntemi uygun mekanik sağlamlık ve destekleyici biyokimyasal kompozisyonu ile açıklar. Hidrojel mekanik homojenizasyon ve decellularized insan böbrek korteks ECM çözücü fabrikasyon olduğunu. Matrix yerli böbrek korteks ECM protein oranları da jelleşme fizyolojik mekanik stiffnesses için izin verirken korur. Hidrojel hangi böbrek korteks kaynaklı hücreleri fizyolojik koşullar altında korunabilir substratı olarak hizmet vermektedir. Ayrıca, hidrojel kompozisyon böbrek hastalıkları gelecekteki çalışma sağlayan bir hastalıklı ortam modellemek için manipüle edilebilir.
Hücre dışı matriks (ECM) doku homeostazı korumak için önemli biyofiziksel ve biyokimyasal ipuçları sağlar. Karmaşık moleküler kompozisyonu doku yapısal ve işlevsel özellikleri düzenler. Yapısal proteinler hücre ile mekansal farkındalık sağlamak ve yapışma ve geçiş1için izin verir. İlişkili ligandlar hücre davranış2denetlemek için hücre yüzey reseptörleri ile etkileşim. Böbrek ECM moleküller olan kompozisyon ve yapısı değişir anatomik konumu, gelişimsel sahne ve hastalık durumu3,4bağlı olarak bir bolluk içerir. ECM karmaşıklığı recapitulating böbrek kaynaklı hücreler içinde vitroeğitim önemli bir yönüdür.
ECM microenvironments çoğaltılıyor önceki girişimleri iskele recellularization yeteneğine oluşturmak için decellularizing bütün doku üzerinde odaklanmıştır. Decellularization Sodyum Lauryl Sülfat (SDS) gibi kimyasal deterjan veya non-iyonik deterjanlar ile gerçekleştirilen ve her iki bütün organ perfüzyon veya daldırma ve ajitasyon yöntemleri5,6,7 kullanır ,8,9,10,11,12,13. Burada sunulan iskele yerel doku ECM bulundu yapısal ve biyokimyasal ipuçları korumak; Ayrıca, recellularization donör özgü hücrelerle Rekonstrüktif Cerrahi14,15,da16,17,18, klinik önemi vardır 19. ancak, bu iskele eksikliği yapısal esneklik ve bu nedenle vitro çalışmalar için kullanılan birçok geçerli aygıtlar ile uyumsuzdur. Bu sınırlamayı aşmak için çok grup daha fazla hydrogels20,21,22,23,24decellularized ECM işleme. Bu hydrogels enjeksiyon kalıplama ve bioink ile uyumlu ve iskele yer hücrelerde decellularized mikrometre ölçekli kayma kısıtlamaları aşmak. Ayrıca, moleküler kompozisyonu ve yerel ECM bulundu oranları3,25korunur. Burada böbrek korteks ECM (kECM) elde edilen bir hidrojel imal etmek bir yöntemi göstermektedir.
Bu iletişim kuralının amacını microenvironment böbrek kortikal bölgesinin çoğaltır hidrojel üretmektir. Böbrek korteks doku hücresel madde kaldırmak için sürekli ajitasyon altında % 1 SDS çözümünde decellularized. SDS doku immünolojik hücresel malzeme6,7,9,26hızlı bir şekilde kaldırmak için onun yetenek nedeniyle decellularize için yaygın olarak kullanılır. KECM sonra mekanik homojenizasyon ve lyophilization5,6,9,11,26bağlıdır. Pepsin ile güçlü bir asit solubilization bir son hidrojel hisse senedi çözüm20,27içinde sonuçlanır. Yapısal için önemli yerli kECM protein desteği ve sinyal iletim3,25korunur. Hidrojel da için bir büyüklük içinde yerel insan böbrek korteks28,29,30gelled. Bu matris hydrogels için diğer matris proteinler karşılaştırıldığında böbrek özel hücre sendika korumak için kullanılan fizyolojik bir ortam sağlar. Ayrıca, matris kompozisyon, örneğin, kollajen eklenmesi manipüle edilebilir-ben modeli hastalığı ortamlara çalışma için böbrek fibrozis ve diğer böbrek hastalıkları31,32.
Matrisler hücre davranış yöneten önemli mekanik ve kimyasal yardımlar sağlayabilirsiniz. Sentetik hydrogels karmaşık 3 boyutlu desenlendirme destekler ancak fizyolojik matris microenvironments içinde bulunan çeşitli hücre dışı yardım sağlamak başarısız edebiliyoruz. Yerel ECM türetilmiş Hydrogels in vivo ve in vitro çalışmalar için ideal malzemelerdir. Önceki çalışmalarda decellularized ECM hydrogels kök hücre35,36</su…
The authors have nothing to disclose.
Yazar Lynn ve Mike Garvey görüntüleme Laboratuvarı kök hücre ve rejeneratif tıp ve LifeCenter Kuzeybatı Enstitüsü’nde kabul etmek istiyorum. Ayrıca mali destek Ulusal Sağlık Enstitüleri hibe, UH2/UH3 TR000504 (için J.H.) ve DP2DK102258 (için Y.Z.), NIH T32 eğitim hibe DK0007467 (R.J.N.) ve Kuzeybatı böbrek merkezleri için sınırsız bir hediye kabul etmek istiyorum Böbrek Araştırma Enstitüsü.
Preparation of Kidney Tissue | |||
5000 mL Beaker | Sigma-Aldrich | Z740589 | |
Sodium Dodecyl Sulfate (SDS) | Sigma-Aldrich | 436143 | |
Sterile H2O | Autoclaved DI H2O | ||
Stir Bar (70 x 10 mm) | Fisher Science | 14-512-128 | |
500 mL Vacuum Filter | VWR | 97066-202 | |
Stir Plate | Sigma-Aldrich | CLS6795420D | |
1000 mL Beaker | Sigma-Aldrich | CLS10031L | |
Forceps | Sigma-Aldrich | F4642 | Any similar forceps may be used |
Scissor-Handle Hemostat Clamp | Sigma-Aldrich | Z168866 | |
Dissecting Scissors | Sigma-Aldrich | Z265977 | |
Scalpel Handle, No. 4 | VWR | 25859-000 | Any similar scalpel handle may be used |
Scalpel Blade, No. 20 | VWR | 25860-020 | Any similar scalpel blade may be used |
Stir Bar (38.1 x 9.5 mm) | Fisher Science | 14-513-52 | |
Absorbent Underpad | VWR | 82020-845 | |
Petri Dish (150 x 25 mm) | Corning | 430597 | |
Autoclavable Biohazard Bag | VWR | 14220-026 | |
Sterile Cell Strainer (40 um) | Fisher Science | 22-363-547 | |
Cell Culture Grade Water | HyClone | SH30529.03 | |
30 mL Freestanding Tube | VWR | 89012-778 | |
Fabrication of ECM Gel | |||
Tissue Homogenizer Machine | Polytron | PCU-20110 | |
Freeze Dryer | Labconco | 7670520 | |
20 mL Glass Scintillation Vials and Cap | Sigma-Aldrich | V7130 | |
Stir Bar (15.9 x 8 mm) | Fisher Science | 14-513-62 | |
Pepsin from Porcine Gastric Mucosa | Sigma-Aldrich | P7012 | |
0.01 N HCl | Sigma-Aldrich | 320331 | Dilute to 0.01 N HCl with cell culuture water |
Kidney ECM Gelation | |||
1 N NaOH (Sterile) | Sigma-Aldrich | 415413 | Dilute to 1 N in cell culture grade water |
Medium 199 | Sigma-Aldrich | M4530 | |
15 mL Conical Tube | ThermoFisher | 339651 | |
Cell Culture Media | ThermoFisher | 11330.032 | Dulbecco's Modified Eagle Medium: Nutrient Mixture F-12 (DMEM/F12) |
Fetal Bovine Serum (FBS) | Gibco | 10082147 | |
Antibiotic-Antimycotic 100X | Life Technologies | 15240-062 | |
Insulin, Transferrin, Selenium, Sodium Pyruvate Solution (ITS-A) 100X | Life Technologies | 51300-044 | |
1 mL Syringe | Sigma-Aldrich | Z192325 | |
Microspatula | Sigma-Aldrich | Z193208 |