Pubertal शुरुआत की पुष्टि करके प्रजनन क्षमता का निर्धारण और चूहों और चूहों में एक प्रजनन परख प्रदर्शन
Summary
कई उपचार और आनुवंशिक उत्परिवर्तनों यौन परिपक्वता और प्रजनन क्षमता के समय को प्रभावित । यह प्रोटोकॉल एक गैर इनवेसिव विधि का वर्णन करने के लिए चूहों और चूहों में pubertal शुरुआत का मूल्यांकन करने से पहले यौन परिपक्व जानवरों में एक प्रजनन अध्ययन की स्थापना ।
Abstract
प्रजनन क्षमता का आकलन एक उपचार या प्रजनन धुरी पर आनुवंशिक हेरफेर के प्रभाव को समझने के लिए महत्वपूर्ण है, यह भी हाइपोथैलेमस-पिट्यूटरी-जननांगों धुरी पद । प्रजनन धुरी पर्यावरण और आंतरिक इनपुट प्रजनन के लिए अनुकूल परिस्थितियों को प्रजनन क्षमता के अनुकूल एक प्रमुख घालमेल है । चूहों और चूहों में एक प्रजनन अध्ययन पर तैयार करने से पहले, यौन परिपक्वता संभावना है कि मनाया प्रजनन phenotypes देरी या अनुपस्थित pubertal शुरुआत के कारण होते हैं बाहर करने के लिए मूल्यांकन किया जाता है. इस प्रोटोकॉल preputial जुदाई के निर्धारण के माध्यम से पुरुषों में pubertal शुरुआत का आकलन करने के लिए एक गैर इनवेसिव दृष्टिकोण का वर्णन, और महिलाओं में योनि खोलने और पहली मद के माध्यम से. यौवन के पूरा होने और यौन परिपक्वता की उपलब्धि की पुष्टि के बाद, एक प्रजनन अध्ययन शुरू किया जा सकता है । प्रक्रिया चूहों और चूहों के लिए इष्टतम प्रजनन शर्तों का वर्णन करता है, कैसे एक प्रजनन अध्ययन स्थापित करने के लिए, और क्या मापदंडों का मूल्यांकन करने के लिए और निर्धारित अगर उपचार या जीन विलोपन प्रजनन क्षमता पर एक प्रभाव है.
Introduction
यौवन के माध्यम से संक्रमण यौन परिपक्वता और प्रजनन क्षमता प्राप्त करने के लिए आवश्यक है । pubertal संक्रमण और वयस्कता में प्रजनन क्षमता के रखरखाव प्रजनन धुरी द्वारा विनियमित है, यह भी हाइपोथैलेमस-पिट्यूटरी-जननांगों अक्ष (चित्रा 1) का कार्यकाल । pubertal शुरुआत और प्रजनन क्षमता के रखरखाव के समय कसकर के रूप में अच्छी तरह से आंतरिक पर्यावरणीय कारकों के वंश और माता पिता1,2के अस्तित्व की संभावना को बढ़ाने के द्वारा विनियमित है । यह प्रोटोकॉल एक गैर इनवेसिव दृष्टिकोण को चूहों और चूहों में pubertal शुरुआत का निर्धारण करने के लिए प्रजनन क्षमता का आकलन करने के लिए एक उर्वरता अध्ययन स्थापित करने से पहले यौन परिपक्वता की पुष्टि प्रदान करता है ।
एक प्रजनन अध्ययन यौन परिपक्व जानवरों में किया जाता है और जानवरों के यौवन के माध्यम से चला गया है के बाद शुरू किया जा सकता है । pubertal शुरुआत करने से पहले, प्रजनन अक्ष quiescent है, और यौन परिपक्वता के प्रमुख चालक, गोनॉडोट्रॉफिन रिलीज हार्मोन (GnRH), अपर्याप्त मात्रा में पिट्यूटरी पर जारी करने के लिए यौवन शुरू (चित्रा 1) है । Pubertal शुरुआत एक जटिल प्रक्रिया है कि औसत उभार में वृद्धि हुई GnRH रिलीज में परिणाम है । GnRH को बढ़ावा देता है luteinizing हार्मोन (LH) और कूप उत्तेजक हार्मोन (FSH) पिट्यूटरी से स्राव, दो हार्मोन जननांगों परिपक्वता और प्रजनन समारोह के लिए आवश्यक (चित्रा 1)3,4,5 .
कम प्रजनन क्षमता में प्रजनन अक्ष परिणाम को अपमान और भी अग्रिम या pubertal शुरुआत में देरी कर सकते हैं । pubertal शुरुआत और प्रजनन क्षमता के समय को प्रभावित करने के लिए जाना जाता शर्तों के अंत में स्रावी बाधित रसायन6,7, वृद्धि हुई/कमी शारीरिक वजन1,8, में परिवर्तन के लिए जोखिम शामिल दिन की लंबाई2,9 और आनुवंशिक उत्परिवर्तनों10,11,12,13,14,15।
यौन परिपक्वता की शुरुआत एक महत्वपूर्ण कदम है कि जरूरत है एक प्रजनन परख स्थापित करने से पहले पूरा हो गया है । preputial जुदाई, योनि खोलने और पहली मद के माध्यम से pubertal शुरुआत का निर्धारण करने के फायदे, इन प्रक्रियाओं के गैर इनवेसिव विशेषताएं हैं, के रूप में वे रक्त संग्रह या पशु16 के बलिदान की आवश्यकता नहीं है, 17. शी.
pubertal शुरुआत के बाद निर्धारित किया जाता है, सही ढंग से एक प्रजनन अध्ययन की स्थापना प्रजनन अक्ष की अखंडता के बारे में महत्वपूर्ण जानकारी प्रदान करेगा, और आम तौर पर आगे के अध्ययन के लिए प्रयोगात्मक पशु पैदा करने का दूसरा लाभ है (शोधन) 18. प्रजनन अध्ययन सेटअप इस प्रोटोकॉल में वर्णित पुरुषों और महिलाओं में प्रजनन क्षमता में दोनों मामूली और बड़े घाटे का पता लगा सकते हैं । मूल्यांकन किया गया मुख्य पैरामीटर 1) पहले कूड़े के लिए समय, 2) एक निश्चित समय सीमा और 3) कूड़े के आकार में उत्पंन कूड़े की संख्या शामिल हैं । अंत में, अध्ययन का पालन करें जो प्रजनन क्षमता के कारण की पहचान करने के लिए आयोजित किया जा सकता है के प्रकार के लिए सिफारिशें शामिल हैं ।
वर्णित प्रोटोकॉल चूहों को संदर्भित करता है और प्रतिनिधि डेटा ट्रांसजेनिक चूहों में किया काम को प्रतिबिंबित. हालांकि, सभी शामिल प्रोटोकॉल चूहों में समान रूप से मान्य हैं.
Protocol
Representative Results
Discussion
चूहों की समग्र भलाई एक सफल प्रजनन परख21के लिए महत्वपूर्ण है । जब एक प्रजनन परख प्रदर्शन, यह शारीरिक रूप से हर दिन चूहों पर जांच के रूप में यह तनाव पैदा कर सकता है महत्वपूर्ण नहीं है । इसके अलावा ल?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
मैं आरंभिक कार्य में योगदान करने वाले लेखकों का धन्यवाद करता हूं जो इस प्रकाशन का आधार है । पांडुलिपि तैयार करने में मदद के लिए Aitor Aguirre, Genevieve ई. रयान और एरिका एल Schoeller के लिए धंयवाद । पांडुलिपि के साथ तकनीकी सहायता के लिए जेसिका सोरा ली और ऑस्टिन चिन के लिए धंयवाद । H.M.H. Eunice कैनेडी श्राइवर नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ चाइल्ड हेल्थ एंड ह्यूमन डेवलपमेंट ऑफ हेल्थ के राष्ट्रीय संस्थानों के पुरस्कार संख्या R00HD084759 के तहत समर्थन किया था ।
Materials
| Sterile Cotton Balls | Fisher | 22456885 | |
| Surface protector | Fisher | 1420637 | |
| Light meter | VWR | 21800-014 | |
| Methylene blue | Sigma-Aldrich | M9140 | |
| Microscope Slides | Genesee Scientific | 29-101 | |
| Optimouse rack with cages | AnimalCare systems | C89100 | |
| Water Bottle Basket | AnimalCare systems | C61011 | |
| Filtered Cage Tops | AnimalCare systems | C78210 | |
| Optimice Standard Feeder | AnimalCare systems | C40100SG | |
| Cage Card Holder | AnimalCare systems | C43251 | |
| Cage Cards | AnimalCare systems | M52010 | |
| Bottle Assambley | AnimalCare systems | C79122P | |
| Bed R'Nest Nesting | The Andersons | BRN4WSR | |
| 1/8" Corn Cob bedding | The Andersons | 8B | |
| Standard mouse chow | Teklad | 7904 (7004) | |
| Scale | VWR | 10205-004 | |
| Polypropylene Beaker | Fisher | 14-955-111F |
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