Determinazione della competenza riproduttiva confermando Inizio puberale e realizzazione di un test di fertilità in topi e ratti
Summary
Molti trattamenti e mutazioni genetiche impatto i tempi della maturità sessuale e la fertilità. Questo protocollo descrive un metodo non invasivo per valutare l’Inizio puberale in topi e ratti prima della creazione di uno studio di fertilità negli animali sessualmente maturi.
Abstract
Valutazione della competenza riproduttiva è fondamentale per comprendere l’impatto di un trattamento o la manipolazione genetica sull’asse riproduttivo, anche definito l’asse ipotalamico-ipofisi-gonadi. L’asse riproduttivo è un integratore di chiave di input ambientali e interni, adattando la fertilità a condizioni favorevoli per la riproduzione. Prima di imbarcarsi su uno studio di fertilità nei topi e nei ratti, la maturità sessuale viene valutata per escludere la possibilità che i fenotipi osservati riproduttivi sono causati da ritardato o assente Inizio puberale. Questo protocollo descrive un approccio non invasivo per valutare Inizio puberale nei maschi attraverso la determinazione di separazione del prepuzio che nelle femmine attraverso l’apertura vaginale e primo estro. Dopo la conferma del completamento della pubertà e il raggiungimento della maturità sessuale, uno studio di fertilità può essere avviato. La procedura descrive le condizioni di allevamento ottimali per topi e ratti, come impostare uno studio di fertilità e i parametri da valutare e determinare se il trattamento o l’omissione del gene ha un impatto sulla fertilità.
Introduction
Per raggiungere la maturità sessuale e riproduttiva competenza è necessaria la transizione attraverso la pubertà. La transizione puberale e il mantenimento della fertilità in età adulta è regolata dall’asse riproduttivo, anche definito l’asse ipotalamico-ipofisi-gonadi (Figura 1). I tempi dell’Inizio puberale e mantenimento della fertilità è strettamente regolati da fattori interni, nonché dell’ambiente per aumentare le probabilità di sopravvivenza della prole e genitori1,2. Questo protocollo fornisce un approccio non invasivo per determinare l’Inizio puberale in topi e ratti per confermare la maturità sessuale prima della creazione di uno studio di fertilità per valutare la competenza riproduttiva.
Uno studio di fertilità viene eseguito negli animali sessualmente maturi e può essere avviato dopo che gli animali sono passati attraverso la pubertà. Prima dell’Inizio puberale, l’asse riproduttivo è quiescente, e il driver della chiave di maturazione sessuale, gonadotropina – releasing hormone (GnRH), viene rilasciato sulla ghiandola pituitaria in quantità insufficiente per iniziare la pubertà (Figura 1). Inizio puberale è un processo complesso che si traduce in un aumentato rilascio di GnRH presso l’eminenza mediana. GnRH promuove l’ormone luteinizzante (LH) e follicolo-stimolante secrezione dell’ormone (FSH) dall’ipofisi, due ormoni essenziali per maturazione gonadica e funzione riproduttiva (Figura 1)3,4,5 .
Insulti all’asse riproduttivo provocare ridotta fertilità e possono anche Inizio puberale di anticipo o ritardo. Condizioni note per influenzare la tempistica dell’Inizio puberale e competenza riproduttiva includono l’esposizione a sostanze chimiche6,7, aumentata/diminuita corpo peso1,8, cambiamenti nel sistema endocrino giorno lunghezza2,9 e mutazioni genetiche10,11,12,13,14,15.
L’inizio della maturità sessuale è un passo fondamentale che deve essere completato prima della creazione di un test di fertilità. I vantaggi della determinazione Inizio puberale attraverso la separazione del prepuzio, apertura vaginale e primo estro, sono le caratteristiche non-invasiva di queste procedure, in quanto non necessitano di raccolta del sangue o sacrificio dell’ animale16, 17.
Dopo Inizio puberale è determinato, impostare correttamente da uno studio di fertilità fornirà importanti informazioni circa l’integrità dell’asse riproduttivo e di solito ha il secondo vantaggio di generare animali da esperimento per ulteriori studi (perfezionamento) 18. l’installazione di studio di fertilità descritto nel presente protocollo in grado di rilevare i deficit maggiori e minori in termini di competenza riproduttivo nei maschi e nelle femmine. Principali parametri valutati comprendono 1) tempo per la prima cucciolata, 2) numero di cucciolate generate in un determinato lasso di tempo e 3) lettiera le dimensioni. Infine, consigli per il tipo di follow-up studi che possono essere condotti per identificare la causa della compromissione della fertilità sono inclusi.
Il protocollo descritto si riferisce ai topi e i dati rappresentativi riflettono il lavoro svolto in topi transgenici. Tuttavia, tutti i protocolli inclusi sono ugualmente validi in ratti.
Protocol
Representative Results
Discussion
Il benessere generale dei topi è critico per un test di fertilità successo21. Quando si esegue un test di fertilità, è importante controllare non fisicamente sui topi ogni giorno come questo può causare stress. Evitare ulteriori modifiche frequenti gabbia, come questi sono anche stressanti. Idealmente le modifiche gabbia saranno fatto non più di 1 – 2 volte alla settimana. L’esposizione alla luce durante la fase scura influisce negativamente sulle allevamento nei roditori notturni. Non accen…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ringrazio gli autori che contribuiscono al lavoro iniziale che è alla base di questa pubblicazione. Grazie a Aitor Aguirre, Genevieve E. Ryan ed Erica L. Schoeller per aiuto preparazione del manoscritto. Grazie a Jessica Sora Lee e Austin Chin per assistenza tecnica con il manoscritto. H.M.H è stato sostenuto da Eunice Kennedy Shriver National Institute of Child Health & sviluppo umano dei National Institutes of Health, sotto Premio numero R00HD084759.
Materials
| Sterile Cotton Balls | Fisher | 22456885 | |
| Surface protector | Fisher | 1420637 | |
| Light meter | VWR | 21800-014 | |
| Methylene blue | Sigma-Aldrich | M9140 | |
| Microscope Slides | Genesee Scientific | 29-101 | |
| Optimouse rack with cages | AnimalCare systems | C89100 | |
| Water Bottle Basket | AnimalCare systems | C61011 | |
| Filtered Cage Tops | AnimalCare systems | C78210 | |
| Optimice Standard Feeder | AnimalCare systems | C40100SG | |
| Cage Card Holder | AnimalCare systems | C43251 | |
| Cage Cards | AnimalCare systems | M52010 | |
| Bottle Assambley | AnimalCare systems | C79122P | |
| Bed R'Nest Nesting | The Andersons | BRN4WSR | |
| 1/8" Corn Cob bedding | The Andersons | 8B | |
| Standard mouse chow | Teklad | 7904 (7004) | |
| Scale | VWR | 10205-004 | |
| Polypropylene Beaker | Fisher | 14-955-111F |
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