Molti trattamenti e mutazioni genetiche impatto i tempi della maturità sessuale e la fertilità. Questo protocollo descrive un metodo non invasivo per valutare l'Inizio puberale in topi e ratti prima della creazione di uno studio di fertilità negli animali sessualmente maturi.
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Articolo metodologico
Determinazione della competenza riproduttiva confermando Inizio puberale e realizzazione di un test di fertilità in topi e ratti
In questo articolo
Sommario
Abstract
Valutazione della competenza riproduttiva è fondamentale per comprendere l'impatto di un trattamento o la manipolazione genetica sull'asse riproduttivo, anche definito l'asse ipotalamico-ipofisi-gonadi. L'asse riproduttivo è un integratore di chiave di input ambientali e interni, adattando la fertilità a condizioni favorevoli per la riproduzione. Prima di imbarcarsi su uno studio di fertilità nei topi e nei ratti, la maturità sessuale viene valutata per escludere la possibilità che i fenotipi osservati riproduttivi sono causati da ritardato o assente Inizio puberale. Questo protocollo descrive un approccio non invasivo per valutare Inizio puberale nei maschi attraverso la determinazione di separazione del prepuzio che nelle femmine attraverso l'apertura vaginale e primo estro. Dopo la conferma del completamento della pubertà e il raggiungimento della maturità sessuale, uno studio di fertilità può essere avviato. La procedura descrive le condizioni di allevamento ottimali per topi e ratti, come impostare uno studio di fertilità e i parametri da valutare e determinare se il trattamento o l'omissione del gene ha un impatto sulla fertilità.
Introduzione
Per raggiungere la maturità sessuale e riproduttiva competenza è necessaria la transizione attraverso la pubertà. La transizione puberale e il mantenimento della fertilità in età adulta è regolata dall'asse riproduttivo, anche definito l'asse ipotalamico-ipofisi-gonadi (Figura 1). I tempi dell'Inizio puberale e mantenimento della fertilità è strettamente regolati da fattori interni, nonché dell'ambiente per aumentare le probabilità di sopravvivenza della prole e genitori1,2. Questo protocollo fornisce un approccio non invasivo per determinare l'Inizio puberale in topi e ratti per ....
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Protocollo
Tutti i metodi descritti qui sono stati approvati dal istituzionale Animal Care e uso Comitato della Michigan State University e condotti in conformità con la guida per la cura e l'uso di animali da laboratorio.
1. determinare Inizio puberale
- Seguire le linee guida istituzionali per l'abbigliamento, come minimo, è necessario indossare un camice da laboratorio pulito e guanti puliti. Maneggiare sempre topi indossando guanti puliti.
- Preparare l'area di lavoro posizionando un pad sul tavolo.
- Posizionare un top di gabbia pulita del mouse con la griglia rivolta verso l'alto sul pad.
- Impostare una scala nell....
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Risultati
I risultati presentati derivano da due modelli di topi transgenici differenti dove il fattore trascrizione anteriore ventrale homeobox 1 (Vax1) è stato eliminato in tutto il corpo su un allele, qui indicato come heterozygote topi (HET)13, o Vax1 è stato eliminato in modo condizionale all'interno di GnRH neuroni22, qui chiamato condizionale KO (cKO). Prima di impostare lo studio di fertilità, è importante confermare l'Inizio.......
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Discussione
Il benessere generale dei topi è critico per un test di fertilità successo21. Quando si esegue un test di fertilità, è importante controllare non fisicamente sui topi ogni giorno come questo può causare stress. Evitare ulteriori modifiche frequenti gabbia, come questi sono anche stressanti. Idealmente le modifiche gabbia saranno fatto non più di 1 - 2 volte alla settimana. L'esposizione alla luce durante la fase scura influisce negativamente sulle allevamento nei roditori notturni. Non accendere l.......
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Dichiarazioni
L'autore non ha nulla di divulgare.
Ringraziamenti
Ringrazio gli autori che contribuiscono al lavoro iniziale che è alla base di questa pubblicazione. Grazie a Aitor Aguirre, Genevieve E. Ryan ed Erica L. Schoeller per aiuto preparazione del manoscritto. Grazie a Jessica Sora Lee e Austin Chin per assistenza tecnica con il manoscritto. H.M.H è stato sostenuto da Eunice Kennedy Shriver National Institute of Child Health & sviluppo umano dei National Institutes of Health, sotto Premio numero R00HD084759.
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Batuffoli di cotone sterili | Fisher | 22456885 | |
| Protezione di superficie | Fisher | 1420637 | |
| Esposimetro | VWR | 21800-014 | |
| Blu di metilene | Sigma-Aldrich | M9140 | |
| Vetrini per microscopio | Genesee Scientific | 29-101 | |
| Rack Optimouse con gabbie | AnimalCare systems | C89100 | |
| Cestino per bottiglie d'acqua | Sistemi AnimalCare | C61011 | |
| Cime delle gabbie filtrate | Sistemi AnimalCare | C78210 | |
| Optimice Standard Feeder | Sistemi AnimalCare Sistemi | C40100SG | |
| Gabbia Porta Schede | AnimalCare Sistemi | C43251 | |
| Schede Gabbie | Sistemi AnimalCare | M52010 | |
| Bottiglia Assambley | Sistemi AnimalCare | ||
| Letto R'Nest Nidificazione | The Andersons | BRN4WSR | |
| 1/8" Corn Cob lettiera | The Andersons | 8B | |
| Standard mouse chow | Teklad | 7904 (7004) | |
| Scala | VWR | 10205-004 | |
| Polipropilene Becher | Fisher | 14-955-111F |
Riferimenti
- Schneider, J. E. Energy balance and reproduction. Physiology and Behavior. 81 (2), 289-317 (2004).
- Walton, J. C., Weil, Z. M., Nelson, R. J. Influence of photoperiod on hormones, behavior, and immune function. Frontiers Neuroendocrinology. 32 (3), 303-319 (2....
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Ristampe e permessi
