Многие процедуры и генетические мутации влияют сроки половой зрелости и плодородия. Этот протокол описывает неинвазивный метод для оценки начала полового созревания в мышей и крыс до создания исследование фертильности в половозрелых животных.
Оценка компетентности репродуктивного имеет решающее значение для понимания воздействия лечения или генетические манипуляции на оси репродуктивного, также называют гипоталамо гипофизарно гонадной оси. Репродуктивного ось является ключевым интегратор окружающей и внутренней ввода адаптации рождаемости благоприятные условия для размножения. Прежде чем приступать к исследование фертильности у мышей и крыс, половой зрелости оценивается исключить возможность того, что наблюдаемое репродуктивного фенотипов, вызванных задержкой или отсутствует пубертатном начала. Этот протокол описывает неинвазивная подход к оценке пубертатном начала в мужчины через определение препуция разделения и женщин через влагалище и первая течка. После подтверждения завершения полового созревания и достижения половой зрелости может быть начато исследование фертильности. Процедура описывает условия оптимального размножения для мышей и крыс, как настроить исследование фертильности и какие параметры, чтобы оценить и определить, если лечение или удаление ген влияет на фертильность.
Для достижения половой зрелости и репродуктивного компетенции требуется переходного периода полового созревания. Пубертатном переходного периода и поддержания плодородия в зрелом возрасте регулируется репродуктивного оси, также называют гипоталамо гипофизарно гонадной оси (рис. 1). Сроки наступления полового созревания и поддержания плодородия жестко регулируется как внутренних, так и экологических факторов, чтобы увеличить шансы на выживание потомства и родители1,2. Этот протокол обеспечивает неинвазивная подход для определения начала полового созревания в мышей и крыс для подтверждения половой зрелости до создания плодородия исследование для оценки репродуктивного компетенции.
Исследование фертильности проводится в половозрелых животных и может быть начато после животные прошли через полового созревания. До начала полового созревания оси репродуктивного покоя, и ключевым фактором полового созревания, гонадолиберин (GnRH), выпускается на гипофиза в недостаточной суммы для начала полового созревания (рис. 1). Наступления полового созревания — сложный процесс, который приводит к увеличению выпуска GnRH на средний возвышение. ГнРГ способствует лютеинизирующего гормона (ЛГ) и фолликулостимулирующего гормона (ФСГ) из гипофиза, два гормоны, гонадной созревания и репродуктивной функции (рис. 1)3,4,5 .
Оскорбления к оси репродуктивного приведет снижение фертильности и может также заранее или задержки начала полового созревания. Условия, знаны, что влияют на сроки начала полового и репродуктивного компетенции включают в себя воздействие на эндокринную, нарушая химических веществ6,7, увеличение/уменьшение тела вес1,8, изменения в 2,длина день9 и генетические мутации10,11,12,13,14,15.
Наступления половой зрелости является важным шагом, который необходимо выполнить до настройки анализа фертильности. Преимущества определения пубертатном начала через препуция разделения, влагалище и первой течки, являются неинвазивные характеристики этих процедур, как они не требуют сбора крови или жертвоприношения животных16, 17.
После начала полового созревания определяется, правильно исследование фертильности обеспечит важную информацию о целостности репродуктивного оси и обычно имеет второе преимущество создания экспериментальных животных для дальнейшего исследования (уточнение) 18. установки исследование фертильности, указанных в настоящем Протоколе может обнаруживать мелкие и крупные дефициты в репродуктивных компетенции у самцов и самок. Основные параметры оценки включают в себя 1) время первый помет, 2) количество пометов, сгенерирована заданного размера сроки и 3) помет. Наконец включены рекомендации для типа последующих исследований, которые могут проводиться для определения причины ухудшения плодородия.
Описывается протокол относится к мышей и репрезентативных данных отражают работу у трансгенных мышей. Однако все включенные протоколы одинаково допустимы в крыс.
Общее самочувствие мышей имеет решающее значение для успешного плодородия пробирного21. При выполнении анализа фертильности, важно не физически проверить на мышей каждый день, как это может вызвать стресс. Далее Избегайте частых Кейдж изменения, как они также напряженный. …
The authors have nothing to disclose.
Я благодарю авторов первоначальной работы, которая является основой этого издания. Благодаря Aitor Aguirre, Женевьев э. Райан и Эрика л Schoeller за помощь в подготовке рукописи. Благодаря ли Джессика Сора и Остин Чин для оказания технической помощи с рукописью. H.M.H. была поддержана Юнис Кеннеди Шрайвер национального института здоровья ребенка и развития человеческого потенциала национальных институтов здоровья под награду номер R00HD084759.
Sterile Cotton Balls | Fisher | 22456885 | |
Surface protector | Fisher | 1420637 | |
Light meter | VWR | 21800-014 | |
Methylene blue | Sigma-Aldrich | M9140 | |
Microscope Slides | Genesee Scientific | 29-101 | |
Optimouse rack with cages | AnimalCare systems | C89100 | |
Water Bottle Basket | AnimalCare systems | C61011 | |
Filtered Cage Tops | AnimalCare systems | C78210 | |
Optimice Standard Feeder | AnimalCare systems | C40100SG | |
Cage Card Holder | AnimalCare systems | C43251 | |
Cage Cards | AnimalCare systems | M52010 | |
Bottle Assambley | AnimalCare systems | C79122P | |
Bed R'Nest Nesting | The Andersons | BRN4WSR | |
1/8" Corn Cob bedding | The Andersons | 8B | |
Standard mouse chow | Teklad | 7904 (7004) | |
Scale | VWR | 10205-004 | |
Polypropylene Beaker | Fisher | 14-955-111F |