Determinación de la capacidad reproductiva por confirmar Inicio puberal y de realizar un análisis de fertilidad en ratones y ratas
Summary
Muchos tratamientos y mutaciones genéticas influyen en la sincronización de la madurez sexual y la fertilidad. Este protocolo describe un método no invasivo para evaluar el inicio puberal en ratones y ratas antes de establecer un estudio de fertilidad en animales sexualmente maduros.
Abstract
Evaluación de la capacidad reproductiva es fundamental para entender el impacto de un tratamiento o manipulación genética en el eje reproductivo, que también se denomina el eje hipotalámico-pituitario-gonadal. El eje reproductivo es un integrador clave de entrada ambiental e interna adaptándose a las condiciones favorables para la reproducción de la fertilidad. Antes de embarcarse en un estudio de fertilidad en ratones y ratas, la madurez sexual se evalúa para excluir la posibilidad de que los fenotipos reproductivos observados son ocasionados por retraso o ausencia de inicio puberal. Este protocolo describe un enfoque no invasivo para determinar el inicio puberal en varones a través de la determinación de separación prepucial y en las hembras a través de la abertura vaginal y el primer estro. Después de la confirmación de la terminación de la pubertad y el logro de la madurez sexual, se puede iniciar un estudio de fertilidad. El procedimiento describe las condiciones de crianza óptimo para ratones y ratas, cómo montar un estudio de fertilidad y qué parámetros para evaluar y determinar si el tratamiento o la canceladura del gene tiene un impacto sobre la fertilidad.
Introduction
La transición a través de la pubertad es necesaria para alcanzar la madurez sexual y capacidad reproductiva. La transición de la pubertad y el mantenimiento de la fertilidad en la edad adulta está regulada por el eje reproductivo, también se denomina el eje hipotalámico-pituitario-gonadal (figura 1). El momento del inicio puberal y mantenimiento de la fertilidad es estrictamente regulados por factores internos como ambientales para aumentar las posibilidades de supervivencia de crías y padres1,2. Este protocolo proporciona un enfoque no invasivo para determinar el inicio puberal en ratones y ratas para confirmar la madurez sexual antes de la creación de un estudio de fertilidad para evaluar competencia reproductiva.
Un estudio de fertilidad se realiza en animales sexualmente maduros y puede iniciarse después de que los animales han pasado por la pubertad. Antes del inicio puberal, el eje reproductivo está quieto, y el factor clave de la maduración sexual, hormona liberadora de gonadotropina (GnRH), se libera en la hipófisis en cantidades suficientes para iniciar la pubertad (figura 1). Inicio puberal es un proceso complejo que resulta en mayor liberación de GnRH en la eminencia media. Promueve la GnRH hormona luteinizante (LH) y folículo estimulante (FSH) hormona de la pituitaria, dos hormonas esenciales para la maduración gonadal y función reproductiva (figura 1)3,4,5 .
Insultos al eje reproductivo como resultado fertilidad reducida y pueden también avance o retardo de inicio puberal. Condiciones que influyen en el momento del inicio puberal y competencia reproductiva incluyen la exposición a la endocrina interrumpir productos químicos6,7, cuerpo de aumentar o disminuir peso1,8, cambios en día largo2,9 y mutaciones genéticas10,11,12,13,14,15.
El inicio de la madurez sexual es un paso crítico que necesita ser completada antes de la creación de un análisis de fertilidad. Las ventajas de determinar el inicio puberal, a través de separación prepucial, la abertura vaginal y el primer estro, son las características no-invasiva de estos procedimientos, ya que no requieren sangre o sacrificio de los animales16, 17.
Después se determina el inicio puberal, correctamente un estudio de fertilidad proporcionará información importante sobre la integridad del eje reproductivo y tiene generalmente la segunda ventaja de generar animales experimentales para estudios posteriores (refinamiento) 18. la configuración del estudio de fertilidad se describe en este protocolo puede detectar déficits mayores y menores en capacidad reproductiva en machos y hembras. Principales parámetros evaluados incluyen 1) vez a la primera camada, 2) el número de camadas que se generan en un determinado marco de tiempo y 3) camada tamaño. Por último, se incluyen recomendaciones para el tipo de seguimiento de los estudios que pueden realizarse para identificar la causa del deterioro de la fertilidad.
El protocolo descrito se refiere a los ratones y los datos representativos reflejan el trabajo realizado en ratones transgénicos. Sin embargo, todos los protocolos incluidos son igualmente válidos en ratas.
Protocol
Representative Results
Discussion
El bienestar general de los ratones es crítico para una fertilidad exitoso ensayo21. Cuando se realiza un análisis de fertilidad, es importante controlar no físicamente en los ratones cada día ya que esto puede causar estrés. Además evitar cambios frecuentes de la jaula, ya que también son estresantes. Idealmente se realizará cambios de jaula no más de 1 – 2 veces por semana. Exposición a la luz durante la fase oscura afecta negativamente la reproducción en roedores nocturnos. No se enc…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Agradezco a los autores que contribuyen a la labor inicial que es la base de esta publicación. Gracias a Aitor Aguirre, Genevieve E. Ryan y Erica L. Schoeller ayuda a preparar el manuscrito. Gracias a Jessica Sora Lee y barbilla de Austin para asistencia técnica con el manuscrito. H.M.H. fue apoyado por Eunice Kennedy Shriver Instituto Nacional de salud infantil y desarrollo humano de los institutos nacionales de salud bajo la concesión número R00HD084759.
Materials
| Sterile Cotton Balls | Fisher | 22456885 | |
| Surface protector | Fisher | 1420637 | |
| Light meter | VWR | 21800-014 | |
| Methylene blue | Sigma-Aldrich | M9140 | |
| Microscope Slides | Genesee Scientific | 29-101 | |
| Optimouse rack with cages | AnimalCare systems | C89100 | |
| Water Bottle Basket | AnimalCare systems | C61011 | |
| Filtered Cage Tops | AnimalCare systems | C78210 | |
| Optimice Standard Feeder | AnimalCare systems | C40100SG | |
| Cage Card Holder | AnimalCare systems | C43251 | |
| Cage Cards | AnimalCare systems | M52010 | |
| Bottle Assambley | AnimalCare systems | C79122P | |
| Bed R'Nest Nesting | The Andersons | BRN4WSR | |
| 1/8" Corn Cob bedding | The Andersons | 8B | |
| Standard mouse chow | Teklad | 7904 (7004) | |
| Scale | VWR | 10205-004 | |
| Polypropylene Beaker | Fisher | 14-955-111F |
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