Descriviamo lo sviluppo di un modello murino di PCOS-come magro con pellet di diidrotestosterone per studiare la fisiopatologia della PCOS e la discendenza da queste dighe di PCOS-come.
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Articolo metodologico
Un modello di Mouse Hyperandrogenic per studiare la sindrome dell'ovaio policistico
In questo articolo
Sommario
Abstract
Iperandrogenismo svolge un ruolo critico nella funzione riproduttiva e metabolica nelle femmine ed è il segno distintivo della sindrome dell'ovaio policistico. Lo sviluppo di un modello di topo PCOS-come magro che imita le donne con PCOS è clinicamente significativo. In questo protocollo, descriviamo un tale modello. Con l'inserimento di una lunghezza di 4 mm di pellet di polvere DHT (diidrotestosterone) cristallo (lunghezza totale di pellet è di 8 mm), e sostituirlo ogni mese, siamo in grado di produrre un modello del mouse di PCOS-come con piega di 2 livelli DHT siero superiore rispetto ai topi non impiantati con DHT (no-DHT). Abbiamo osservato la disfunzione metabolica e riproduttiva senza modificare il peso corporeo e la composizione corporea. Mentre che esibiscono un alto grado di sterilità, un piccolo sottoinsieme di questi topi femminili PCOS-come può rimanere incinto e la loro prole pubertà ritardata e testosterone aumentato di adulti. Questo modello di mouse magra PCOS-come è uno strumento utile per studiare la fisiopatologia della PCOS e la discendenza da queste dighe di PCOS-come.
Introduzione
Iperandrogenismo è il segno distintivo della sindrome dell'ovaio policistico (PCOS) secondo criteri NIH e dell'eccesso dell'androgeno e della società PCOS (AE-PCOS). Le donne con PCOS hanno difficoltà a rimanere incinta e hanno un aumentato rischio di complicazioni di gravidanza1. Anche se sono incinta, loro prole femminile hanno un2,di esiti negativi per la salute3. Modelli animali sono stati sviluppati utilizzando varie strategie4,5,6,7,
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Protocollo
Qui, presentiamo protocolli dettagliati per inserimento e DHT pellet preparazione e per test riproduttivi e metabolici. I topi utilizzati in questo studio erano un fondo misto (C57/B6, CD1, 129Sv) e sono stati mantenuti con cibo e acqua ad libitum in un ciclo luce/buio 14/10 h a 24 ° C nella struttura animale Broadway Research Building presso la Johns Hopkins University School of Medicina. Tutte le procedure sono state approvate dal comitato di uso e cura degli animali di Johns Hopkins University.
1. creare il modello del topo PCOS-come
-
Preparazione di pellet DHT
- Tubi di silastic autoclave per ....
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Risultati
Livelli sierici di DHT e test di tolleranza al glucosio
I livelli di DHT sono stati misurati dal siero raccolto da entrambi ELISA e mediante LC-MS secondo protocollo 1,24-1,25 e 2.9, 3.0. I valori assoluti DHT sono diversi tra spettrometria di massa ed ELISA, tuttavia, la relativa piega (circa 2 volte) di DHT vs no-DHT inserimento è simile in entrambe le analisi e attraverso esperimenti15,
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Discussione
Iperandrogenismo è una caratteristica fondamentale di PCOS. I livelli del siero DHT (due volte più alto nei topi DHT che nei topi no-DHT) utilizzati in questo protocollo sono inferiori a quelli riportati da altri ricercatori in studi precedenti e sono calibrati per imitare proporzionalmente le donne con PCOS5,19, 20,21. A differenza di altri modelli, questo modello DHT 2 volte non altera il pe.......
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Dichiarazioni
Nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato supportato dal National Institutes of Health (sovvenzioni R00-HD068130 a S.W.) e il centro di ricerca del diabete di Baltimora: piloti e fattibilità Grant (a S.W.).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Polvere cristallina 5&alfa;-DHT | Sigma-Aldrich | A8380-1G | |
| Dow Corning Tubi Silastic | Fisher Scientific | 11-189-15D | 0,04 pollici / 1 mm diametro interno x0,085 pollici / 2,15 mm diametro esterno |
| Silicone adesivo medico | Fattore II, InC. | A-100 | |
| Occhiali, camici da laboratorio, guanti e maschere. | |||
| 10 µ L puntali per pipette senza filtro | USA Scientific | 11113700 | |
| Vetrino per striscio | Fisher Scientific | 12-550-003 | |
| Diff Quik per colorazione di cellule | Fisher Scientific | NC9979740 | |
| Lancet | Fisher Scientific | NC9416572 | |
| 3 mL Syring | Becton, Dickinson and Company (BD), | 30985 | |
| ago attaccato: 20 G | BD | 305176 | |
| Righello: qualsiasi lunghezza superiore a 10 cm con scala millimetrica. | |||
| Xilazina | Vet one AnnSeA LA, MWI, Boise | NDC13985-704-10 | 100 mg/mL |
| Ketamina cloridrato | Hospira, Inc | NDC 0409-2051-05 | 100 mg/mL |
| Graffe chirurgiche | AutoClip® Sistema, Fine Science Tool | 12020-00 | |
| Siringa da insulina | BD | 329461 | 1/2 CC, siringa da insulina U-100 a basso dosaggio |
| Trocar | Innovative Research of America | MP-182 | |
| Microscopio | Carl Zeiss Primo Star | 415500-0010-001 | Germania |
| Punzone per l'orecchio | Fisher Scientific | 13-812-201 | |
| Testosterone ELISA per ratto/topo kit | IBL | B79174 | |
| Kit ELISA DHT | Alpha Diagnostic International | 1940 | |
| Ultra glucometro One touch | Life Scan, Inc. | ||
| Strisce di prova ultra con un solo tocco | Life Scan, Inc. | ||
| Eppendorf tubo | Fisher Scientific | 05-402-18 | |
| Lama di rasoio | Fisher Scientific | 12-640 | |
| Clidox | Fisher Scientific | NC0089321 | |
| sottopiede chirurgico | Fisher Scientific 50587953 | Produttore: Andwin Scientific 56616018 | |
| Betadine Soluzione antisettica | Walgreens | ||
| 3M Vetbond (n-butil cianoacrilato) | 3M Scienza. Applicato alla vita |
Riferimenti
- Palomba, S., de Wilde, M. A., Falbo, A., Koster, M. P., La Sala, G. B., Fauser, B. C. Pregnancy complications in women with polycystic ovary syndrome. Hum. Reprod. Update. 21 (5), 575-592 (2015).
- Doherty, D. A., Newnham, J. P., Bower, C., Hart, R. Implicati....
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Ristampe e permessi
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